土茯苓总苷化学成分研究

汤迎湛，刘菊妍，江振洲，江 涛，彭红英，张陆勇, 4*

•化学成分 •

土茯苓总苷化学成分研究

汤迎湛1, 2, 3，刘菊妍3，江振洲2，江 涛1，彭红英1，张陆勇2, 4*

1. 广州白云山敬修堂药业股份有限公司，广东 广州 510130 2. 中国药科大学 新药筛选中心江苏省药效研究与评价服务中心，江苏 南京 210009 3. 广州医药集团有限公司，广东 广州 510103 4. 广东药科大学 新药研发中心，广东 广州 510006

研究土茯苓S总苷的化学成分。采用硅胶柱色谱、凝胶色谱及半制备液相色谱分离技术，对土茯苓总苷化学成分进行了系统的分离纯化。结合分离单体化合物的理化性质，通过MS、NMR和CD等波谱数据鉴定其结构。从土茯苓总苷中分离得到25个化合物，分别鉴定为土茯苓色酮A（1）、花柏色酮（2）、花旗松素（3）、北美圣草素（4）、柚皮素（5）、3′,5′,5,7-四羟基二氢黄酮（6）、高圣草素（7）、6-甲氧基柚皮素（8）、二氢山柰酚（9）、6-甲氧基橙皮素（10）、落新妇苷（11）、异落新妇苷（12）、新落新妇苷（13）、新异落新妇苷（14）、黄杞苷（15）、异黄杞苷（16）、槲皮素（17）、芹菜素（18）、高车前素（19）、山柰酚（20）、光叶菝葜苷（21）、5,7-二羟基色原酮（22）、儿茶素（23）、表儿茶素（24）和金鸡纳素Ib（25）。化合物1为新化合物，化合物2和8是首次从菝葜属植物中分离得到，化合物6～9、19和22为首次从该植物中分离得到。

土茯苓；总苷；土茯苓色酮A；花柏色酮；6-甲氧基柚皮素；二氢山柰酚；高车前素

土茯苓为百合科植物Roxb.的干燥根状茎，性味甘、淡、平，归肝、胃、脾经，具有解毒除湿、通利关节的功效，用于湿热淋浊、带下、痈肿、瘰疬、疥癣、梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛、筋骨疼痛等证[1-2]。土茯苓总苷片是由单味中药土茯苓材开发出来的选择性免疫抑制剂，能有效治疗类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）[3]。土茯苓总苷片目前已完成治疗RA的II期临床试验研究，试验结果显示，低剂量土茯苓总苷片可以有效提高RA初治患者的ACR20（美国风湿病学会规定的观察指标患者达到20%缓解）达标率，并且减少止痛药的使用，无严重不良反应。土茯苓总苷的主要活性成分为黄酮苷类，其含量大于50%，但是尚未有土茯苓总苷化学成分的研究报道。因此，本实验对土茯苓总苷进行了化学成分研究，共分离并鉴定了25个黄酮类化合物，其中化合物1为新化合物，命名为()-土茯苓色酮A，其他24个已知化合物分别鉴定为花柏色酮（sawarachromone，2）、花旗松素（taxifolin，3）、北美圣草素（eriodictyol，4）、柚皮素（naringenin，5）、3′,5′,5,7-四羟基二氢黄酮（3′,5′,5,7-tetrahydroxylflavanone，6）、高圣草素（homoeriodictyol，7）、6-甲氧基柚皮素（6-methoxy-naringenin，8）、二氢山柰酚（dihydrokaempferol，9）、6-甲氧基橙皮素（6-methoxyhesperetin，10）、落新妇苷（astilbin，11）、异落新妇苷（isoastilbin，12）、新落新妇苷（neoastilbin，13）、新异落新妇苷（neoisoastilbin，14）、黄杞苷（engeletin，15）、异黄杞苷（isoengeletin，16）、槲皮素（quercetin，17）、芹菜素（luteolin，18）、高车前素（hispdulin，19）、山柰酚（kaempferol，20）、光叶菝葜苷（smiglanin，21）、5,7-二羟基色原酮（5,7-dihydroxychromone，22）、儿茶素[(＋)-catechin，23]、表儿茶素 [(−)-epicatechin，24]和金鸡纳素Ib（cinchonain Ib，25）。其中，化合物2和8是首次从菝葜属植物中分离得到，化合物6～9、19、22为首次从该植物中分离得到。本研究初步阐明了药效物质基础，为临床用药提供了依据。

