HPLC法测定泻白糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

车 爽，李 昊，王俊林，周 军*

（1.天津市药品检验研究院，天津 300070；2.天津同仁堂集团有限公司，天津 300385；3.天津大学药物科学与技术学院，天津 300072）

泻白糖浆是在主治小儿肺盛气急喘嗽的宋代儿科名方泻白散［1］基础上加减药味而成，由石膏、桑白皮、瓜蒌子、甘草、麻黄、葶苈子、紫菀、前胡、款冬花、川贝母、苦杏仁、紫苏叶油和薄荷脑组成。泻白糖浆具有宣肺清热、化痰止咳的作用，主治伤风咳嗽、痰多胸满、口渴舌干、鼻塞不通。本方中麻黄的有效成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱为拟肾上腺素药，可兴奋交感神经，收缩血管、松弛支气管平滑肌，中枢兴奋作用显著，临床主要用于治疗习惯性支气管哮喘和预防哮喘发作。盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱作为泻白糖浆中治疗咳嗽的核心靶点之一［2］，有必要对泻白糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量进行控制。同时泻白糖浆为儿童用药，一般有效成分对儿童产生药理作用所需的量会低于成年人，所以对其含量控制应更为严格。且麻黄碱是合成苯丙胺类毒品也就是制作冰毒最主要的原料，对泻白糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的控制更加有必要。本研究建立了泻白糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的高效液相色谱含量测定方法，方法准确、简便、快捷，可有效评价该制剂的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器LC-20AD高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Welch Ultimate Phenyl-Ether色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；XS205DU电 子 天 平（METTLER TOLEDO公司）；Milli-Q超纯水制备机（默克股份有限公司）。

1.2 试药 盐酸麻黄碱（购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号171241-201809，100.0 %）；盐酸伪麻黄碱（购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号171237-201510，99.8%）；甲醇（色谱纯，默克股份有限公司）；磷酸、二正丁胺和三乙胺均为市售分析纯；水为Milli-Q超纯水。样品来自2021年国家药品评价性抽验项目所抽验样品（批号05191108、05191204、05191201）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 以甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）为流动相；采用Welch Ultimate Phenyl-Ether（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；检测波长为210 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为30℃；进样量为5 μl。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品适量，加流动相制成每1 ml分别含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱各20 μg的混合溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品5 ml，置10 ml量瓶中，以流动相稀释并定容，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 取除麻黄外的各味药材，按处方配比，依制备工艺制成阴性样品，再按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

2.3 系统适用性及专属性试验 分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各5 μl，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果表明，各色谱峰分离较好，盐酸麻黄碱的理论板数不低于5 000。阴性样品在盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的相应位置上未检出色谱峰，表明该方法的系统适用性及专属性良好。色谱图见图1。

图1 对照品（A）供试品（B）阴性样品（C）HPLC色谱图

2.4 线性关系试验 精密称定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品适量，以流动相为溶剂，配制成每1 ml分别含盐酸麻黄碱2.192 0、4.384 0、8.768 0、21.920 0、43.840 0和109.600 0 μg，含盐酸伪麻黄碱2.117 9、4.235 8、8.471 5、21.178 8、42.357 6和105.894 0 μg的混合溶液，精密吸取各混合溶液5μl，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件分析，测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为：盐酸麻黄碱Y=8 799.33X+399.88（r=1.000 0）；盐酸伪麻黄碱Y=8 879.99X+108.63（r=1.000 0）。结果表明，盐酸麻黄碱在2.192 0～109.600 0 μg/ml、盐酸伪麻黄碱在2.117 9～105.894 0 μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密量取同一批号（批号200105）的泻白糖浆5 ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，对样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的峰面积进行测定。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱RSD分别为0.36%（n=6）和1.33%（n=6），表明精密度良好。

2.6 重复性试验 精密量取同一批号（批号200105）的泻白糖浆5 ml，量取6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，分别对各样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量进行测定。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均含量分别为59.991 8 μg/ml和25.721 2 μg/ml，RSD分别为0.52%（n=6）和1.44%（n=6），表明重复性良好。

2.7 稳定性试验 精密量取同一批号（批号200105）的泻白糖浆5 ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，分别在0、4、8、12、18及24 h测定，结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的平均值分别为263 413和113 369，RSD分别为0.98%（n=6）和1.62%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 加样回收率试验 精密量取“2.6”项下已知含量的泻白糖浆（批号200105）2.5 ml，置10 ml量瓶中，共6份，分别精密加入以流动相溶解的含盐酸麻黄碱79.840 0 μg/ml和盐酸伪麻黄碱25.524 4 μg/ml的混合溶液2 ml，再以流动相定容至刻度。依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，计算回收率。结果盐酸麻黄碱的平均回收率为102.25 %，RSD为1.20 %；盐酸伪麻黄碱的平均回收率为100.24 %，RSD为1.74 %。见表1和表2。

表1 盐酸麻黄碱的加样回收率试验（n=6）

表2 盐酸伪麻黄碱的加样回收率试验（n=6）

2.9 样品含量测定结果 选取同厂家3批泻白糖浆样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的总含量，结果见表3。

表3 泻白糖浆中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量测定结果

3 讨论

3.1 提取方法的考查 本研究采用直接稀释和用乙醚萃取两种提取方式，结果使用直接稀释法所测含量高于使用乙醚提取法；采用直接稀释的方法，分别用流动相、水和甲醇作为稀释溶剂，结果采用流动相稀释和水稀释的目标成分含量相当，均高于采用甲醇稀释。但采用流动相稀释的溶剂效应更低，基线更平稳，故选择流动相作为稀释溶剂；采用流动相稀释的方法，分别考查了稀释2倍和5倍，结果采用不同稀释倍数对目标成分含量几乎无影响，故选择峰面积相对较大的稀释2倍作为稀释溶剂倍量。

3.2 色谱条件的考查 参考相关文献［3-7］及《中国药典》2020年版一部麻黄项下关于该两种成分含量的测定方法对流动相进行摸索考查，分别采用甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）、乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钾水溶液（含0.1%磷酸及0.1%三乙胺）按不同比例进样，结果显示甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）以比例1.5∶98.5洗脱，各峰分离效果最好且峰形对称，无其他成分干扰；参照《中国药典》2020年版一部麻黄含量测定项下盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量测定的有关要求，结合DAD检测器实际测定的最大吸收波长，最终选取210 nm作为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的检测波长，结果表明测定时基线平稳，峰形良好，无杂质峰干扰。

3.3 耐用性考查 取同一批号（批号200105）泻白糖浆的供试品溶液，分别采用Welch Ultimate Phenyl-Ether（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；Phenomenex SynergiTMPolar-RP 80Å（250 mm×4.6 mm，4 μm）色谱柱；Sepax Polar-Phenyl 120Å（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，在SHIMADZU LC-20AD高效液相色谱仪和Agilent 1200高效液相色谱仪上进样分析，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰型对称，均可达到基线分离，耐用性较好。盐酸麻黄碱的理论板数均可在5 000以上。

综上所述，本文建立了高效液相色谱法测定泻白糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法，该方法简便、快捷，可有效评价泻白糖浆中麻黄的质量。