气相色谱法测定中药制剂中11 种挥发性成分的含量

左军凤，熊马剑，朱碧君

江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029

中药材中含有挥发性成分的品种较多，如丁香、八角茴香、广藿香、川芎、薄荷、艾叶、姜黄等。中药挥发性成分主要来源于芳香类中药，由多种成分组成，除含有脂肪族和芳香族的烃及含氧化物外，大多含萜类。萜类化合物在抗微生物、抗炎、抗肿瘤、抗菌抑病毒等方面发挥着重要的作用［1-6］，特别是单萜类化合物在抗血栓、抗氧化、改善血管弹性和调节心血管功能等方面有显著的优势和潜力［7-12］。因此，为了更好地控制这一类中药制剂的产品质量，本文采用气相色谱法，通过方法学研究建立了中药制剂中11 种挥发性成分的含量测定方法，为行业完善相关的质量标准提供一点经验。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

7890A 型气相色谱仪，美国安捷伦公司；AL204-IC 型电子天平，美国梅特勒-托利多公司；CTC-256 型恒温恒湿实验箱，德国美墨尔特公司；KQ-500DE 型超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试药

芳樟醇对照品，批号111503-201603，含量97.8%；桉油精对照品，批号110788-201506，含量98.4%；棕榈酸甲酯对照品，批号190030-201604，含量100.0%；α-蒎烯对照品，批号110897-201803，含量99.9%；β-蒎烯对照品，批号111827-201202，含量100.0%；樟脑对照品，批号110747-201810，含量99.0%；薄荷脑对照品，批号110728-200506，含量100.0%；冰片对照品，批号110743-201706，含量97.6%；以上对照品均购自中国食品药品检定研究院。藁本内酯对照品，批号72570008，含量100.0%；丹皮酚对照品，批号74330010，含量100.0%；以上二种对照品均购自上海安谱实验科技股份有限公司。氧化石竹烯对照品，批号Y01N7N23918，含量100.0%，购自上海源叶生物科技有限公司。无水乙醇，批号2016012，色谱纯，购自永华化学科技（江苏）有限公司。

1.3 样品

31 批次中药制剂，来源于国内31 家药品生产企业。主要剂型有颗粒剂、散剂、丸剂和片剂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP-Innowax 毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.15 μm）；柱温：初始温度60 ℃，保持2 min，然后以20 ℃/min 升温至200 ℃；进样口温度：200 ℃；检测器温度：220 ℃；载气：氮气；流速1.0 mL/min；分流比10∶1。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液取各对照品适量，精密称定，分别用无水乙醇使溶解并稀释成各含50 μg/mL 的对照品储备液，再吸取各对照品储备液适量混合并稀释成不同浓度的混合对照品溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液取单包装样品，剪开，将内容物转入锥形瓶中，精密加入无水乙醇20 mL，称定重量，超声提取（200 W，40 kHz）30 min，放冷，补足减失的量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 空白溶液取同批次无水乙醇，作为空白溶液。

2.3 专属性试验

取对照品混合溶液、供试品溶液、空白溶液分别进样，结果11 种对照品分离良好，在色谱图中按出峰时间由左到右依次为：α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、樟脑、芳樟醇、薄荷脑、冰片、氧化石竹烯、棕榈酸甲酯、丹皮酚、藁本内酯，空白溶液无干扰，供试品溶液色谱中相应成分出峰时间与对照品一致，见图1。

图1 气相色谱图：A.混合对照品溶液；B.供试品溶液；C.空白溶液

2.4 线性关系考察

取各对照品混合液，分别精密吸取1 μL 注入气相色谱仪，以浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，由于冰片分为左旋结构和右旋结构，在本实验条件下出双峰，结果以两个峰面积之和来计算，11 种挥发性成分在线性范围内具有良好的线性关系，见表1。

表1 线性关系 μg/mL

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品溶液，连续进样6 次，结果11 种挥发性成分峰面积的RSD 在1.8%～5.0%之间，表明精密度良好。

2.6 重复性试验

选取小儿豉翘清热颗粒，按“2.2.2”项下处理，制备6 份供试品溶液进行测定，结果检出α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑和藁本内酯，其余成分未检出，RSD分别为3.3%、4.8%、3.3%和4.1%，表明重现性良好。

2.7 回收率试验

选取“2.6”项下同批次制剂，称取1/2 袋内容物，将内容物转入锥形瓶中，加入约相当于制剂中对照品含量80%、100%、120%的混合对照品溶液各2 份，按“2.2.2”项下处理，测定，记录峰面积并计算加样回收率。11 种挥发性成分回收率在90.9%～104.8%之间，RSD值在2.4%～6.0%之间，表明回收率良好。结果见表2。

表2 回收率试验结果

表2（续）

2.8 检出限

取混合对照品溶液适量，逐级稀释，以信噪比3∶1 计算检出限，α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、樟脑、芳樟醇、薄荷脑、冰片、氧化石竹烯、棕榈酸甲酯、丹皮酚和藁本内酯的检出限分别为0.25 μg/mL、0.25 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.29 μg/mL、0.25 μg/mL、0.49 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL 和0.50 μg/mL，表明灵敏度良好。

2.9 供试品含量测定

采用所建立的方法对来源于31 家药品生产企业的31 批次中药制剂进行测定，结果有7 批次中药制剂中检出上述挥发性成分，主要检出成分有樟脑、薄荷脑、藁本内酯、冰片、芳樟醇、α-蒎烯、β-蒎烯，见表3。

表3 样品测定结果 mg/袋

3 讨论

本研究建立了气相色谱法同时测定中药制剂中11 种挥发性成分的方法并用于31 批次中药制剂样品的分析测定。建议药品生产企业，对于生产的制剂含有相关的挥发性成分，尤其是挥发性成分具有重要功效的，可借鉴本方法来控制产品的质量，以保障患者的用药安全。