1 仪器与材料

Bruker-600型核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）；Waters Xevo G2-XS QTof型高分辨质谱仪（美国Waters公司）；UV-1780型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；Agilent 1260型液相色谱仪（美国Agilent公司）；圆二色光谱仪J-1500（日本分光公司）；制备用色谱柱YMC-Pack ODS-A（250 mm×10.0 mm，5 μm，日本YMC公司）；UV-2450型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。实验所有材料：甲醇、乙腈（均为色谱纯，美国费希尔公司）；柱色谱硅胶（100～200、200～300目）及薄层色谱硅胶（GF254，青岛海洋化工厂）；YMC*GEL ODS-HG（12 nm S-50）（日本YMC公司）；Sephadex LH-20（GE Healthcare Bio-Sciences AB）；石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇、甲醇（分析纯，广州化学试剂厂）。

药材由广州采芝林药业有限公司提供（产地广东，批号为150916），经中国科学院华南植物园华南植物鉴定中心叶华谷研究员鉴定为百合科植物土茯苓Roxb.的干燥根状茎。

2 提取与分离

干燥的土茯苓药材15.0 kg，用8倍体积75%乙醇水溶液在100 ℃条件下加热回流提取3次，每次2 h，合并浓缩，用醋酸乙酯萃取，回收醋酸乙酯提取液后干燥得到土茯苓总苷干膏粉（540.0 g），取干燥的土茯苓总苷干膏粉200.0 g经硅胶柱色谱，以二氯乙烷-甲醇体系梯度洗脱（1∶0～2∶1），经TLC分析合并为5个部分（Fr. 1～5）。Fr. 1析出沉淀（5.8 g）经Sephadex LH-20柱色谱（二氯乙烷-甲醇1∶1）得化合物3（1.5 g）和17（350.6 mg）。Fr. 1母液（2.5 g）先后经Sephadex LH-20柱色谱（二氯乙烷-甲醇1∶1）、反相制备高效液相色谱，甲醇-水（45∶60）为流动相制备得化合物1（12.3 mg，R= 32.2 min）、2（50.1 mg，R= 48.1 min）和5（223.5 mg，R= 60.6 min）。Fr. 2（3.4 g）先后经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱（二氯乙烷-甲醇1∶1）、反相制备高效液相色谱乙腈-水（18∶82）为流动相制备得化合物23（18.5 mg，R= 56.5 min）、24（20.6 mg，R= 70.1 min）、和25（33.2 mg，R= 86.4 min）。Fr. 3（8.4 g）经反相柱色谱，甲醇-水（10∶90～90∶10）梯度洗脱，分别得到3个部分（Fr. 3.1～3.3）。Fr. 3.1（1.2 g）先后经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）、反相制备高效液相色谱，乙腈-水（25∶80）为流动相制备得化合物4（7.9 mg，R= 61.6 min）和6（5.1 mg，R= 69.3 min）。Fr. 3.2（1.9 g）先后经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）、反相制备高效液相色谱，乙腈-水（18∶80）为流动相制备得化合物7（12.3 mg，R= 63.0 min）和8（8.9 mg，R= 71.5 min）。Fr.3.3（1.5 g）先后经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）、反相制备高效液相色谱，乙腈-水（18∶82）为流动相制备得化合物9（5.2 mg，R= 46.1 min）、10（6.7 mg，R= 52.3 min）和19（10.8 mg，R= 68.4 min）。Fr. 4（76.0 g）经反相硅胶柱色谱，甲醇-水体系（10∶90～90∶10）梯度洗脱，分别得到3个部分（Fr. 4.1～4.2）。Fr. 4.1析出沉淀（13.0 g）经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）得化合物11（3.5 g）和16（173.1 mg）。Fr. 4.1母液（22.6 g）先后Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）、反相制备高效液相色谱，甲醇-水（35∶65）为流动相制备得化合物12（265.1 mg，R= 36.4 min）、18（32.7 mg，R= 46.7 min）和20（8.1 mg，R= 52.3 min）。Fr.4.2（18.0 g）先后Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）、反相制备高效液相色谱，乙腈-水（20∶80）为流动相制备得化合物13（146.2 g，R= 71.3 min）、14（71.0 mg，R= 80.5 min）和15（34.2 mg，R= 96.3 min）。Fr.5（6.4 g）先后经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱（二氯乙烷-甲醇1∶1）、反相制备高效液相色谱乙腈-水（18∶82）为流动相制备得化合物19（30.2 mg，R= 82.2 min）、21（12.1 mg，R= 91.0 min）和22（5.3 mg，R= 105.4 min）。

