盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液细菌内毒素方法学确认

李佳 王谋琛

摘要：目的： 建立盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液实验室转移的细菌内毒素方法学确认。方法：采用《中国药典》细菌内毒素检查法-凝胶法。结果：盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液稀释最大浓度为0.625mg/ml时，对鲎试剂检查无干扰作用。结论：盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液在实验室转移后，按此方法进行细菌内毒素检查法是可行的。

关键词：盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液;细菌内毒素检查法;干扰试验

【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）14-01

一、目的

根據《盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液》质量标准【细菌内毒素】检查项下规定，进行实验室转移的细菌内毒素方法学确认，确定样品对不同厂家鲎试剂的最小不干扰倍数或最大不干扰浓度，以及样品日常检验的稀释倍数或稀释浓度。

二、试验方案：

1、试验依据：《盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液》质量标准

《中国药典》细菌内毒素检查法-凝胶法

2、限值：L=0.6 EU/mg

3、方法：选择两个厂家的鲎试剂分别进行鲎试剂灵敏度复核、干扰试验预实验、干扰试验、细菌内毒素试验，试验温度：37±1℃，试验保温时间60±2min。

4、仪器和试药：

恒温水浴锅、漩涡混合器、无热原吸头、移液枪、0.25 EU/ml鲎试剂（湛江安度斯生物有限公司、福州新北生化工业有限公司）、细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水（BET）（均为湛江安度斯生物有限公司）、3批样品（规格：100ml：左氧氟沙星0.5g与氯化钠0.9g）。

三、试验操作及结果：

1、灵敏度复核试验

取细菌内毒素工作标准品用BET水溶解稀释，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，分别加入两厂家鲎试剂中，结果两厂家鲎试剂灵敏度测定值λC均为0.25EU/ml，均在0.5～2.0λ之间，鲎试剂灵敏度复核合格，可用于细菌内毒素检查。

2、干扰试验预试验

2.1样品有效稀释（MVC）的计算

公式MVC=λ/L

其中：L为样品限值L=0.6 EU/mg，λ为鲎试剂标示灵敏度，取目前市售鲎试剂最小灵敏度λ=0.03EU/ml，确定最大稀释倍数不得超过MVD=cL/λ0.03=100。

2.2试验操作

取细菌内毒素标准品，加样品溶液稀释，制成含2λ的供试品原液阳性对照溶液;另取样品，加BET水制成稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的样品溶液（NPC组1、NPC组2），分别取原液、稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍的样品溶液，分别加入1.0EU/ml内毒素标准品溶液，即得含2λ的稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的样品阳性对照溶液（PPC组1、 PPC组2）。采用两个厂家的鲎试剂分别进行试验，同时加BET水作阴性对照（NC），加2λ浓度内毒素标准品溶液作阳性对照（PC），结果见表1。

由表1可见，样品1的最大不干扰浓度为0.625mg/ml，在该浓度下样品对鲎试剂检查无干扰作用，可进行正式干扰试验。

3、干扰试验

取3批样品，根据干扰预试验结果，将样品稀释终浓度为0.625mg/ml做为3批样品溶液。分别用两厂家鲎试剂进行干扰试验，将细菌内毒素工作标准品用0.625mg/ml样品溶液溶解稀释，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每个浓度平行做4管，作为干扰试验系列（Et系列）;另将细菌内毒素工作标准品用BET水溶解稀释，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每个浓度平行做4管，作为鲎试剂标示灵敏度的对照系列（Es系列）;2管作为供试品溶液检查（S），另外2管作为阴性对照（NC），结果见表2。

由表2可见，ES=0.25，在0.5λ～2.0λ之间，Et也在0.5 ES～2.0 ES之间，认为样品在该浓度时对细菌内毒素检查无干扰作用，符合细菌内毒素检查有效性的要求，可以确定样品的最大不干扰浓度为0.625mg/ml。

4、细菌内毒素检查

取样品3批，分别加BET水稀释成浓度为0.625mg/ml的溶液，进行细菌内毒素检查，结果样品和阴性对照均为阴性，样品阳性和阳性对照均为阳性，表明实验有效。样品管均为阴性，表明3批样品中均未检出细菌内毒素，与干扰试验结果一致。

四、结论：

经以上试验结果确定，样品在最大不干扰浓度为0.625mg/ml的浓度下对两个厂家鲎试剂不干扰。实验室转移后，盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液按此方法进行细菌内毒素检测和质量控制是可行的。

参考文献：

[1]《中国药典》细菌内毒素检查法

[2]《中国药品检验标准操作规范》细菌内毒素检查法