干燥方式对桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱及指标成分的影响

陈江平，徐东婷，李玲，王瑜婷，黎桃敏，张志鹏

广东一方制药有限公司，广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244

桃核承气汤出自汉·张仲景的《伤寒论》辨太阳病脉证并治太阳病证篇，原处方为：桃仁五十个（去皮尖），大黄四两，桂枝二两（去皮），甘草二两（炙）,芒硝二两。是2018 年4 月国家中医药管理局发布的《古代经典名方目录（第一批）》中100 首经典方剂的第一首［1］。该方为临床常用经方之一，具有活血化瘀，通下祛热的功效，主治瘀热互结证，症见癫狂，腹痛，大便秘结，神志不清，烦躁失眠，痛经等。现代药理临床研究表明，该方在急性盆腔炎、胎盘滞留、附件炎、肠梗阻、子宫内膜异位症、急性脑出血等方面具有良好的治疗效果［2］。

目前，有关桃核承气汤的研究主要集中在药理药效和临床应用报道，制剂工艺方面的研究较少。由于古今制剂方式的更迭变化和现代市场应用的需要，传统汤剂在服用方式和保存方面存在诸多不便，颗粒剂因其携带方便、便于服用的特点而备受消费者喜欢。干燥工艺是颗粒剂制备的重要工序，其干燥方式的种类、干燥工艺的温度、时间等参数均会对中药浸膏粉的粉体学性质造成一定程度的影响［3-4］。本研究以浸膏粉的物理指纹图谱和指标成分含量为评价指标，考察四种干燥方式对桃核承气汤浸膏粉质量的影响，以期为桃核承气汤浸膏粉干燥方式的选择及后续制剂工艺研究提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters Arc 型高效液相色谱仪（美国Waters 公司），LYO-0.5 型冷冻干燥机（上海东富龙科技股份有限公司），B-290 型喷雾干燥仪（瑞士Buchi有限公司），YOD-230 型冷冻干燥箱（美国Thermo Vanquish 公司），DHG-9146A 型电热恒温鼓风干燥箱，DZF-6050 型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），Milli-Q Direct 型超纯水系统（德国Merck 公司），ME204E 型万分之一天平、XP26 型百万分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO 公司），JZ-7 型粉体振实密度仪（成都精新粉体测试设备有限公司），JL-A3 型粉体特性测试仪（丹东百特仪器有限公司），SHH-250SD 型稳定性试验箱（重庆市永生实验仪器厂），KQ-500DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

苦杏仁苷（批号：110820-201808，纯度88.2%），芦荟大黄素（批号：110795-202011，纯度97.5%），大黄酸（批号：110757-201607，纯度99.3%），大黄素（批号：110756-201913，纯度96.0%），大黄酚（批号：110796-201922，纯度99.4%），大黄素甲醚（批号：110758-201817，纯度99.2%）、肉桂酸（批号：110786-201604，纯度98.8%），甘草酸（批号：110731-202021，纯度96.2%），上述对照品均购自中国食品药品检定研究院。实验用药材经广东一方制药有限公司魏梅主任药师鉴定为正品，均符合2020年版《中国药典》一部的各品种项下要求。

2 方法与结果

2.1 桃核承气汤浸膏粉的制备

经文献考证［5］，确定桃核承气汤的处方剂量为燀桃仁15.0 g、大黄55.2 g、肉桂27.6 g、炙甘草27.6 g、芒硝27.6 g，浸膏的制备方法为：上述5 味，取除芒硝的其余4 味，加水1 400 mL，煎煮至500 mL，除去药渣，加入芒硝，加热至沸，再用旋转蒸发仪减压低温浓缩至相对密度为1.08～1.12 的浸膏。将桃核承气汤浸膏均分为4 份，每份约300 g，分别进行喷雾干燥（干燥时间0.5 h）、鼓风干燥（干燥时间24.5 h）、真空干燥（干燥时间42.5 h）、冷冻干燥（干燥时间76.0 h），干燥后在相对湿度为40%以下的环境中进行粉碎，将干浸膏进行相同时间的粉碎并过80 目筛，得桃核承气汤浸膏粉。