3 结构鉴定

表1 化合物1的核磁波谱数据(600/150 MHz, DMSO-d6)

图1 化合物1结构及主要的HMBC (H→C) 相关

图2 化合物1理论计算ECD R构型(- - - -)与实验测定ECD (—)

化合物3：白色粉末；ESI-MS/: 305 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.91 (1H, s, 5-OH), 10.83 (1H, s, 7-OH), 9.03 (1H, s, 3′-OH), 8.98 (1H, s, 4′-OH), 6.88 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′), 6.76 (2H, m, H-5′, 6′), 5.91 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.87 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.75 (1H, d,= 6.2 Hz, 3-OH), 4.98 (1H, d,= 11.1 Hz, H-2), 4.50 (1H, dd,= 11.2, 6.2 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):83.5 (C-2), 72.0 (C-3), 198.2 (C-4), 95.5 (C-4a), 163.0 (C-5), 100.9 (C-6), 163.8 (C-7), 96.5 (C-8), 167.5 (C-8a), 128.5 (C-1′), 115.6 (C-2′), 146.2 (C-3′), 145.4 (C-4′), 115.8 (C-5′), 119.8 (C-6′)。以上数据与文献对比[5]，鉴定化合物3为花旗松素。

化合物4：黄色粉末；ESI-MS/: 289 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.15 (1H, s, 5-OH), 10.82 (1H, s, 7-OH), 9.08 (1H, s, 4′-OH), 9.03 (1H, s, 3′-OH), 6.88 (1H, s, H-2′), 6.75 (2H, s, H-5′, 6′), 5.89 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.88 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.38 (1H, dd,= 12.5, 3.1 Hz, H-2), 3.19 (1H, dd,= 17.1, 12.5 Hz, H-3a), 2.68 (1H, dd,= 17.1, 3.2 Hz, H-3b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):78.9 (C-2), 42.5 (C-3), 196.8 (C-4), 163.4 (C-5), 95.4 (C-6), 163.9 (C-7), 96.2 (C-8), 167.1 (C-9), 102.3 (C-10), 129.9 (C-1′), 114.8 (C-2′), 146.2 (C-3′), 145.6 (C-4′), 115.8 (C-5′), 118.4 (C-6′)。以上数据与文献对比[6]，鉴定化合物4为北美圣草素。

化合物5：白色粉末；ESI-MS/: 273 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.15 (1H, s, 5-OH), 10.78 (1H, s, 7-OH), 9.58 (1H, s, 4′-OH), 7.32 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.88 (2H, brs, H-6, 8), 5.44 (1H, dd,= 12.8, 3.0 Hz, H-2), 3.26 (1H, dd,= 17.1, 12.8 Hz, H-3a), 2.28 (1H, dd,= 17.1, 3.1 Hz, H-3b)；13C- NMR (150 MHz, DMSO-6):78.9 (C-2), 42.4 (C-3), 196.8 (C-4), 95.4 (C-4a), 163.4 (C-5), 102.2 (C-6), 164.0 (C-7), 96.3 (C-8), 167.1 (C-8a), 129.3 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 158.2 (C-4′)。以上数据与文献对比[7]，鉴定化合物5为柚皮素。

