CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α、内毒素水平与高热惊厥发生的相关性分析*

李亚鹏，李 琴，李 莉，杨 拳

四川省遂宁市中心医院儿科，四川遂宁 629000

手足口病好发于5岁以下儿童，是一种由肠道病毒感染引起的急性传染性疾病，主要临床表现为手、足、口咽部发生疱疹，有些情况下可能出现发热等症状，一般情况患儿预后良好，少数患儿进展为重症病例，可能会发生惊厥、脑炎、神经源性肺水肿等，严重者可危及生命[1-2]。柯萨奇病毒A组16(CV-A16)型是引起手足口病的主要病原体之一，患儿感染此病毒后临床症状较轻，但具有较高的发病率[3]。高热惊厥是儿科常见的一种急性代谢性疾病，通常指小儿中枢神经系统以外的感染导致体温超过38 ℃发生的惊厥[4]，是手足口病患儿常见的并发症。手足口病患儿可能会出现长时间惊厥和惊厥持续状态，严重者可能导致惊厥性脑损伤，影响患儿健康。内毒素是革兰阴性菌菌体裂解后释放出的毒素，又被称为“热原”。有研究表明，手足口病患儿内毒素水平明显高于健康者[5]。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种多功能细胞因子，能够参与包括细胞增殖、分化和死亡多个生物学过程[6]。有研究表明，重症组手足口病患儿血清TNF-α水平高于轻症组与健康对照组[7]。内毒素能够作用于体内的巨噬细胞、中性粒细胞等产生TNF-α等细胞因子，细胞因子作用于下丘脑的体温调节中枢，导致人体体温升高而致发热。目前，对手足口病患儿惊厥发生的机制尚不清楚，TNF-α与内毒素是影响手足口病发生的生物学因子。本研究通过检测CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α与内毒素水平，分析二者与CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年12月至2021年10月本院收治的100例CV-A16型手足口病患儿作为研究对象，其中男56例，女44例；年龄0.5～5.0岁，平均(2.36±0.58)岁。根据是否发生高热惊厥[8]分为高热惊厥组(39例)和非高热惊厥组(61例)。高热惊厥组男21例，女18例，年龄0.5～5.0岁，平均(2.28±0.50)岁；非高热惊厥组男35例，女26例，年龄0.5～5.0岁，平均(2.41±0.63)岁。纳入标准：(1)患儿均符合《手足口病诊疗指南(2018年版)》[9]中的手足口病诊断标准；(2)经病原菌检测为CV-A16型手足口病。排除标准：(1)以往发生过惊厥或癫痫的患儿；(2)父母曾有过惊厥或癫痫史的患儿；(3)合并其他病原感染的患儿；(4)合并有脑炎等严重神经系统症状的患儿。另选取同期在本院健康体检的52例儿童作为对照组，其中男30例，女22例；年龄0.5～6.0岁，平均(2.45±0.67)岁。3组受试者性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。所有受试者及其监护人均知情同意并签署知情同意书，本研究经本院伦理委员会批准实施。

1.2试剂与仪器 TNF-α酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(型号：ab181421)、显色基质法鲎试剂盒(型号：AT7571-10T)均购自艾博抗(上海)贸易有限公司；酶标仪(型号：JC-MB68)、紫外可见分光光度计(型号：Alpha-1860Plus)、全自动生化分析仪(型号：URIT-8401)均购自济南泽凯医疗器械有限公司。

1.3方法

1.3.1标本采集 CV-A16型手足口病患儿于入院第2天清晨、对照组儿童于体检当天清晨抽取空腹静脉血4 mL，其中2 mL用于检测实验室指标，剩余2 mL在4 ℃下以3 000 r/min离心15 min，转移上清液至新离心管中，置于-20 ℃冰箱备用。

1.3.2实验室指标检测 采用全自动生化分析仪检测血液中性粒细胞比例及血清钾(血钾)、血清钠(血钠)、血浆钙(血钙)、血清镁(血镁)水平。

1.3.3血清TNF-α、内毒素水平检测 采用ELISA试剂盒对血清TNF-α水平进行检测，使用酶标仪检测450 nm波长处的A值，根据标准品浓度绘制标准曲线，并利用回归方程计算血清TNF-α水平。采用改良基质偶氮显色法对血清内毒素水平进行检测，使用紫外可见分光光度计测定545 nm波长处的A值，并通过标准曲线计算血清内毒素水平。

2 结 果

2.1对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组实验室指标水平比较 对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组中性粒细胞比例依次升高，血钙和血镁水平依次降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；3组血钾和血钠水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组实验室指标水平比较

2.2对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组血清TNF-α、内毒素水平比较 对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组血清TNF-α、内毒素水平均依次升高，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组血清TNF-α、内毒素水平比较

2.3CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α与内毒素水平的相关性分析 CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α水平与内毒素水平呈正相关(r=0.486，P<0.001)，见图1。

图1 CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α水平与内毒素水平的相关性分析

2.4多因素Logistic回归分析CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的影响因素 多因素Logistic回归分析结果显示，血清TNF-α、内毒素水平升高是CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的独立危险因素(P<0.05);而血钙、血镁水平升高是CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的独立保护因素(P<0.05)。见表3。

