免疫学指标联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用

于红博

作者单位：132011 吉林吉林，吉林市中心医院检验科

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种全身性结缔组织疾病，是由于免疫系统对正常关节组织进行错误攻击所导致的关节炎症反应，以慢性、破坏性、进展性多关节功能障碍为主要特征，四肢小关节最常被侵犯。患者于晨起时关节有僵硬感，晨僵持续时间与病情活动程度密切相关，同时伴随关节疼痛、肿胀、畸形等症状，在进行穿衣、洗漱、行走等日常活动时可受到不同程度影响，甚至累及血液、神经、心脏、肺等全身多器官系统，严重降低患者的生活质量［1］。RA 是一种世界性疾病，在全球发病率约为1.0%，我国有约500 万名RA 患者。近年来，受环境、人民生活方式和饮食结构等多方面因素影响，RA 发病率逐年升高，已成为导致我国人群丧失劳动力和致残的主要原因［2-3］。RA 发病隐匿，病情反复迁延，可造成关节永久性破坏，因此早期诊断和治疗对提高患者康复效果具有重要意义。RA 在早期无明显临床表现，根据体格检查、关节X线等结果进行诊断准确率不高，很容易出现误诊和漏诊，使患者错失最佳治疗时机，造成病情延误，加大临床治疗难度，影响患者预后［4］。

类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是RA 一种常用检测指标，具有较高的敏感度，但特异度不高，在早期诊断和治疗中应用效果并不理想，因此，临床需寻找敏感度高和特异性强的检测指标来对RA 进行早期诊断，可为后续治疗方案的确定提供参考依据。本研究以2021 年1—12 月在吉林市中心医院就诊的84 例RA 患者和84 例非RA 自身免疫疾病患者作为研究对象，分析RF、抗环瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide，CCP）及抗角蛋白抗体联合检测对RA 的诊断效果，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象与分组 选择2021年1—12月本院收治的84 例RA 患者作为RA 组，另外选择同期84 例非RA 自身免疫疾病患者作为自身免疫疾病组，其中系统性红斑狼疮22 例（占26.19%），原发性干燥综合征10 例（占11.90%），痛风性关节炎30 例（占35.71%），结缔组织病患者8 例（占9.52%），骨性关节炎14 例（占16.67%）。

1.1.1 纳入标准 ① RA 组均符合RA 诊断标准［5］；② 年龄18～80 岁；③ 入选对象认知清晰，可配合开展检测工作；④ 在对研究知情的基础上自愿参与，签署书面同意书。

1.1.2 排除标准 ① 伴有重度肝、肾、心脑血管原发性疾病者；② 存在精神类疾病、认知功能障碍或意识不清者；③ 妊娠期、哺乳期女性；④ 临床资料部分缺失者。

1.1.3 伦理学 本研究符合医学伦理学标准，并经本院伦理审批（审批号：2021030），所有检测均获得过患者或家属知情同意。

1.2 检测指标及方法 采集所有患者清晨空腹肘静脉血3～4 mL，以4 000 r/mim（离心半径13.5 cm）离心15 min，分离血清于-20 ℃保存。

1.2.1 RF检测 使用日立7600-110全自动生化分析仪（上海执诚生物技术有限公司）和配套试剂，采用免疫散射比浊法检测RF，检测值＞20 kU/L 为阳性。

1.2.2 抗CCP检测 采用德国欧蒙公司抗体免疫球蛋白G（immunoglobin G，IgG）检测试剂盒，严格遵照试剂说明书以及实验室操作规程执行，将样本血清用1∶101 缓冲液稀释，加入微孔，室温孵育60 min，用稀释后的清洗缓冲液洗涤3 次，去除残留清洗液后添加酶结合物100 μL，室温孵育30 min，重复清洗。避光于每个微孔中加入底物液，30 min 后滴加100 μL 反应终止液，检测结果为≥25 kU/L 为阳性，反之则为阴性。

