不同梅毒血清学检测策略应用于梅毒诊断中的价值对比

陈俊生，张旭明

深圳市宝安区石岩人民医院 检验科，广东 深圳 518108

0 引言

梅毒由梅毒螺旋体感染引起，常表现为皮肤黏膜病变，近些年来发病率不断增加。梅毒的传播主要是通过性接触、血液传播和垂直传播[1]。目前，对于梅毒的诊治和检测方法较多，常见的有酶联免疫吸附实验（TP-ELISA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）及甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等技术，尽管具有较为广泛的开展率，但存在一定的不足[2]。TP-ELISA检查只能说明患者正在感染或曾经感染过，不能判定梅毒活动与否[3]。TPPA试剂较贵、耗时较长，不利于大批量血液的检测。TRUST易受某些传染病或自身免疫性疾病的影响。选择合适的检测方法，可提高梅毒的诊断效率，避免漏检。因此，本文对梅毒患者进行不同检测方法的比较，探讨其临床应用价值，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经患者及家属同意并签署知情同意书及医院伦理委员会批准，选取深圳市宝安区石岩人民医院2019年11月-2020年11月收治的80例梅毒患者作为观察组，50例非梅毒患者作为对照组。对照组男32例，女18例；年龄23～58岁，平均（34.02±2.12）岁。观察组男62例，女18例；年龄23～58岁，平均（34.42±2.31）岁。两组患者一般资料对比无统计学差异（P>0.05），具有可比性。

纳入标准：①临床病理诊断标准分期均参照《梅毒诊断标准》[4]；②具有自主行为能力能够主动配合医师；③无其他传染病疾病者。

排除标准：①服用过影响检测结果的药物；②存在精神疾病者；③严重的心肺肾等重要器官功能不全者。

1.2 方法

TP-ELISA试剂由英科新创（厦门）科技股份有限公司提供；TRUST试剂由上海荣盛生物技术有限公司提供；TPPA试剂由珠海丽珠试剂股份有限公司提供。

（1）TP-ELISA：将制备的血清添加至板条孔内，并放置于温度为37℃的孵育箱中慢摇60min。用洗板机进行清洗，每次5min，清洗3次，之后在每个孔径中加入酶标试剂100μL，混匀震荡，放入37℃的孵育箱中30min，取出后，添加与孔内体积等量的终止液，进行酶标仪的测定。其中测定样本的吸光度，基准为1=吸光值（样本/临界值），当结果大于基准时则为阳性，小于基准值时为阴性。

（2）TRUST：将制备好的样本取300μL加入卡片圈，抽取试剂盒中的抗原液100μL加入上述卡片圈中，充分混匀，放入水平摇床，10min，转速为100rpm/min，结束后在光线下分析结果。其中阳性：卡片圈中出现粉色絮状物，并在底部凝聚，形成凝聚物。阴性：卡片圈中心出现红色颗粒的聚集，或均匀分布于卡片底部。

（3）TPPA：将制备好的梅毒螺旋抗原放置于红色颗粒之上，在此基础上，加入含有梅毒螺旋抗体的血清，通过抗原抗体的相互反应，产生凝结现象。吸取血清反应进行有效实验，将实验班放置于振荡器上，放入37℃的孵育箱中2h，取出观察结果。阴性：孔底均匀铺满粉色凝胶颗粒，边缘有少量颗粒。阳性：孔底的红色凝胶颗粒紧缩，分布较紧密。

1.3 观察指标及评价标准

以临床病理诊断结果为金标准，分析不同方法检测的诊断价值（确诊率、误诊率以及敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值）。

诊断标准：以病理诊断结果为金标准。

阳性率=确诊人数/总人数×100%；误诊率=误诊人数/总人数×100%。

敏感性=病理证实真阳性例数/（假阴性例数+病理证实真阳性例数）×100%。

特异性=病理证实真阴性例数/（假阳性例数+病理证实真阴性例数）×100%。

阳性预测值=诊断例数/病理证实真阳性例数×100%。

阴性预测值=诊断例数/病理证实真阴性例数×100%。

1.4 统计学分析

数据录入SPSS 22.0软件中分析，计数资料用%表示，采用χ2检验，计量资料用（）表示，采用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三种检测方法对梅毒诊断阳性检测率的比较

TP-ELISA和TPPA法诊断阳性率均高于TRUST（χ2=17.644，P<0.05），但两者比较差异无统计学意义（χ2=1.344，P>0.05），见表l。

2.2 三种检测方法的诊断价值比较

TP-ELISA的敏感性及阴性预测值高于TRUST，TPPA的特异性及阳性预测值高于TPELISA及TRUST（P<0.05），见表2。

3 讨论

梅毒是一种广泛流行的性病，一般梅毒的诊断需要结合患者的病史、临床特征及梅毒抗体的检测结果综合判断，其中梅毒抗体检测是影响诊断结果的主要依据[5]。其中TP-ELISA多是通过基因重组工程合成梅毒特异性抗原包被在微孔滴定板上，检测血清中的梅毒特异性抗体是诊断梅毒螺旋体感染的依据之一[6]。但其检测的是梅毒IgM和IgG的混合抗体，梅毒IgG抗体在治愈后仍然存在较高的阳性率，甚至终生携带。TPPA是在血清中抗体与抗原发生特异反应时，可使包被梅毒螺旋体特异性抗原的颗粒发生聚集现象，抗体浓度越高明胶颗粒聚集越明显[7]。TRUST是一种非梅毒螺旋体抗原血清实验，梅毒螺旋体在破坏组织的同时释放出一组以卵磷脂为主的半抗原物质，可与梅毒螺旋体中的蛋白质相互结合，最终达到抗原的效果[8]。科学选择检测方法是梅毒诊断工作的重要部分。

本研究中，TP-ELISA和TPPA法诊断阳性率均高于TRUST（P<0.05），但两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。表明TP-ELISA及TPPA阳性诊断率较高。TP-ELISA与TPPA均是特异性梅毒螺旋体抗体的血清学试验[9]。方法简单、操作便捷快速、安全，准确度高，对梅毒患者的早期发现、早期诊断及治疗具有重要的意义，TPELISA通过抗原夹心法的原来检测血清中特异性的抗体，可通过酶标仪读取数据，减少人工读取的误差，TPPA是检测梅毒的特异性方法，通过判断载体明胶颗粒的颜色，判断梅毒的准确性，因而此技术在实验室梅毒诊断中具有可行性以及准确性[10-11]。

本研究中，TP-ELISA的敏感性及阴性预测值高于TRUST，TPPA的特异性及阳性预测值高于TP-ELISA及TRUST（P<0.05）。表明TP-ELISA及TPPA可提高对梅毒诊断的价值。TP-ELISA是梅毒螺旋体中的特异性抗体，通过在微孔板上对梅毒螺旋体特异性反应，纯化度较高，进而可提高检测的灵敏性高、阴性预测值高[12-14]。TPPA通过提取Nichols株梅毒螺旋体特异性抗原与血液中的抗梅毒螺旋体抗体结合产生凝集反应，因而其检测出的敏感性高，阳性预测值好。由于不同时期的梅毒患者检出率差异较大，通过TRUST的检测对于潜伏期患者多呈阴性，其次机体存在较多心磷脂，若患者存在其他类型疾病的存在，例如：麻风、结核、类风湿性关节炎等，也会降低诊断梅毒的灵敏性及特异性。

综上所述，相较于TRUST，TP-ELISA和TPPA法可提高对梅毒患者的检测诊断。