化合物6：黄色粉末；ESI-MS/: 289 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.89 (1H, s, 5-OH), 9.00 (2H, s, H-3′, 5′), 6.88 (1H, s, H-4′), 6.75 (2H, s, H-2′, 6′), 5.90 (1H, s, H-8), 5.85 (1H, s, H-6), 5.74 (1H, d,= 4.8 Hz, H-2), 4.97 (1H, d,= 11.1 Hz, H-3a), 4.49 (1H, dd,= 11.1, 4.8 Hz, H-3b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 78.5 (C-2), 42.1 (C-3), 196.5 (C-4), 163.0 (C-5), 95.9 (C-6), 95.1 (C-8), 166.7 (C-7), 163.6 (C-9), 101.9 (C-10), 129.6 (C-1′), 114.5 (C-2′), 145.8 (C-3′), 118.1 (C-4′), 115.5 (C-6′), 145.3 (C-5′)。以上数据与文献对比[8]，鉴定化合物6为3′,5′,5,7-四羟基二氢黄酮。

化合物7：黄色粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.16 (1H, s, 5-OH), 7.09 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.90 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 6.79 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.89 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.88 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.43 (1H, dd,= 12.9, 2.9 Hz, H-2), 3.79 (3H, s, 3′-OCH3), 3.32 (1H, dd,= 17.1, 12.9 Hz, H-3b), 2.68 (1H, dd,= 17.1, 3.0 Hz, H-3a)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):79.2 (C-2), 42.6 (C-3), 196.9 (C-4), 164.0 (C-5), 167.2 (C-7), 95.5 (C-8), 163.4 (C-9), 102.2 (C-10), 129.9 (C-1′), 111.6 (C-2′), 148.0 (C-3′), 147.4 (C-4′), 120.2 (C-6′), 115.6 (C-5′), 96.3 (C-6), 56.2 (3′-OCH3)。以上数据与文献对比[9]，鉴定化合物7为高圣草素。

化合物8：黄色粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.19 (1H, s, 5-OH), 10.66 (1H, s, 7-OH), 9.57 (1H, s, 4′-OH), 7.30 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 5.96 (1H, s, H-8), 5.41 (1H, dd,= 12.9, 3.0 Hz, H-2), 3.66 (3H, s, 6-OCH3), 3.25 (1H, dd,= 17.1, 12.9 Hz, H-3), 2.68 (1H, dd,= 17.1, 3.0 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 79.0 (C-2), 42.5 (C-3), 197.6 (C-4), 155.6 (C-5), 129.4 (C-6), 95.5 (C-8), 158.5 (C-7), 160.0 (C-9), 102.3 (C-10), 129.4 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 158.2 (C-4′), 60.5 (6-OCH3)。以上数据与文献对比[10]，鉴定化合物8为6-甲氧基柚皮素。

化合物9：黄色粉末；ESI-MS/: 289 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.91 (1H, s, 5-OH), 7.31 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 5.91 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.86 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.75 (1H, s, 3-OH), 5.05 (1H, d,= 11.4 Hz, H-2), 4.58 (1H, d,= 11.4 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 82.9 (C-2), 71.5 (C-3), 197.8 (C-4), 163.4 (C-5), 96.2 (C-6), 167.4 (C-7), 95.2 (C-8), 162.6 (C-9), 100.3 (C-10), 126.7 (C-1'), 129.8 (C-2', 6'), 115.1 (C-3', 5'), 158.2 (C-4')。以上数据与文献对比[11]，鉴定化合物9为二氢山柰酚。

化合物10：黄色粉末；ESI-MS/: 333 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.19 (1H, s, 5-OH), 9.15 (1H, s, 3′-OH), 7.08 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′), 6.89 (1H, dd,= 8.1, 2.1 Hz, H-5′), 6.79 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6′), 5.98 (1H, s, H-8), 5.40 (1H, dd,= 13.0, 3.0 Hz, H-2), 3.78 (3H, s, 4′-OCH3), 3.66 (3H, s, 6-OCH3), 3.29 (1H, dd,= 17.2, 13.0 Hz, H-3b), 2.68 (1H, dd,= 17.2, 3.0 Hz, H-3a)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):78.7 (C-2), 42.1 (C-3), 197.0 (C-4), 157.6 (C-5), 129.3 (C-6), 157.9 (C-7), 95.0 (C-8), 159.5 (C-9), 101.7 (C-10), 128.9 (C-1′), 111.0 (C-2′), 146.8 (C-3′), 147.4 (C-4′), 115.0 (C-5′), 119.6 (C-6′), 55.6 (4′-OCH3), 59.9 (6-OCH3)。以上数据与文献对比[12]，鉴定化合物10为6-甲氧基橙皮素。