1.2.3 抗角蛋白抗体检测 采用德国欧蒙公司生产的免疫荧光试剂盒（间接免疫荧光法），将待测血清用洗涤液以1∶10 稀释，将抗角蛋白抗体抗原片加入其中浸泡5 min（注意避免产生气泡），于室温孵育30 min，确保抗原基质与标本充分接触，加入荧光标记的二抗，在盖玻片上滴加封片剂，将多余液体擦除，完成封片后于荧光显微镜下观察结果，严格按照说明书进行检测，荧光显微镜下角质层显示有清楚片状（层状）荧光模式则为阳性。

1.3 观察指标 ① 统计RF、抗CCP 及抗角蛋白抗体单独检测RA 的阳性率。② 计算单一抗体检测对RA的诊断效能：阳性检出率＝（真阳性+假阳性）/（真阳性+假阳性+假阴性+真阴性）×100.00%，敏感度＝真阳性/（真阳性+假阴性）×100.00%，特异度＝真阴性/（假阳性+真阴性）×100.00%，阳性预测值＝真阳性/（真阳性+假阳性）×100.00%，阴性预测值＝真阴性/（假阴性+真阴性）×100.00%，诊断符合率＝（真阳性+真阴性）/（真阳性+假阳性+假阴性+真阴性）×100.00%。③ 比较RF+抗角蛋白抗体、RF+抗CCP、抗角蛋白抗体+抗CCP、RF+抗CCP+抗蛋白抗体的阳性检出率。④ 检测超敏C-反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP）和红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR），比较RF、抗CCP 及抗角蛋白抗体阳性和阴性患者两项指标水平的差异。

1.4 统计学方法 采用SPSS 24.0 统计软件分析和处理数据，以均数±标准差（±s）描述符合正态分布的计量资料，采用t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 两组性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），有可比性。见表1。

表1 RA 组和自身免疫疾病组的一般资料比较

2.2 RF、抗CCP 及抗角蛋白抗体对RA 的检出结果比较 RF 检出RA 93 例，抗CCP 检出RA 69 例，抗角蛋白抗体检出RA 68 例，3 种检测方法对RA 的检测结果见表2。

表2 RF、抗CCP 及抗角蛋白抗体对RA 的检出结果

2.3 单一指标检测对RA 的诊断效能 单一抗体检测中，RF 的敏感度为89.29%，高于抗CCP（75.00%）和抗角蛋白抗体（70.24%）；RF 的特异度（78.57%）低于抗CCP（92.86%）和抗角蛋白抗体（89.29%）；相较于RF（80.65%）和抗角蛋白抗体（86.76%），阳性预测值最高为抗CCP（91.30%）。见表3。

表3 单一抗体检测对RA 的诊断效能

2.4 各指标组合联合检测对RA 的阳性率比较RA 组联合检测中以RF+抗CCP+抗角蛋白抗体的阳性率最高（89.29%），明显高于其他指标组和联合检测，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表4。2.5 RA 组各指标检测RA 阳性和阴性患者hs-CRP与ESR 水平比较 RF、抗角蛋白抗体阳性和阴性RA 患者的hs-CRP 与ESR 水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；抗CCP 阳性RA 患者的hs-CRP和ESR水平明显均高于抗CCP阴性RA患者（均P＜0.05）。见表5。

表4 各指标联合检测的阳性率比较

表5 RA 组各指标阳性和阴性患者hs-CRP与ESR 水平比较（±s）

表5 RA 组各指标阳性和阴性患者hs-CRP与ESR 水平比较（±s）

注：RA 为类风湿关节炎，hs-CRP 为超敏C-反应蛋白，ESR 为红细胞沉降率，RF 为类风湿因子，CCP 为环瓜氨酸肽；与同指标阳性比较，aP＜0.05

组别 例数（例） hs-CRP（mg/L） ESR（mm/h）RF 阳性 75 24.57±4.51 42.12±4.06阴性 9 22.87±4.32 39.98±4.54抗CCP 阳性 63 25.67±5.19 45.87±5.63阴性 21 16.24±4.16 a 31.08±5.17 a抗角蛋白 阳性 59 23.67±5.17 42.19±7.88抗体 阴性 25 22.64±5.08 40.74±5.33