表3 多因素Logistic回归分析CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的影响因素

2.5血清TNF-α、内毒素水平对CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的诊断价值 ROC曲线分析结果显示，血清TNF-α、内毒素单项和二者联合检测诊断CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的AUC分别为0.810、0.765、0.930，二者联合检测优于单项检测(P<0.05)。见表4、图2。

表4 血清TNF-α、内毒素水平对CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的诊断价值

3 讨 论

CV-A16型是引起手足口病的主要肠道病毒，其感染人体后，能够与咽部和肠道上皮细胞表面相应的病毒受体结合，经细胞内吞作用进入细胞，在患儿体内进行复制和扩散后作用于相应的细胞和组织，从而引起患儿组织和器官发生一系列炎症反应[10]。中性粒细胞是机体抵御感染入侵的一种特殊白细胞，中性粒细胞增多与急性感染和炎症非反应有关，并且增加程度与感染程度也有一定关系[11]。中性粒细胞比例是炎症反应的一项可靠指标，有研究表明其与儿童多种感染性疾病有关[12-13]。本研究结果显示，对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组中性粒细胞比例依次升高，提示CV-A16型手足口病患儿存在炎症反应，且CV-A16型高热惊厥手足口病患儿炎症反应更严重。有研究表明，血钙、血镁水平降低与小儿热性惊厥的发作有一定关系[14-15]。本研究结果显示，对照组、非高热惊厥组和高热惊厥组血钙和血镁水平依次降低，多因素Logistic回归分析结果显示，血钙、血镁水平升高是CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的独立保护因素，提示低血钙、低血镁可能是CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的因素之一，患儿发生高热惊厥时，需要进一步检查血液电解质水平，维持机体内环境稳定，从而尽可能避免惊厥发生[16]。

TNF-α主要由活化的单核细胞和巨噬细胞产生，是能够促进细胞增殖和分化的一种重要炎症因子，与多种炎症性疾病的发生有关[17]。张荣等[18]研究表明，TNF-α参与手足口病的发病，手足口病患儿血清TNF-α水平明显高于健康者，随着病情加重，TNF-α水平逐渐升高。本研究结果显示，CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α水平明显高于健康儿童，与以上研究结果一致[17]，原因可能是因为TNF-α的过量表达形成过度炎症反应，从而导致机体免疫失衡，进而参与手足口病发生的某一机制。陈豪等[19]研究表明，高热惊厥患儿血清TNF-α水平高于健康者，血清TNF-α水平升高与高热惊厥的发生有关。本研究结果显示，高热惊厥组血清TNF-α水平明显高于非高热惊厥组，多因素Logistic回归分析结果显示，血清TNF-α水平升高是CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的独立危险因素，提示TNF-α可能与患儿高热惊厥的发生有关，原因可能是因为TNF-α对炎症反应的促进作用，具体机制有待进一步研究。

徐鹏飞等[20]研究发现，肠黏膜屏障功能损伤与手足口病的发生有一定关系，手足口病患儿肠屏障功能受损导致肠道通透性增加，从而使肠道病毒有机会入侵机体并大量繁殖，使手足口病病情加重。本研究结果显示，CV-A16型手足口病患儿血清内毒素水平明显高于健康儿童，与权亚利[5]的研究结果一致，原因可能是因为CV-A16型感染致患儿肠道屏障功能受损，导致内毒素水平升高。内毒素是革兰阴性菌细胞壁中的一种成分，也被称之为脂多糖。有研究表明，Toll样受体4可以活化核因子-κB信号通路，导致TNF-α等炎症细胞因子合成与释放，促进炎症反应发生[21]。本研究结果显示，CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α水平与内毒素水平呈正相关，可能是因为内毒素作用于体内的巨噬细胞产生TNF-α等细胞因子。本研究还发现，CV-A16型高热惊厥手足口病患儿血清内毒素水平明显高于CV-A16型非高热惊厥患儿，内毒素水平升高是CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的独立危险因素，提示内毒素可能通过影响TNF-α的表达水平，导致患儿炎症因子水平升高，从而引起体温升高，患儿出现高热时可能引起血浆钙离子浓度下降，进而可能会导致高热惊厥发生。此外，本研究的ROC曲线分析结果显示，血清TNF-α、内毒素均可作为诊断CV-A16型手足口病患儿发生高热惊厥的有效指标，且二者联合检测诊断价值更高。当血清TNF-α水平≥142.38 pg/mL和血清内毒素水平≥1.05 EU/mL时，CV-A16型手足口病患儿更易发生高热惊厥，临床应密切关注血清TNF-α、内毒素水平异常升高的患儿，以便早期防治高热惊厥。

综上所述，CV-A16型手足口病患儿血清TNF-α和内毒素水平均呈高表达，二者与患儿高热惊厥的发生有一定关系，可能为研究CV-A16型手足口病患儿高热惊厥的发生机制提供一定参考。但本研究纳入CV-A16型手足口病患儿数相对较少，且患儿血清TNF-α和内毒素水平的相关性较低，今后将收集更多的患儿以验证血清TNF-α和内毒素水平的相关性，并分析二者在CV-A16型手足口病发病过程中的具体机制。