化合物11：白色粉末；ESI-MS/451 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4):6.86 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.74 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 6.71 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.82 (1H, d,= 2.2 Hz, H-6), 5.80 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 4.97 (1H, d,= 10.7 Hz, H-2), 4.48 (1H, d,= 10.7 Hz, H-3), 4.15 (1H, m, H-1′′), 3.95 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′′), 3.56 (1H, dd,= 9.6, 3.3 Hz, H-3′′), 3.44 (1H, m, H-4′′), 3.21 (1H, m, H-5′′), 1.09 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C-NMR (150 MHz, methanol-4):82.6 (C-2), 77.2 (C-3), 194.6 (C-4), 164.2 (C-5), 96.0 (C-6), 167.2 (C-7), 94.9 (C-8), 162.7 (C-9), 101.1 (C-10), 127.8 (C-1′), 114.9 (C-2′), 145.2 (C-3′), 146.0 (C-4′), 114.1 (C-5′), 119.1 (C-6′), 100.8 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.8 (C-3′′), 72.4 (C-4′′), 69.1 (C-5′′), 16.5 (C-6′′)。以上数据与文献对比[13]，鉴定化合物11为落新妇苷。

化合物12：白色粉末；ESI-MS/: 451 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, methanol-4): 6.97 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′), 6.86 (1H, dd,= 8.2, 1.7 Hz, H-6′), 6.82 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.00 (1H, d,=1.9 Hz, H-6), 5.95 (1H, d,=1.9 Hz, H-8), 5.44 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2), 4.98 (1H, d,= 1.6 Hz, H-1′′), 4.21 (1H, d,= 2.4 Hz, H-3), 3.70 (1H, dd,= 3.4, 1.6 Hz, H-2′′), 3.47 (1H, dd,= 9.6, 3.4 Hz, H-3′′), 3.23 (1H, t,= 9.6 Hz, H-4′′), 2.50 (1H, m, H-5′′), 0.96 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C-NMR (100 MHz, methanol-4): 80.7 (C-2), 74.2 (C-3), 192.9 (C-4), 164.8 (C-5), 96.0 (C-6), 167.4 (C-7), 94.8 (C-8), 163.1 (C-9), 100.4 (C-10), 127.3 (C-1′), 114.9 (C-2′), 144.9 (C-3′), 145.3 (C-4′), 113.8 (C-5′), 118.0 (C-6′), 98.8 (C-1′′), 70.6 (C-2′′), 70.6 (C-3′′), 71.9 (C-4′′), 67.0 (C-5′′), 16.4 (C-6′′)。以上数据与文献对比[14]，鉴定化合物12为异落新妇苷。

化合物13：白色粉末；ESI-MS/: 451 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 6.98 (1H, brs, H-2′), 6.86 (1H, brd,= 8.3 Hz, H-6′), 6.83 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.94 (1H, s, H-6), 5.92 (1H, s, H-8), 5.06 (1H, brs, H-1′′), 4.89 (1H, d,= 11.3 Hz, H-2), 4.54 (1H, d,= 11.3 Hz, H-3), 3.91 (1H, d,= 3.2 Hz, H-2′′), 3.28 (1H, dd,= 9.6, 3.2 Hz, H-3′′), 3.10 (1H, t,= 9.5 Hz, H-4′′), 2.21 (1H, dq,= 9.6, 6.2 Hz, H-5′′), 0.80 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C- NMR (100 MHz, methanol-4): 82.5 (C-2), 77.2 (C-3), 194.6 (C-4), 163.9 (C-5), 96.2 (C-6), 167.1 (C-7), 95.0 (C-8), 162.6 (C-9), 101.1 (C-10), 127.9 (C-1′), 115.1 (C-2′), 145.0 (C-3′), 145.9 (C-4′), 114.3 (C-5′), 119.3 (C-6′), 100.7 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.8 (C-3′′), 72.5 (C-4′′), 69.2 (C-5′′), 16.6 (C-6′′)。以上数据与文献对比[14]，鉴定化合物13为新落新妇苷。