3 讨论

RA 患者通常于40～60 岁发病，目前其病因和发病机制尚不明确，临床研究显示，遗传和自身免疫反应为RA 发生的关键因素，存在微生物感染、吸烟、职业暴露等人群患病风险会大幅提高［6-7］。RA可影响患者双手近端指间关节、掌指关节、腕关节、趾关节、膝关节等，目前尚无彻底根治手段，但有研究数据显示，RA 发病早期存在短暂的治疗窗口期，在这一时间段中关节滑膜炎症的改变是可逆的，通过早期规范化治疗，可缓解患者的临床症状，提高关节功能，避免出现关节畸形和功能丧失，提升患者预后和康复效果［8-10］。

目前对RA 的诊断方法主要为临床表现、关节X 线检查和RF 水平检测，患者早期临床症状不明显，对病程小于半年的患者，关节X 线可能并无明显异常，因此难以诊断。RF 是一种变性的免疫球蛋白，是人类最早发现的RA 相关抗体，正常参考值范围为小于20 kU/L，主要存在于RA 患者的血清和关节液中，也可出现在干燥综合征、系统性红斑狼疮等其他各种自身免疫系统紊乱性疾病患者中，临床可作为协助诊断RA 的指标，与其他类型关节炎以及可能引起关节疼痛和四肢僵硬等症状的疾病进行区分，有70%～80%的RA患者RF检测结果为阳性，高滴度RF 阳性提示预后不良，可能引起关节侵蚀性病变，RF 敏感度较高，但特异度不高，不利于RA的早期诊断和治疗［11-12］。本研究结果显示，RF 的敏感度高于抗CCP 和抗角蛋白抗体；RF 的特异度低于抗CCP 和抗角蛋白抗体，相较于RF 和抗角蛋白抗体，抗CCP 的阳性预测值最高。

抗CCP 抗体由Schellekens 在2000 年首次人工合成并报道，其对RA 具有良好的敏感度和特异度，在患病早期即可被检测到，抗CCP 抗体阳性是侵蚀性关节损伤的一个重要标志，其主要由RA 患者机体B 细胞分泌，具有较强的特异性，当显示为高滴度阳性时则很有可能为RA，可用于疾病进展监测和预后判断，但该指标敏感度较低，漏诊风险较高［13-14］。

抗角蛋白抗体是一种常用的自身免疫性抗体，对RA 的诊断和鉴别具有较高的特异性，与疾病严重程度和活动性有紧密关系，可以先于临床表现被检测出来，对临床治疗有指导意义，但检测结果需在荧光显微镜下观察，结果容易受主观因素影响，抗CCP 和抗角蛋白抗体可作为RF 早期诊断RA 的补充检测指标［15-17］。本研究显示，RA 组各指标联合检测中，RF+抗CCP+抗角蛋白抗体的阳性率明显高于其他指标组合联合检测，表明RF、抗CCP 及抗角蛋白抗体联合检测在RA 诊断中应用优势，相较于单一检测可促进疾病早期诊断。在本研究中对RA 组各指标阳性和阴性患者的hs-CRP 与ESR 水平进行统计，结果显示RF、抗角蛋白抗体阳性和阴性患者hs-CRP 和ESR 水平比较差异均无统计学意义；抗CCP 阳性患者的hs-CRP、ESR 水平明显高于阴性患者，表明抗CCP 在评估RA 活动性方面发挥一定作用。

综上所述，RF、抗CCP及抗角蛋白抗体联合检测可提高RA 早期诊断率，为临床治疗提供科学依据。

利益冲突作者声明不存在利益冲突