沙葱总酚含量测定及抗氧化活性分析

张山佳，韩雪怡

(许昌学院，河南 许昌 461000)

沙葱风味独特，具有较强的抗寒性和较高的营养价值，对人体代谢、抗氧化以及血管舒张具有明显的作用[1]。人体代谢过程中会产生各种氧化性自由基，沙葱干粉水溶液中含有的总酚物质能够抑制这种氧化性自由基的生成，同时对已经存在的氧化性自由基进行消除，使氧化性自由基的活性逐渐降低[2]。沙葱干粉水提取物中具有这种抗氧化功能的成分为总酚，其抗氧化能力与沙葱干粉水提取物浓度为近似线性关系，浓度越高，总抗氧化能力越强[3]。沙葱干粉水提取物中的总酚是生长过程中产生的次级代谢产物，能够对人体产生多种生物学效应，同时降低人体内活性氧含量水平，并且具有消炎、抗过敏和防止血栓形成的作用。沙葱干粉水提取物总酚物质含量水平是评价沙葱营养价值和综合品质的重要参数指标[4]。沙葱干粉水提取物中的总酚是一种包含多个酚羟基的化合物，可分为低分子量的单聚体酚类和分子量较大的多聚体酚类，酚羟基容易被氧化，能够有效捕捉活性氧自由基，因此植物总酚能够清除机体氧化自由基，沙葱中的总酚物质含量和特性与沙葱的生长状态和外界条件有密切关系[5]。

本文以沙葱为原材料，对其进行水解后提取，测定沙葱水提取物中的总酚含量，同时对总酚抗氧化活性进行实验测定，为沙葱的开发利用提供理论依据。

1 待检测样品制备

实验原材料采用阿拉善沙葱，将其放置于真空冷冻机中进行冷冻干燥处理，粉碎后在60目过滤网中进行筛选，使用四氯甲烷对过滤后的沙葱干粉进行24 h脱脂，过滤后置于通风阴凉处晾干备用[6-7]。沙葱干粉水溶液中含有大量的纤维素，利用超声波提取会导致细胞壁的破坏，影响实验测定的准确性[8]。因此，本文在进行沙葱干粉水溶液中总酚物质含量测定时，选用水解的方式制备待检测样品。

称取10 g脱脂处理后的沙葱干粉，加入100 mL的蒸馏水，浸泡24 h后过滤，再加入100 mL的蒸馏水，浸泡24 h后过滤，将两次滤液合并在一起，采用循环水蒸发仪对滤液进行浓缩处理，浓缩至20 mL，于4 ℃条件下保存，作为待检测沙葱干粉提取物水溶液备用。

2 沙葱干粉水溶液中总酚含量测定与抗氧化活性分析方法

采用Folin-Ciocalteu比色法测定沙葱干粉提取物溶液中的总酚物质含量，实验过程中以没食子酸为标准检测样品，绘制标准检测曲线[9-10]。测定过程中，量取0.1 mL沙葱干粉提取物溶液，放置于2 mL离心管中，加入浓度为10%的Folin-Ciocalteu试剂0.2 mL，对其进行涡旋处理，使沙葱干粉提取物溶液与Folin-Ciocalteu试剂能够充分混合均匀，混匀后加入0.8 mL浓度为0.7 mol/L的Na2CO3溶液，在25 ℃条件下放置2 h作为总酚待检测样品溶液[11]。将混合完成的总酚待检测样品溶液放置于96微孔板中，加入浓度分别为0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mg/mL的没食子酸0.2 mL，在765 nm波长处测定溶液的吸光度值。待检测沙葱干粉提取物水溶液的总酚含量使用没食子酸为标准参数进行定量，沙葱干粉提取物溶液的总酚含量为每1 g沙葱干粉中的没食子酸当量。

利用二铵盐原液与过硫酸钾在室温条件下反应12 h来测定沙葱干粉提取物溶液总酚的ABTS自由基清除能力[12]。将浓度为0.07 mol/mL的ABTS溶液0.2 mL和0.025 mol/mL的过硫酸钾溶液0.2 mL进行混合，在室温条件下充分反应12 h，使用乙醇对混合溶液进行稀释，乙醇添加量要求能够确保混合溶液在734 nm处的吸光度为0.7。将混合溶液放置于96微孔板中，在734 nm波长处测定溶液的吸光度值，作为对照组吸光度。将浓度为0.07 mol/mL的ABTS溶液放置于96微孔板中，加入待检测沙葱干粉提取物水溶液0.2 mL，沙葱干粉提取物水溶液浓度分别为1.56，3.13，6.25，12.5，25，50 mg/mL，在室温条件下放置2 min，在734 nm波长处测定溶液的吸光度值，作为待检测沙葱干粉提取物水溶液在ABTS溶液中的吸光度值。将95%的乙醇溶液放置于96微孔板中，加入待检测沙葱干粉提取物水溶液0.2 mL，沙葱干粉提取物水溶液浓度分别为1.56，3.13，6.25，12.5，25，50 mg/mL，在室温条件下放置2 min，在734 nm波长处测定溶液的吸光度值，作为待检测沙葱干粉提取物水溶液在乙醇中的吸光度值。根据下式计算沙葱干粉水溶液中总酚的ABTS自由基清除能力：