化合物14：白色粉末；ESI-MS/: 451 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, methanol-4): 6.90 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2′), 6.75 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.70 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.87 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.83 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.23 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 4.15 (1H, d,= 1.8 Hz, H-3), 3.97 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1′′), 3.56 (1H, dd,= 3.4, 1.7 Hz, H-2′′), 3.40 2H, m , H-3′′, 4′′), 3.17 (1H, t,= 9.6 Hz, H-5′′), 1.04 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C-NMR (100 MHz, methanol-4): 180.9 (C-2), 77.0 (C-3), 92.5 (C-4), 164.6 (C-5), 95.9 (C-6), 167.4 (C-7), 94.6 (C-8), 163.1 (C-9), 101.2 (C-10), 127.1 (C-1′), 114.8 (C-2′), 144.9 (C-3′), 145.3 (C-4′), 113.9 (C-5′), 118.1 (C-6′), 100.8 (C-1′′), 70.2 (C-2′′), 70.7 (C-3′′), 72.3 (C-4′′), 69.2 (C-5′′), 16.1 (C-6′′)。以上数据与文献对比[14]，鉴定化合物14为新异落新妇苷。

化合物15：白色粉末；ESI-MS/: 435 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 7.36 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.86 (2H, d,= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.94 (1H, d,= 2.2 Hz, H-8), 5.90 (1H, d,= 2.2 Hz, H-6), 5.11 (1H, d,= 11.0 Hz, H-2), 4.61 (1H, d,= 11.0 Hz, H-3), 4.50 (1H, brs, H-1″), 4.02 (1H, d,= 1.7 Hz, H-4″), 3.70 (1H, dd,= 9.6, 3.3 Hz, H-2″), 3.54 (1H, dd,= 3.3, 1.7 Hz, H-3″), 3.33 (1H, t,= 9.6 Hz, H-5″), 1.21 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6″)；13C- NMR (150 MHz, methanol-4): 82.4 (C-2), 77.3 (C-3), 194.6 (C-4), 164.0 (C-5), 96.1 (C-6), 167.1 (C-7), 95.0 (C-8), 162.7 (C-9), 101.1 (C-10), 127.2 (C-1′), 128.7 (C-2′, 6′), 115.1 (C-3′, 5′), 158.0 (C-4′), 100.8 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.8 (C-3′′), 72.5 (C-4′′), 69.2 (C-5′′), 16.5 (C-6′′)。以上数据与文献对比[5]，鉴定化合物15为黄杞苷。

化合物16：白色粉末；ESI-MS/: 435 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.77 (1H, s, 5-OH), 9.50 (1H, s, 7-OH), 7.26 (2H, d,= 8.1 Hz, H-2′, 6′), 6.76 (2H, d,= 8.1 Hz, H-3′, 5′), 5.97 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 5.93 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 5.61 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 4.76 (1H, s, H-1″), 4.17 (1H, dd,= 4.1, 1.8 Hz, H-3), 3.30 (1H, m, H-2″), 3.18 (1H, m, H-3″), 3.03 (1H, td,= 9.5, 5.2 Hz, H-4″), 2.32 (1H, m, H-5″), 0.80 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6″)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 80.5 (C-2), 76.0 (C-3), 193.1 (C-4), 164.36 (C-5), 96.5 (C-6), 167.5 (C-7), 95.4 (C-8), 163.0 (C-9), 101.2 (C-10), 126.3 (C-1′), 128.7 (C-2′, 6′), 115.4 (C-3′, 5′), 157.9 (C-4′), 101.0 (C-1″), 70.4 (C-2″), 70.8 (C-3″), 72.0 (C-4″), 69.6 (C-5″), 17.9 (C-6″)。以上数据与文献对比[5]，鉴定化合物16为异黄杞苷。

化合物17：黄色粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.50 (1H, s, 5-OH), 7.68 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2′), 7.54 (1H, dd,= 8.5, 2.2 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 6.19 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 147.1 (C-2), 136.0 (C-3), 176.4 (C-4), 161.0 (C-5), 98.7 (C-6), 164.4 (C-7), 93.9 (C-8), 156.4 (C-9), 103.6 (C-10), 122.5 (C-1'), 115.6 (C-2'), 147.3 (C-3'), 145.4 (C-4'), 115.6 (C-5'), 120.3 (C-6')。以上数据与文献对比[7]，鉴定化合物17为槲皮素。

