老年胆囊结石患者血清CA19-9、CA50表达及其与胆道炎症的相关性研究

邱桂刚，陈杰，王学文，何晓非，赵斌，陈永平

(自贡市第四人民医院肝胆外科，四川 自贡 643000)

胆囊结石是肝胆外科常见病症，手术是其主要治疗方式[1]。近年腹腔镜技术的兴起与应用，胆总管切开取石术及胆囊切除术等微创手术在临床应用逐渐广泛，但对于胆道炎症严重的患者，手术开展仍比较困难，于患者预后不利[2]。因此寻找特异而又简便的生化标志物用以准确判断胆管炎症十分必要。胆囊结石患者血清糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原50(CA50)普遍呈高表达水平，对胆道炎症的预测或许有一定应用价值[3-4]。基于此，本研究拟探讨老年胆囊结石患者术前血清CA19-9、CA50及炎症因子水平的表达水平与胆道炎症的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年12月至2018年12月自贡市第四人民医院肝胆外科收治的120例老年胆囊结石患者，所有患者均符合《中国慢性胆囊炎、胆囊结石内科诊疗共识意见(2014年,上海)》中胆囊结石相关诊断[5]，临床可表现为腹痛、恶心呕吐、上腹压痛、莫非氏征阳性，或饱餐、进食油腻食物，或夜间平卧后结石堵塞胆囊管引起胆绞痛和急性胆囊炎。纳入标准：(1)术前影像学检查诊断为胆囊结石，并经术中、术后明确诊断； (2)于自贡市第四人民医院接受治疗及随访；(3)年龄≥60岁；(4)临床资料齐全。排除标准：(1)心肺功能严重障碍；(2)合并出血性疾病者；(3)精神疾病、认知异常或语言沟通障碍者；(4)临床资料不齐全者。据胆道炎症程度分为轻度、中度和重度三型[6]：(1)轻度炎症胆囊黏膜炎症、水肿、充血，和(或)胆囊、胆管少量炎性细胞浸润；(2)中度炎症胆囊黏膜炎症、水肿、充血，和(或)胆囊、胆管易见炎性细胞浸润；(3)重度炎症其炎症波及胆囊壁全层，胆囊壁水肿，增厚，浆膜面纤维素渗出，胆囊内充满脓液，伴出血，胆囊、胆管弥漫性炎性细胞浸润。根据胆道炎症将其分为轻度亚组(n=40)、中度亚组(n=56)及重度亚组(n=24)。另选同期体检的50名健康者作为对照组。本研究属于回顾性研究，获得医院伦理委员会批准并取得所有患者的知情同意。各组性别、年龄、体重指数(BMI)差异均无统计学意义(P>0.05)，且观察组各亚组结石大小、临床表现(高热、黄疸、腹痛)比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组临床资料比较

1.2 方法

采集观察组入院当天和对照组外周静脉血5 mL，离心分离血清，置于-80 ℃保存备用。测定血清CA19-9(试剂盒购自雅培制药有限公司)、CA50(试剂盒购自雅培制药有限公司)、白细胞介素-6(IL-6，试剂盒购自上海仁捷生物科技有限公司)、肿瘤坏死因子α(TNF-α，试剂盒购自齐一生物科技有限公司)和C反应蛋白(CRP，试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司)水平，采用化学发光免疫法测定CA19-9、CA50含量，将待测血清样本放置ARCHITECT C16000全自动生化分析仪 [雅培贸易(上海)有限公司] 的配套试剂盒内(20 ℃)，避免泡沫产生，使用前后手动开关试剂盒瓶盖，CA19-9、CA50含量由仪器自动读取。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-6、TNF-α和CRP含量，预先设置标准品孔和样本孔，取抗人IL-6/TNF-α/CRP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IL-6/TNF-α/CRP与单抗结合，加入生物素化的抗人IL-6、TNF-α和CRP，使其形成免疫复合物，洗涤除去游离成份，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体，与IL-6、TNF-α和CRP抗原-抗体复合物结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，温育并彻底洗涤。于各反应孔中加入3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)底物溶液0.1 mL，37 ℃ 10～30 min，最后加入硫酸0.05 mL终止反应。在450 nm处测OD值，大于阴性对照组OD值的2.1倍即为阳性，反之则为阴性。上述实验均严格按照说明书进行操作。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 各组血清CA19-9、CA50水平比较

观察组血清CA19-9、CA50水平均高于对照组(P<0.05)。重度亚组血清CA19-9、CA50、IL-6、TNF-α、CRP水平均高于轻度亚组和中度亚组，中度亚组血清CA19-9、CA50、IL-6、TNF-α、CRP水平均高于轻度亚组(P<0.05)。见表2及表3。

表2 观察组与对照组血清CA19-9、CA50水平比较

表3 观察组各亚组血清CA19-9、CA50及炎症因子表达水平比较

2.2 血清CA19-9、CA50水平对胆囊结石的诊断效能

ROC曲线分析显示，血清CA19-9、CA50单独及联合对胆囊结石均有一定诊断价值，但联合诊断效能更高，其ROC曲线下面积(AUC)值最大为0.801。见表4及图1。

