食源性疾病诺如病毒检测情况分析

董桂花，王爱新，焦宪军

济南市章丘区疾病预防控制中心微生物检验科，山东济南 250200

食源性疾病指食品中致病因素进入人体引起的感染性、中毒性等疾病，包括食物中毒[1]。 食源性疾病常见的有食物中毒、肠道传染病、人畜共患传染病、寄生虫病以及化学性有毒有害物质所引起的疾病。食源性疾患的发病率居各类疾病总发病率前列，是当前世界上最突出的公共卫生问题。 诺如病毒临床上又叫作诺瓦克样病毒， 是引发非细菌性急性胃肠炎最为常见的病毒之一，归于杯状病毒科， 具有高度的传染性和快速传播的能力，10~100 个病毒即可引发感染，是全球急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要致病源，该病毒的传染源多为患者、病毒携带者以及隐形感染者，传播途径包括食物、水以及人类间的密切接触等，人群普遍易感，多发于企业、学校及农村等，对公众健康的危害巨大。出现聚集性发病需要早发现，早调查，早控制，早处置，控制大规模感染的发生。 2021 年1—12 月，在食源性疾病事件中，共有7 起事件检出诺如病毒， 通过相关人员的早处置，及时进行控制，避免了大规模感染的发生。鉴于此，文章对检测情况进行了详细的分析和探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在食源性疾病事件中， 共有12 起事件经食品安全风险监测科流调人员调查怀疑诺如病毒感染，对相关人员、患者、有症状者进行肛拭子采样，通过实时荧光定量PCR 检测诺如病毒。 共有7 起事件检出诺如病毒，共采集肛拭子样品86 份，检出诺如病毒阳性样品52 份。 食源性疾病主动监测急性胃肠炎病例的定义：主诉由食品或是怀疑由食品引发的，以腹泻症状为主的，每天排便在3 次或是超出3 次的，且粪便性状出现异常（即出现稀便、黏液便或是脓血便等）的就诊病例。

采样原则：①各个哨点医院需要选取能够符合于病例定义的就诊病例，对其各类信息、样本等进行采集，同时，还需要充分考虑到腹泻病例的高发季节、每周样本的均匀分布等相关因素，分配好样本量：在11～3 月份，每月不可以低于20 份， 在其余月份， 每月不可以低于10 份。 ②对于非儿童医院，需要着重在腹泻病门诊、急诊科、消化内科等相关的科室选取病例，尽可能地减少儿科的采样总数。 ③在出现下列情况时，需要优先选取且病例总数不会被任务量所限制，即：重症患者；多人同时就诊；患者之间具有密切联系（即亲朋、同学等）；具有共同的暴露史。

信息采集：对于个案调查的内容，其主要包括病例的各项信息（即姓名、年龄、家庭地址、发病时间等）、临床症状及表现（即呕吐、发热等）、流行病学史（即食物暴露情况）等。患者及（或）家属均知晓研究内容，且自愿参与；本研究于本院伦理委员会授权后实施。

1.2 方法

实时荧光PCR 法。 对诺如病毒（GⅠ、GⅡ群）高度保守区域设计特异引物和探针，通过分别以FAM、HEX标记的诺如病毒GⅠ、GⅡ探针，在同一反应体系中同时检测诺如病毒GⅠ、GⅡ群。 探针为包含5’端标记发光基团和3’端标记淬灭基团的寡核苷酸序列，若探针完整，发光基团所发出的荧光信号被淬灭基团吸收，检测不到信号。 在PCR 扩增进程中，与模板特异性结合的探针会被Taq 酶切断，发光基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。 利用扩增仪对PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

1.3 仪器与试剂

1.3.1 仪器 罗氏核酸提取仪，罗氏核酸扩增仪。

1.3.2 试剂 生科原 诺如病毒（GⅠ、GⅡ群）双重核酸检测试剂盒（荧光PCR 法），有效期内使用。

1.4 质量控制

1.4.1 流行病学的质量控制 ①需要更为严格地统一病例的诊断标准，避免引发选择性偏倚；②需要更为严格地培训、教育调查人员，要求调查人员需要参照统一的标准与方法询问调查对象； ③借助EPI info 与Excel 2020 软件，给疫情构建数据库，对采集到的各类资料进行检查、核实，以保障其完整性、准确性。

1.4.2 实验室的质量控制 ①实验室检测方法需要更为规范、标准，统一检测的方式与试剂，防止相关信息出现偏倚；②注意防止实验室发生交叉污染、实验标本出现反复冻融；③应用手工方法进行核酸提取，每次进行PCR实验均需要设置好阴性对照、阳性对照、提取对照。

2 结果

7 起食源性疾病事件中诺如病毒感染检出情况，按照事件采集时间先后简述。 第1 起，采集、检测时间是2021 年1 月19 日，采集发病人员：部队服役人员，共采集肛拭子样品27 份，检出诺如病毒14 份，检出基因群均是GⅡ群。 第2 起，采集、检测时间是2021 年3 月25日，采集发病人员：幼儿园小朋友，共采集肛拭子样品8份，检出诺如病毒7 份，检出基因群均是GⅡ群。 第3起，采集、检测时间是2021 年5 月11 日，采集发病人员：学校高中生，共采集肛拭子样品18 份，检出诺如病毒11 份， 检出基因群中8 份GⅡ群，3 份GⅠ群。 第4起，采集、检测时间是2021 年5 月26 日，采集发病人员：学校大学生，共采集肛拭子样品14 份，检出诺如病毒12 份，检出基因群均是GⅡ群。第5 起，采集、检测时间是2021 年6 月9 日，采集发病人员：幼儿园小朋友，共采集肛拭子样品7 份，检测诺如病毒3 份，检出基因群均是GⅡ群。 第6 起，采集、检测时间是2021 年6 月27 日，采集发病人员：工地工人，共采集肛拭子样品3份，检出诺如病毒2 份，检出基因群均是GⅡ群。 第7起，采集、检测时间是2021 年12 月25，采集发病人员：幼儿园小朋友，共采集肛拭子样品9 份，检出诺如病毒3 份，检出基因群均是GⅡ群。7 起事件共采集肛拭子样品86 份，有52 份样品检出诺如病毒。

