女性HPV感染与宫颈癌前病变的相关性研究

吴 涛 张瑞娜 刘倩男

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0042～0045)

流行病学调查显示[1]，宫颈癌已经成为育龄期妇女临床死亡的重要的原因之一，我国的宫颈癌发病率在98/10万，死亡率高达30.5/10万。众多研究显示[2-3]，宫颈癌的发病与人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)呈现显著相关性，在病毒对机体的不断侵染阶段，HPV病毒的感染可能会造成机体免疫微环境以及炎性反应的改变，间接促进肿瘤细胞的增殖以及进展。在病毒对机体侵染的早期，机体可通过与病毒的免疫抑制性作用消除病毒，少数患者由于病毒的持续性增殖，可能会造成宫颈上皮细胞的癌变。而HPV高危亚型的持续性感染是造成患者癌前病变的重要原因[4]。通过对患者的HPV的早期筛查，对于患者的癌前病变的早期确认具有重要意义。世界卫生组织已经明确，HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68的感染与癌前病变显著相关，尤其以HPV16、18的感染为癌前病变的重要危险因素[5]。本研究通过对女性HPV感染与宫颈癌前病变相关性研究，为临床诊断提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采取前瞻性研究，以2019年1月至2020年12月进行宫颈活检的112例患者作为研究对象，年龄在25～49岁，平均年龄为(35.66±2.69)岁，体重指数平均为(24.55±5.69)kg/m2。对患者的宫颈组织细胞样本进行液基细胞学(1iquid based thin prepcytologytes，LCT)检测，并对患者的HPV感染进行分析。所有研究对象均签署知情同意，同时通过我院伦理委员会论证。

1.2 研究方法

1.2.1 样本采集 使用棉签于患者的宫颈口部位进行逆时针刮取采样，采样取3次，停留时间为10 s，将样本置于细胞保存液的收集瓶中进行保存。

1.2.2 宫颈组织细胞样本经液基细胞学检测 采用达城TCT检测仪对以上样本进行检测。将以上样本进行3500 r/min离心15 min后，使用样本吸取机对样本进行混悬，随后使用比重液对患者的以上混悬液继续离心，使用样本吸取机对富集于试管底部的细胞进行收集，并在振荡器的作用下，重新使细胞处于混悬状态。将以上液体置于液基薄层细胞自动制片机中，随后启动染色系统，在液基薄层细胞自动制片机进行巴氏染色，染色结束后，对以上玻片进行二甲苯处理后，保证玻片的湿润状态，使用中性树胶进行封固。采用2001年的TBS细胞分类标准[6]，将患者分为无细胞学改变、炎性细胞反应以及宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者。

1.2.3 HPV亚型诊断 采用PCR体外扩增以及DNA芯片对以上样本进行HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亚型诊断。具体检测方法为对以上样本DNA进行提取后，按说明书配置成20 μl反应体系，95 ℃30 s进行变性，37 ℃条件下行RT-PCR退火15 min，85 ℃的条件下维持15 s延伸后终止。在37 ℃条件下行RT-PCR 15 min，在85 ℃的条件下维持15 s后终止。使用DNA芯片对HPV亚型进行诊断。

1.2.4 HPV DNA载量分析 采用实时定量PCR扩增仪(厂家：上海透景宏石，型号SLAN-96s)实时荧光定量PCR方法对最大吸收波长为495 nm进行HPV DNA载量的分析。

1.3 观察指标

1.3.1 不同HPV感染患者的宫颈病变情况 分别对无细胞学改变、炎性细胞反应以及宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的HPV感染情况进行比较。

1.3.2 不同宫颈病变患者的HPV感染亚型情况 分别对无细胞学改变、炎性细胞反应以及宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的HPV亚型情况进行比较。

1.3.3 不同宫颈病变患者的HPV感染亚型病毒载量 分别对无细胞学改变、炎性细胞反应以及宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的HPV16、18、31、45的病毒载量之间的差异进行比较。

1.3.4 宫颈CINⅠ～Ⅲ病变与HPV感染以及HPV16感染的相关性 采用spearman相关性分析，对宫颈CINⅠ～Ⅲ病变与HPV感染以及HPV16感染的相关性进行分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0 软件包进行统计学分析，计量数据以平均值±标准差表示，采用t检验进行比较。计数数据采用[(n)%],表示，采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈病变及HPV检测结果

经液基细胞学检测发现，45例无细胞学改变，49例炎性细胞反应，18例宫颈Ⅰ～Ⅲ病变。PCR检测发现，22例HPV感染，其中15例HPV16感染、5例HPV18感染、2例其他。

2.2 不同HPV感染患者的宫颈病变分析

通过对不同HPV感染患者的宫颈病变分析，宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的HPV感染率显著高于无细胞学改变、炎性细胞反应患者(χ2=46.821，P=0.000)，见表1。