化合物18：黄色粉末；ESI-MS/: 271 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 7.75 (2H, d,= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.86 (2H, d,= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.53 (1H, s, H-3), 6.18 (1H, s, H-8), 6.04 (1H, s, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 166.3 (C-2), 102.2 (C-3), 182.3 (C-4), 158.2 (C-5), 99.3 (C-6), 164.7 (C-7), 94.0 (C-8), 161.5 (C-9), 103.4 (C-10), 121.8 (C-1'), 128.0 (C-2', 6'), 115.7 (C-3', 5'), 161.4 (C-4')。以上数据与文献对比[5]，鉴定化合物18为芹菜素。

化合物19：黄色粉末；ESI-MS/: 317 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 7.84 (2H, d,= 8.2 Hz, H-2′, 6′), 6.92 (2H, d,= 8.2 Hz, H-3′, 5′), 6.59 (1H, s, H-3), 6.56 (1H, s, H-8), 3.88 (H, s, 6-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, methanol-4): 165.0 (C-2), 102.0 (C-3), 182.9 (C-4), 153.3 (C-5), 131.5 (C-6), 157.4 (C-7), 93.9 (C-8), 152.6 (C-9), 104.4 (C-10), 121.9 (C-1′), 128.1 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 161.4 (C-4′), 59.5 (6-OCH3)。以上数据与文献对比[9]，鉴定化合物19为高车前素。

化合物20：白色粉末；ESI-MS/: 287 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 8.09 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.90 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.40 (1H, s, H-8), 6.18 (1H, s, H-6)；13C-NMR (150 MHz, methanol-4): 147.0 (C-2), 136.4 (C-3), 176.4 (C-4), 161.1 (C-5), 98.9 (C-6), 165.3 (C-7), 94.0 (C-8), 156.7 (C-9), 103.1 (C-10), 122.2 (C-1'), 129.9 (C-2', 6'), 115.9 (C-3', 5'), 159.6 (C-4')。以上数据与文献对比[7]，鉴定化合物20为山柰酚。

化合物21：白色粉末；ESI-MS/: 341 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.43 (1H, s, 5-OH), 8.33 (1H, s, H-2), 6.38 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 6.21 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.23 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1′), 3.67～3.29 (4H, m, H-2′～5′), 1.14 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 148.5 (C-2), 138.5 (C-3), 177.5 (C-4), 105.2 (C-4a), 162.0 (C-5), 99.3 (C-6), 164.9 (C-7), 94.4 (C-8), 157.7 (C-8a), 101.0 (C-1′), 70.4 (C-2′), 70.7 (C-3′), 72.0 (C-4′), 70.2 (C-5′), 18.3 (C-6′)。以上数据与文献对比[15]，鉴定化合物21为光叶菝葜苷。

化合物22：白色粉末；ESI-MS/: 179 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.70 (1H, s, 5-OH), 8.19 (1H, d,= 6.0 Hz, H-2), 6.37 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 6.28 (1H, d,= 6.0 Hz, H-3), 6.20 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 158.0 (C-2), 111.0 (C-3), 181.8 (C-4), 162.1 (C-5), 99.5 (C-6), 164.9 (C-7), 94.4 (C-8), 158.3 (C-9), 105.4 (C-10)。以上数据与文献对比[16]，鉴定化合物22为5,7-二羟基色原酮。

化合物23：白色结晶（甲醇）；ESI-MS/: 291 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.19 (1H, s, 5-OH), 8.95 (1H, s, 7-OH), 8.87 (1H, s, 3′-OH), 8.82 (1H, s, 4′-OH), 6.72 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.69 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.60 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6′), 5.89 (1H, d,= 2.3 Hz, H-8), 5.69 (1H, d,= 2.3 Hz, H-6), 4.87 (1H, d,= 5.1 Hz, H-2), 4.48 (1H, d,= 7.4 Hz, H-3), 2.66 (1H, dd,= 16.0, 5.1 Hz, H-4a), 2.35 (1H, dd,= 16.0, 7.4 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 80.9 (C-2), 66.2 (C-3), 27.8 (C-4), 156.4 (C-5), 95.0 (C-6), 156.1 (C-7), 93.8 (C-8), 155.3 (C-9), 99.0 (C-10), 130.5 (C-1′), 115.0 (C-2′), 144.8 (C-3′, 4′), 114.4 (C-5′), 118.3 (C-6′)。以上数据与文献对比[17]，鉴定化合物23为儿茶素。