表4 血清CA19-9、CA50单独及联合对胆囊结石的诊断效能

2.3 血清CA19-9、CA50水平与胆道炎症程度的相关性

Spearman相关性分析显示，血清CA19-9、CA50水平与胆道炎症程度呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 血清CA19-9、CA50水平与胆道炎症程度的相关性

3 讨论

胆囊结石是临床常见病，以中老年人群多见，随着人口老龄化程度的增长、人们饮食结构及生活环境改变，其发病率逐年攀升并且有患病患者群年龄下降的趋向[6]。目前，临床针对该病的治疗主要根据症状严重程度、胆囊功能以及是否合并其他疾病进行综合治疗。胆囊结石可嵌顿于胆囊颈部引起急性胆囊炎，老年患者更易出现胆囊化脓、坏疽并穿孔等严重并发症，不利于促进预后转归[7-8]。因此有效判断老年胆囊结石患者胆道炎症程度有一定的必要性。

血清CA19-9、CA50是临床常用肿瘤标志物。其中CA19-9是癌性抗原，主要由消化系统上皮细胞合成，在正常成年人组织内含量很低，当CA19-9水平持续性明显升高时，提示胰腺、胆道、胃肠道肿瘤风险较高[9-10]。CA50与CA19-9同为糖类蛋白肿瘤的重要标志物，虽然其敏感性及特异性不高，但对胆管隐匿性病灶的诊断具有一定价值，可在胆管癌中检出表达水平升高[11]。既往研究[12-13]表明，联合检测血清CA19-9、CA50表达对胆管癌的早期诊断和预后评估均有重要意义，其表达或许对胆囊结石、胆道炎症有一定指导意义。本研究发现，观察组血清CA19-9、CA50水平较对照组更高，说明胆囊结石患者血清CAl9-9、CA50水平呈高表达。究其原因可能是：正常情况下，胰液和胆汁中有较高含量的CA19-9，而其在血清中含量较低，结石梗阻导致胆汁淤滞和肠液反流，刺激胆管壁，增加胆管壁通透性，使CA19-9向血液逆流，导致血清CA19-9升高；同时，结石梗阻可刺激胆管、胰管上皮及肠壁细胞炎症、坏死、增生，增加血清CA19-9分泌[14]。IL-6是促炎细胞因子，其通过细胞表面Ⅰ型细胞因子介导炎症反应；TNF-α是免疫反应和炎症反应的重要递质，主要由平滑肌细胞及巨噬细胞产生，可促进炎症细胞因子的合成和释放，使炎症细胞聚集和黏附；CRP是由肝脏合成的敏感反应蛋白，在急性炎症反应阶段或受到损伤后其表达可迅速升高[15-16]。本研究将入组的120例老年胆囊结石患者根据胆道炎症程度分为轻、中、重度3组，比较各组血清CA19-9、CA50及炎症因子表达水平，结果显示重度亚组血清CAl9-9、CA50水平较轻度亚组和中度亚组更高，而中度亚组血清CAl9-9、CA50水平较轻度亚更高，提示胆囊结石患者血清CAl9-9、CA50水平随胆道炎症程度而升高。分析可能的原因：胆囊结石梗阻可引起胆囊积液、化脓、胆囊颈结石嵌顿及坏疽性胆囊炎，诱发细菌感染，刺激胆管和胰管上皮、肠壁细胞，加重炎症反应，导致CA19-9、CA50及IL-6、TNF-α、CRP呈高表达[17]。进一步通过ROC曲线分析血清CA19-9、CA50单独及联合对胆囊结石的诊断效能，发现血清CA19-9、CA50联合诊断胆囊结石的AUC大于单独诊断，提示二者联合对胆囊结石的诊断效能更好。Barahona等[18]研究发现CA19-9、CA50虽然是肿瘤标志物，但对于合并胆道炎症、阻塞性胆道疾病及胰腺炎患者其CA19-9、CA50水平亦明显升高，当胆道炎症改善后，血清CA19-9、CA50水平降低，故推测CA19-9、CA50也可作为炎症标志物，其表达与炎症反应程度或有相关性。Spearman相关性分析显示，血清CA19-9、CA50水平与胆道炎症程度呈正相关，囊结石患者胆道炎症程度越严重，血清CA19-9、CA50及炎症因子表达水平越高。因此联合CA19-9、CA50及炎症因子能正确评估胆道炎症，为手术方式的选择提供参考。尽管近年来腹腔镜下胆囊切除术已在临床广泛开展，但对于胆道炎症较为严重的患者，其手术操作难度大，可能会损伤胆道，增加手术风险[19-20]。因此，检测血清CA19-9、CA50的表达，可指导胆道炎症的判断，对于血清CA19-9、CA50表达异常，提示炎症较为严重的患者应选择开腹手术，以降低胆道损伤，保障手术安全。

综上，胆囊结石患者术前进行血清CA19-9、CA50表达检测可作为临床判断胆道炎症的重要参考指标，指导患者诊疗方案的制定。