表1 不同HPV感染患者的宫颈病变分析(例，%)

2.3 不同宫颈病变患者的HPV感染亚型情况比较

通过对不同宫颈病变患者的HPV感染亚型情况比较，宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者主要以HPV16感染为主(χ2=46.821，P=0.000)，见表2。

表2 不同宫颈病变患者的HPV感染亚型情况比较(例，%)

2.4 不同宫颈病变患者的HPV感染亚型病毒载量分析

无细胞学改变与宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的HPV16的病毒载量之间的差异不存在统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 不同宫颈病变患者的HPV感染亚型病毒载量分析

2.5 宫颈CINⅠ～Ⅲ病变与HPV感染以及HPV16感染的相关性

宫颈CINⅠ～Ⅲ病变与HPV感染以及HPV16感染呈现正相关，差异存在统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 宫颈CINⅠ～Ⅲ病变与HPV感染以及HPV16感染的相关性

3 讨论

宫颈癌是临床妇科的一种常见肿瘤，发生于女性生殖系统，其发病率与病死率均较高[7]，据有关统计[8]，在发展中国家宫颈癌在女性恶性肿瘤的发病率中仅次于乳腺癌，死亡率仅次于乳腺癌与肺癌，我国每年新发病例约有10万，占世界新发病例的1/5[9]。宫颈癌早期筛查可早期发现病例，积极治疗，对于提高宫颈癌患者的生活质量及生存率均具有重要意义[10]。在对患者的诊断过程中，人类乳头状病毒(HPV)的检查是临床早期鉴别宫颈病变患者的重要微生物之一，目前临床发现的HPV病毒共计200多种亚型[11]，根据病毒的致病程度可将其分为低危型以及高危型，绝大多数HPV病毒均处于较低危状态，其中至少有27种HPV病毒的感染存在潜在的致癌风险，可造成临床恶性肿瘤的增生。临床研究显示，90%的宫颈癌均是由HPV病毒的持续性感染造成的[12]，而HPV16的感染率可高达40%～60%。HPV16是最为重要的HPV亚型，但是多数的研究显示[13-14]，HPV病毒的感染呈现显著的地域性，在我国的临床分析中，HPV16感染与患者的宫颈鳞癌密切相关，HPV18的感染与宫颈腺癌相关。

本研究中，通过对患者的宫颈癌病变的HPV病毒感染情况分析，宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的HPV的感染率达到63.64%，与以往的研究一致[15]。宫颈组织细胞样本经液基细胞学检测是临床较为常见的检测手段，主要用来对患者的宫颈上皮内瘤变的筛查，对于宫颈癌患者的早期诊断具有重要的意义[16]。本研究中，通过对宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的分型比较，患者的HPV16的感染率达到了80%，而在病毒不同载量的研究中，由于样本量较小，仅能看到患者的HPV16感染患者的无细胞学改变与宫颈CINⅠ～Ⅲ病变患者的差异不存在统计学意义。赵敏等[17]通过对患者的病毒载量与宫颈病变的相关性分析发现，在对患者的LCT检查中，HPV16、18、45、31的病毒载量与宫颈CINⅠ～Ⅲ病变的相关性不显著。目前对于HPV病毒载量的研究尚未形成统一的标准[18]，该指标的大小与样本中宫颈脱落细胞的数量相关，但是在对样本的采集过程中，即使采取相同的手法进行采集，但受到病毒持续性或者反复性的感染，也会造成患者的宫颈CINⅠ～Ⅲ病变载量的不稳定性。虽然HPV感染是造成患者的癌前病变的重要原因，但是宫颈癌变并不是造成疾病的唯一原因[19]，大多数育龄期妇女在感染HPV后均会自行消退，只有2%～3%的患者在感染HPV后会逐步发展为宫颈癌[20]。在宫颈癌的发展过程中，HPV感染与性功能紊乱、性生活过早、多孕多产以及不良生活方式有关，综合作用进而造成患者宫颈癌疾病进展。在宫颈癌疾病的疾病进展中，CINⅢ被认为是癌前病变，同时也是宫颈浸润癌，所以在疾病的早期，针对CINⅠ～Ⅲ的患者，及时进行HPV诊断，通过对患者的早期诊断以及干预，对患者的治疗以及预后具有重要的意义。

通过本研究的结果，提示在对患者进行宫颈组织细胞样本经液基细胞学检测的同时，针对较高风险的患者及时开展HPV感染监测，可在一定程度上降低患者的HPV重复检查次数，提升诊断效能。

综上所述，女性HPV感染与宫颈癌前病变显著相关，在对患者的细胞学形态检查的基础上，联合HPV检查，对于宫颈癌前病变诊断具有重要意义。