多囊卵巢综合征患者的卵母细胞质量与胚胎发育潜能关系的研究

蔡娇娇 杨欢利 陆文昊 沈秀珍 诸溢扬

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一种常见的内分泌疾病，我国育龄期女性患病率为5.16%[1]。PCOS患者的甾体激素合成异常，糖、脂代谢机制受损，对患者进行促排卵治疗后，卵母细胞的质量和发育潜能可能受到影响。既往研究显示PCOS患者卵母细胞成熟度和受精率降低，胚胎着床率也降低[2-3]，也有研究表明PCOS患者的囊胚形成率和累积活产率并没有受到影响[4]。因此，对于PCOS患者卵母细胞质量与胚胎发育潜能的关系，临床并没有定论。本文通过回顾性分析PCOS患者的各项数值，探讨辅助生殖技术中PCOS对患者卵母细胞和胚胎发育潜能的影响，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2019年1月至2021年12月在浙江省台州医院生殖医学中心接受体外受精（in vitro fertilization,IVF）助孕的患者242例作为研究对象。纳入标准：（1）女方年龄＜35岁；（2）长方案或拮抗剂方案促排卵治疗；（3）受精方式为常规IVF。排除女方卵巢早衰患者、男方精液严重质量异常患者以及处于卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）受精周期者。其中PCOS患者95例（PCOS组），单纯输卵管因素不孕患者147例（对照组）。PCOS诊断标准[5]：（1）稀发排卵或无排卵；（2）高雄激素的临床表现和（或）高雄激素血症；（3）卵巢多囊样改变：B超检查一侧卵巢或双侧卵巢直径2～9 mm的窦卵泡数≥12个，和（或）卵巢体积≥10 ml。上述条件符合其中2条，并排除其他高雄激素血症疾病（如先天性肾上腺皮质增生、库欣综合征等）。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者对治疗方案知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法 两组患者均采用长方案或拮抗剂方案进行促排卵。当优势卵泡直径≥18 mm，同时至少有3个卵泡的直径≥17 mm时，给予5 000～10 000 U人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）肌肉注射，35～36 h后阴道超声引导下取卵，卵母细胞在体外培养4～5 h后行常规IVF。

男方于女方取卵日留取精液，密度梯度离心法优化精液，按1万精子/卵加入受精微滴，精卵共同孵育，置于37℃，6%CO2培养箱中培养。18～20 h后观察受精情况。受精后第2天（D2）和D3观察胚胎卵裂情况，D5、D6观察囊胚发育情况。

1.3 观察指标 观察并比较（1）两组患者一般资料，包括女方年龄、不孕年限、BMI、基础卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）、基础促黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、基础雌二醇（estradiol,E2）、基础睾酮（testosterone,T）、促性腺激素（gonadotropin,Gn）总量、Gn总天数；（2）两组患者获卵数及卵母细胞质量，包括成熟卵母细胞数、卵母细胞成熟率、受精数、受精率、正常受精数、正常受精率；（3）两组患者胚胎发育情况，包括卵裂数、卵裂率、D3优胚数、D3优胚率、可利用胚胎数、可利用胚胎率、囊胚形成数、囊胚形成率。

1.4 统计学处理 采用SPSS 25.0统计软件。正态分布的计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；非正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般资料比较 两组患者女方年龄、女方不孕年限、基础FSH、基础E2、Gn总量比较差异均无统计学意义（均 P＞0.05）。PCOS组患者 BMI、基础LH、基础T、Gn总天数均高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

2.2 两组患者获卵数及卵母细胞质量比较 两组患者受精率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PCOS组患者获卵数、成熟卵母细胞数、受精数、正常受精数均多于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），但成熟卵母细胞率、正常受精率均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组患者获卵数及卵母细胞质量比较

2.3 两组患者胚胎发育情况比较 两组患者D3优胚数比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PCOS组患者由于获卵多，其卵裂数、可利用胚胎数、囊胚形成数均多于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），但卵裂率、D3优胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表3。

表3 两组患者胚胎发育情况比较

3 讨论

PCOS是一种复杂的异质性疾病，其特征是高雄激素、慢性无排卵，明显的家族聚集性表明PCOS具有遗传性[6]。来源于PCOS患者的卵泡膜细胞培养显示睾酮分泌明显增加，这种高雄激素环境改变了卵泡周围的微环境，导致卵泡发生异常[7]。另有研究发现PCOS患者的卵母细胞中与减数分裂和细胞骨架组织相关的一些基因TUBB8和TUBA1C表达异常[8]，TUBB8基因的突变会导致减数分裂纺锤体组装受阻，卵母细胞成熟阻滞，胚胎早期发育阻滞等[9-10]。

本研究结果显示，PCOS组与对照组相比获卵数明显较多，其成熟卵母细胞数、受精卵数、正常受精数等都显著增多，说明由于PCOS患者基础窦卵泡较多，经促排后能募集更多的卵母细胞。但是本研究也发现其卵母细胞成熟率、正常受精率、卵裂率则刚好相反，说明卵母细胞质量明显受到影响。另外，D3优胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率也明显低于对照组，说明PCOS对胚胎发育潜能也有影响。有文献报道，PCOS患者卵泡液中同型半胱氨酸会对细胞产生毒性反应，而且卵母细胞暴露于高LH和高雄激素环境，颗粒细胞分裂和凋亡功能发生改变，导致卵母细胞质量也相应下降[11-12]。既往研究发现，PCOS患者虽然胚胎质量比其他患者降低，但是临床妊娠率无统计学差异[3]，也有持相反观点认为PCOS患者胚胎质量优于普通排卵正常患者[13]。本研究发现，PCOS患者D3胚胎质量比对照组显著下降，囊胚形成率也比对照组低，与黄剑磊等[3]的研究结果一致。

综上所述，PCOS患者虽然获卵较多，但卵母细胞成熟度及正常受精率、优胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率都明显下降，说明其卵母细胞质量明显受到影响。临床上目前可采用双扳机来改善卵母细胞成熟度，实验室也有通过IVM技术获得更多成熟卵母细胞，其目的都是为了患者获得更多优质胚胎及提高妊娠率，当然，目前对改善卵母细胞质量的方法需要更多的深入研究，以期给患者带来更好的临床结局。