CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织中的表达及其临床意义

李 慧 张金良

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0007～0010)

肝癌是一种发生于肝脏的恶性肿瘤，早期无典型症状，待患者出现发热、肝区疼痛、乏力等明显症状时多已进入中晚期，甚至发生多处转移，直接威胁患者生命[1-2]。肝癌的治疗原则在于早确诊、早治疗，以阻止肿瘤持续增殖或侵袭，延长患者生存时间。手术为主的综合治疗是治疗肝癌的重要方案，能够提高患者生存率，但临床长期随访发现，仍有部分患者出现复发转移，临床迫切需要寻找到新的分子靶点，以便于早期预测肝癌的侵袭转移，更好地改善患者预后[3-4]。细胞紧密连接蛋白1(CLDN1)为细胞紧密连接的骨架，能够反映细胞紧密连接的强度及选择性，且其表达存在较高组织特异性，在不同组织内含量存在一定差异。相关研究显示[5]，细胞紧密连接蛋白在肿瘤增殖、转移方面存在重要作用。Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)则为Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶家族新成员，能够参与肿瘤基底细胞膜、细胞外基质降解，与肿瘤侵袭及转移可能存在一定关系[6]。鉴于此，本研究分析CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织中的表达及临床意义，旨在为临床提供参考。报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1月至2022年3月我院收治的79例肝癌患者作为研究对象，研究经医学伦理委员会批准。男性42例，女性37例；年龄42～71岁，平均年龄(56.89±5.14)岁；体质量指数18.9～28.3 kg/m2，平均体质量指数(24.19±1.75)kg/m2；Child-Pugh分级：45例A级，34例B级。纳入标准：均经病理确诊为肝癌；采集标本前未接受放化疗；精神状态正常；患者及家属签署知情同意书。排除标准：继发性肝癌；肝肾功能衰竭；合并其他恶性肿瘤；存在急慢性感染；存有凝血系统缺陷。

1.2 方法

所有肝癌患者均行手术为主的综合治疗，术中采集肝癌病理标本，并相应采集癌旁正常肝组织标本作为参考。所有标本均开展免疫组化法检测：CLDN1：组织切片后于干燥箱内烤片30 min，温度设置为60 ℃，经脱蜡及水化后，以PBS冲洗3 min，单次5 min，之后将玻片泡入抗原修复液内，修复后PBS再次冲洗3次，单次5 min；以3%过氧化氢去离子水孵育10 min，PBS冲洗及时间同上；加入一抗，室温下在湿盒内孵育2 h，再次PBS冲洗；加入二抗，室温下在湿盒内孵育30 min，再次PBS冲洗；DAB染色，显微镜下观察；自来水冲洗，经苏木精复染、脱水等处理后封片。TMPRSS4：切片经柠檬酸盐缓冲液微波抗原修复后，按TMPRSS4抗体工作浓度1∶100进行一抗滴加，并于室温下孵育60 min，经PBS冲洗3次，单次5 min，再行二抗温室孵育30 min，再次PBS冲洗后，DAB显色，苏木精对比染色后显微镜下观察。结果判断：每张切片随机选择10个高倍镜视野，由高年资的病理科医师进行判断；定量评分标准为：着色细胞比例<1/3为1分，着色细胞比例1/3～2/3为2分，着色细胞比例>2/3为3分；无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分；依据两者评分之和进行判定表达情况，阴性为0～3分，阳性为4分级以上。

1.3 观察指标

(1)CLDN1与TMPRSS4表达情况：比较CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织及癌旁组织内表达情况。(2)CLDN1表达与临床病理特征间关系：分析CLDN1表达与肝癌患者年龄、性别、体质量指数、肿瘤大小、肿瘤分化、T分期、N分期、M分期、甲胎蛋白(AFP)水平间的关系。AFP于术前采集2组3 mL空腹静脉血检测。(3)TMPRSS4表达与临床病理特征间关系：分析TMPRSS4表达与肝癌患者年龄、性别、体质量指数、肿瘤大小、肿瘤分化、T分期、N分期、M分期、AFP水平间的关系。(4)CLDN1表达、TMPRSS4表达与预后关系：比较不同CLDN1表达、TMPRSS4表达肝癌患者3年生存率差异。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 CLDN1与TMPRSS4表达情况