式中：Ac为对照组的吸光度；Ai为待检测沙葱干粉提取物水溶液在ABTS溶液中的吸光度；Aj为待检测沙葱干粉提取物水溶液在乙醇中的吸光度。

沙葱干粉提取物中总酚对铁离子的还原能力测定过程中，向96微孔板中加入浓度分别为0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L的沙葱干粉提取物水溶液0.4 mL，加入浓度为0.3 mol/L的醋酸盐缓冲液0.2 mL，加入浓度为0.01 mol/L的TPTZ溶液0.02 mL，加入浓度为0.02 mol/L的氯化铁溶液0.02 mL，在37 ℃条件下孵育30 min，孵育完成后，在595 nm波长处测定溶液的吸光度值[13-14]。

沙葱总酚水提取物对超氧阴离子自由基的清除率可以用来表示自身的抗氧化活性[15]。实验测定过程中，使用邻苯三酚自氧化法生成超氧阴离子，使用pH值为8.3的磷酸盐溶液4.5 mL，加入相同体积的乙醇，乙醇质量浓度分别为0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L，振荡摇匀后在30 ℃条件下进行水浴保温，保温时间20 min，保温完成后加入1 mL浓度为0.02 mol/L的邻苯三酚溶液，摇匀后在波长325 nm处测定吸光度，每次间隔30 s，计算每分钟范围内溶液的吸光度增加值，作为对照组。同理，使用pH值为8.3的磷酸盐溶液4.5 mL，加入相同体积的沙葱干粉水溶液中总酚浓度分别为0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L，振荡摇匀后在30 ℃条件下进行水浴保温，保温时间为20 min，保温完成后加入浓度为0.02 mol/L的邻苯三酚溶液1 mL，摇匀后在波长325 nm处测定吸光度，每次间隔30 s，计算每分钟范围内溶液的吸光度增加值，作为待检测组。沙葱总酚水提取物对超氧阴离子自由基的清除率计算公式为：

超氧阴离子自由基的清除率=(ΔA0-ΔAi)/ΔA0×100%。

式中：ΔA0为对照组溶液的吸光度增加值，ΔAi为待检测组溶液的吸光度增加值。

3 实验测定结果与数据分析

采用Folin-Ciocalteu比色法测定总酚含量，使用没食子酸为标准参数对总酚含量进行定量，沙葱干粉水溶液中总酚含量(没食子酸定量数据)见表1。

表1 沙葱干粉水溶液中总酚含量(没食子酸定量数据)

由表1可知，当没食子酸浓度小于0.25 mg/mL时，溶液吸光度与没食子酸浓度之间具有较好的线性关系，可拟合出标准近似曲线方程为y=4x+0.07，定量测定得出沙葱干粉水溶液中总酚含量为10.2 mg/g。

ABTS溶液是一种稳定的机体自由基，待检测样品的抗氧化能力越强，表明其反应过程中提供反应电子的能力越强，ABTS溶液与待检测样品溶液的反应量也就越大，反应过程中表现出较快的反应速率，对待检测样品的吸光度变化过程进行检测，能够直接反映出待检测样品的自由基清除率。沙葱干粉水溶液中总酚自由基清除率实验数据见表2。

表2 沙葱干粉水溶液中总酚自由基清除率实验数据

续 表

由表2可知，当待检测样品浓度小于12.5 mg/mL时，待检测样品的自由基清除率快速上升，自由基清除能力随着待检测样品浓度的增大而增加，当待检测样品浓度大于12.5 mg/mL时，待检测样品的自由基清除率趋于稳定，当浓度为50 mg/mL时，自由基清除率达到100%。

沙葱总酚对铁离子的还原能力主要用来反映其抗氧化能力，在酸性环境下，将高价铁离子还原为低价铁离子，在595 nm处检测溶液的吸光度，吸光度越大，表明待检测样品铁离子还原能力越强，用来反映待检测沙葱干粉提取物水溶液的抗氧化能力。沙葱干粉水溶液中总酚对铁离子还原后溶液吸光度实验数据见表3。

表3 沙葱干粉水溶液中总酚对铁离子溶液吸光度实验数据

由表3可知，沙葱干粉水溶液中总酚与铁离子溶液在波长595 nm处的吸光度与溶液浓度呈线性关系，随着待检测样品溶液质量浓度的逐渐增大，溶液的吸光度逐渐增大，表明沙葱总酚水提取物具有较强的抗氧化能力。

沙葱干粉水溶液中总酚对超氧阴离子自由基清除率实验结果见表4。

表4 沙葱干粉水溶液中总酚对超氧阴离子自由基清除率

由表4可知，沙葱干粉水溶液中总酚具有较强的超氧阴离子自由基清除能力，随着沙葱干粉水溶液中总酚浓度的增加，对超氧阴离子自由基的清除能力明显提高。

4 结论

沙葱水提取物中含有丰富的总酚，具有较好的抗氧化性和氧化自由基清除能力，对铁离子的还原能力显著。本文所研究的沙葱干粉水溶液中总酚成分测定和抗氧化活性分析，为沙葱资源的综合利用与开发奠定了理论基础。