化合物24：白色结晶（甲醇）；ESI-MS/: 291 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.11 (1H, s, 5-OH), 8.90 (1H, s, 7-OH), 8.80 (1H, s, 3′-OH), 8.71 (1H, s, 4′-OH), 6.90 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 6.67 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.65 (1H, dd,= 8.2, 1.8 Hz, H-6′), 5.90 (1H, d,= 2.3 Hz, H-8), 5.72 (1H, d,= 2.3 Hz, H-6), 4.74 (1H, brs, H-2), 4.66 (1H, d,= 4.5 Hz, 3-OH), 4.01 (1H, brs, H-3), 2.68 (1H, dd,= 16.3, 4.5 Hz, H-4a), 2.48 (1H, dd,= 16.4, 3.6 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 78.5 (C-2), 65.4 (C-3), 28.7 (C-4), 157.0 (C-5), 95.5 (C-6), 156.7 (C-7), 94.5 (C-8), 156.2 (C-9), 99.0 (C-10), 131.1 (C-1′), 115.4 (C-2′), 145.0 (C-3′), 144.9 (C-4′), 115.2 (C-5′), 118.4 (C-6′)。以上数据与文献对比[18]，鉴定化合物24为表儿茶素。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Chemical constituents from total glycosides of S

TANG Ying-zhan1, 2, 3, LIU Ju-yan3, JIANG Zhen-zhou2, JIANG Tao1, PENG Hong-ying1, ZHANG Lu-yong2, 4

1. Guangzhou Baiyunshan Jingxiutang Pharmaceutical Co., Ltd., Guangzhou 510130, China 2. New Drug Screening Center, Jiangsu Center for Pharmacodynamics Research and Evaluation, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China 3. Guangzhou Pharmaceutical Holdings Co., Ltd., Guangzhou 510103, China 4. Center for Drug Research and Development, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China

To study chemical constituents of total glycosides of Tufuling (Roxb.).The separation and purification of the chemical components of total glucosides ofwas carried out systematically by silica gel column chromatography, gel chromatography and semi-preparative HPLC. The structures were identified by MS, NMR and CD spectral data in combination with the physicochemical properties of the isolated monomeric compounds.Twenty-five compounds were isolated from the total glucosides ofand identified as glabachromone A (1), sawarachromone (2), taxifolin (3), eriodictyol (4), naringenin (5), 3′,5′,5,7-tetrahydroxylflavanone (6), homoeriodictyol (7), 6-methoxynaringenin (8), dihydrokaempferol (9), 6-methoxyhesperetin (10), astilbin (11), isoastilbin (12), neoastilbin (13), neoisoastilbin (14), engeletin (15), isoengeletin (16), quercetin (17), luteolin (18), hispdulin (19), kaempferol (20), smiglanin (21), 5,7-dihydroxychromone (22), (＋)-catechin (23), (−)-epicatechin (24), and cinchonain Ib (25).Compounds 1 is a new compound, compounds 2 and 8 are firstly isolated from the genus, and compound 6, 7, 8, 9, 19 and 22 are obtained from this plant for the first time.

Roxb.; total glycosides; glabachromone A; sawarachromone; 6-methoxynaringenin; dihydrokaempferol;hispdulin

R284.1

A

0253 - 2670(2022)22 - 6977 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.22.001

2022-09-22

广州市创新平台建设计划实验室建设专题项目（201805010006）

汤迎湛，男，博士，研究方向为中药新研发。E-mail: tang1986gd@163.com

张陆勇，男，教授，博士生导师，研究方向为分子药理学与毒代动力学。E-mail: lyzhang@cpu.edu.cn

[责任编辑 王文倩]