肝癌组织内CLDN1阳性表达率、TMPRSS4阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组CLDN1与TMPRSS4表达情况对比(例，%)

2.2 CLDN1表达与临床病理特征间关系

不同CLDN1表达肝癌患者肿瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 CLDN1表达与临床病理特征间关系(例，%)

2.3 TMPRSS4表达与临床病理特征间关系

不同TMPRSS4表达肝癌患者肿瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 TMPRSS4表达与临床病理特征间关系(例，%)

2.4 CLDN1表达、TMPRSS4表达与预后关系

CLDN1阳性表达患者3年存活率为64.41%(38/59)，低于LDN1阴性表达患者的90.00%(18/20)，差异有统计学意义(χ2=4.741，P=0.030)；TMPRSS4阳性表达患者3年存活率为64.52%(40/62)，低于TMPRSS4阴性表达患者的94.12%(16/17)，差异有统计学意义(χ2=4.321，P=0.038)。

3 讨论

肝癌病因复杂，与临床遗传、病毒性肝炎、重度饮酒等多种因素长期相互作用相关。肝脏为人体代谢重要器官，且血运极为丰富，一旦发生病变不仅对机体正常代谢造成严重影响，肿瘤细胞也易发生转移，造成受累器官功能障碍，降低整体生存率[7-8]。临床对于肝癌多采取以手术为主的综合方案进行治疗，先切除肿瘤组织，再辅以相应抗癌手段，能够最大限度清除体内肿瘤细胞，避免术后复发及转移[9-10]。但长期随访发现，仍有部分患者预后偏差，还需寻找能够良好预测预后的相关标志物，为肿瘤治疗提供指导。

CLDN家族与肿瘤存在密切关系，其主要作用为构成紧密连接蛋白，从而隔离细胞内部及环境，以维持结构及内环境稳定。CLDN1则为CLDN家族重要成员，临床认为当CLDN1处于异常表达状态时，可破坏细胞紧密连接结构，使得细胞疏松，或引起细胞极性丧失，促使肿瘤细胞转移[11-12]。TMPRSS4则是一种较新的Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白，在小肠、肾、膀胱、食管等多种组织中均存在异常表达，且在乳腺癌、胰腺癌及甲状腺癌等多种肿瘤组织内存在高表达情况，提示TMPRSS4与肿瘤侵袭转移可能存在一定关系[13-14]。随着临床深入研究发现，TMPRSS4处于高表达状态时，可降低E-钙黏蛋白表达，促使E-钙黏蛋白介导的细胞间黏连丧失，从而加速上皮间质转化，使得上皮细胞极性消失、标志物表达丢失，从而增强迁移活动能力[15]。但临床关于CLDN1、TMPRSS4在肝癌组织中的表达及意义尚未能够明确。本研究结果显示，肝癌组织内CLDN1阳性表达率、TMPRSS4阳性表达率高于癌旁组织，不同CLDN1表达及不同TMPRSS4表达肝癌患者肿瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差异有统计学意义(P<0.05)；CLDN1阳性表达患者3年存活率低于CLDN1阴性表达患者，TMPRSS4阳性表达患者3年存活率低于TMPRSS4阴性表达患者。提示CLDN1、TMPRSS4在肝癌组织中呈高表达，且与肿瘤分期、肿瘤大小、分化程度存在密切关系，临床或可以此为靶点进行治疗，以改善患者预后。其原因为CLDN1、TMPRSS4高表达提示肿瘤生长、侵袭及转移能力强，而肿瘤较大、肿瘤分期高、低分化程度则为肿瘤生长、侵袭及转移能力强的表现，故肝癌患者体内CLDN1、TMPRSS4呈高表达。同时，一旦CLDN1、TMPRSS4呈高表达则提示肿瘤恶性程度高，术后复发转移风险高，故预后普遍较差。

综上所述，肝癌组织内CLDN1、TMPRSS4呈高表达，其中肿瘤较大、肿瘤分期高群体阳性表达率更高，且CLDN1、TMPRSS4高表达患者预后较差，临床需采取针对性干预措施，以提高整体生存率。