诺如病毒感染多见于幼儿园、学校、部队、工地等集体单位或场所，聚集性或暴发性发病，发病人数较多，检出率较高，需要早发现、早报告、早诊断、早处置，以控制疫情的发展。 从发病时间来看，诺如病毒感染多发生在上半年。发生食源性疾病事件，需要根据发病时间、症状及流行病学调查情况， 及时判断是否为诺如病毒感染，以及早处置疫情。 从检出基因群看，该年度共检出诺如病毒感染样品52 份，有49 份基因群是GⅡ群，有3 份基因群是GⅠ群。

3 讨论

诺如病毒又称诺瓦克病毒，是人类杯状病毒科中诺如病毒属的一种病毒，是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺如病毒变异快、环境抵抗力强、感染剂量低，感染后潜伏期短、排毒时间长、传播途径多样、全人群易感，具有高度传染性和快速传播能力[2]。诺如病毒的潜伏期一般在24～48 h，其中最短的潜伏期为12 h，而最长的潜伏时间为72 h。 这种疾病的感染比较突然，临床症状主要表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻等，对于患儿而言，其症状主要为呕吐，而成人患者的症状则主要为腹泻，一般患者在24 h 内的腹泻次数可高达8 次。 粪便一般为稀水便与水样便，并不存在黏液脓血[3]。 而腹泻、呕吐症状一般可以持续12～24 h，疾病的病程在1～7 d。诺如病毒根据基因特征被分为6 个基因群，GⅠ、GⅡ群是引起人类急性胃肠炎的两个主要基因群。诺如病毒感染引发的公共卫生问题已越来越受到国际科学界的关注[4-5]。 2014 年发表的一项系统综述和Meta 分析，纳入了48 个国家报道的175 篇文献， 结果发现1/5 的急性胃肠炎病例是由诺如病毒感染引起[6-7]。

诺如病毒感染多聚集性、暴发性发病。聚集性疫情：3 d 内，同一学校、托幼机构、医疗机构、工厂、建筑工地、游轮、社区等集体单位或场所，发生5 例及以上有流行病学关联的诺如病毒感染病例，其中至少2 例是实验室诊断病例。 暴发疫情：7 d 内，同一学校、托幼机构、医疗机构、工厂、建筑工地、游轮、社区等集体单位或场所，发生20 例及以上有流行病学关联的诺如病毒感染病例，其中至少2 例是实验室诊断病例。实验室确诊的诺如病毒感染暴发事件，符合《国家突发公共卫生事件相关信息报告管理工作规范（试行）报告》标准的诺如病毒感染暴发，属地疾病预防控制中心应通过突发公共卫生事件管理信息系统进行相关信息的报告[8-9]。

诺如病毒感染的传播途径多样， 有经食物传播、经污染水源传播，经人传人传播。 食源性传播是通过食用被诺如病毒污染的食物进行传播，污染环节可出现在感染诺如病毒的餐饮从业人员备餐和供餐中，也可出现在食物生产、运输、分发过程中[10-11]。 经水传播可以经市政供水、井水、桶装水等饮用水被诺如病毒污染所致。经人传人可通过粪口途径传播、间接接触被排泄物污染的环境传播。 一起暴发事件可有多种传播途径感染[12-13]。

诺如病毒感染的预防控制措施主要是采用非药物性预防，主要是控制传染源，切断传播途径，对易感者进行宣传、健康教育[14]。 控制传染源：对诺如病毒感染人员进行隔离，规范管理是阻断传播和减少环境污染的有效手段[15-16]。 从事食品操作岗位病例及隐形感染者需要连续2 d 粪便或肛拭子诺如病毒核酸阴性后方可上岗。 切断传播途径：诺如病毒感染人员进行隔离；对患者呕吐物、排泄物等污染物污染的环境物体表面、生活用品、食品加工工具、生活饮用水等进行消毒；污染的水源，应增加投氯量等方式进行消毒，经卫生学评价合格后方可启用相关水源[17-18]。 对易感者进行健康宣传：疫情流行季节，政府及卫生、教育、宣传等部门要高度重视，密切合作[19-20]。利用广播、电视、报纸、网络、宣传单等多种方式，开展诺如病毒防控知识宣传，人人提高防控意识，养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开、避免交叉污染等健康生活习惯。

综上所述，在食源性疾病暴发事件中，人员多是聚集发病，排除食物中毒后，症状、体征符合诺如病毒感染的患者，需要尽快采集相关人员的肛拭子样品，并对其进行诺如病毒检测，以早发现，早治疗，早控制，早处置，控制疫情的发展。本次对于腹泻病例粪便标本的采集只是依据食源性疾病的主动监测网络，样本代表性具有一定的不足，今后需要持续扩大样本量，由更多的角度对诺如病毒感染进行分析、研究。