2.2 桃核承气汤浸膏粉的物理指纹图谱研究

根据桃核承气汤浸膏粉的粉体学特性，将其物理指纹图谱的一级指标划分为均一性、堆积性、流动性、可压性和稳定性5 个方面，二级指标的测定首选法定标准收载的方法［6］。

2.2.1 物理指纹图谱的指标转化采用松密度（Da）、振实密度（Dc）、含水量（HR）、吸湿率（H）、豪斯纳比（IH）、休止角（α）、颗粒间孔隙率（Ie）、卡尔指数（IC）、相对均齐度指数（Iθ）共9 个测量值作为桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的二级指标，并对其进行标准化处理。各物理属性指标的标准转化方法及可能数值范围参考相关文献［6-9］，见表1。

表1 桃核承气汤浸膏粉的物理指纹图谱研究二级指标数值范围及标准化转换公式

2.2.2 物理指纹图谱的构建取四种桃核承气汤浸膏粉适量，测定并转化浸膏粉的二级指标参数，结果见表2。以四种浸膏粉的9 个标准化参数值为半径，采用Origin 9 软件，绘制四种桃核承气汤浸膏粉雷达图，如图1。

表2 桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱相关指标值

图1 四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱雷达图

2.2.3 相似度分析以对照物理指纹图谱为参照，采用SPSS 20.0 软件的Pearson 相关系数法，分别比较四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的相似度。结果表明，冷冻干燥粉、喷雾干燥粉、鼓风干燥粉、真空干燥粉的物理指纹图谱相似度分别为0.872、0.878、0.806、0.795，冷冻干燥粉和喷雾干燥粉的物理指纹图谱相似度接近，表明其粉体学性质较为一致；而鼓风干燥粉和真空干燥粉的相似度低于0.85，表明鼓风干燥和真空干燥对桃核承气汤浸膏粉粉体性质影响较大，其粉体学性质存在较大的差异。

2.2.4 聚类分析采用SPSS 20.0 软件，以四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的表征指标（9 个二级指标转化值）为变量，对其进行分类和判别，树状图如图2。结果表明，喷雾干燥粉与冷冻干燥粉聚为I 类，真空干燥粉与鼓风干燥粉聚为Ⅱ类，与相似度结果一致。

图2 四种干燥法制作的桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱聚类分析（CA）树状图

2.2.5 主成分分析采用SPSS 20.0 软件对四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的9 个二级指标转化值进行因子分析，主成分分析特征值与贡献率结果见表3，主成分因子载荷矩阵如图3。由表3 可知，前2 个主成分累计贡献率为93.745%，所提取的2 个主成分基本反映全部指标的信息。由图3 可知，主成分1 中载荷较高的为Da、Dc、HR、H、α，归纳为综合参数，主成分2 中载荷较高的为Iθ、IC、IH、Ie，归纳为形态参数。

表3 四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的PCA特征值与贡献率

图3 四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的主成分因子载荷矩阵图

2.2.6 压缩成型性分析根据四种桃核承气汤浸膏粉物理指纹图谱的9 个二级指标和5 个一级指标参数，求算出参数轮廓指数（index of parametric profile，IPP），参数指数（index of parameter，IP）和良好可压性指数（index of good compression，IGC），评价粉末的可压缩性并判断其是否适合直接压片［10］，结果见表4。由表4 可知，四种浸膏粉的堆积性、稳定性、可压性和均一性差异较大，流动性差异较小。当一级指标＞5 时，可认为具有良好的该性能。喷雾干燥粉具有良好的可压性和均一性，真空干燥粉和鼓风干燥粉有优越的堆积性。当IP＞0.5，IPP和IGC ≥5 时，粉体具有较好的压缩成型性；当IP＜0.5，IPP 和IGC 在3～5 时，粉体压缩成型性较差［11］。结果表明，四种浸膏粉的压缩成型性存在差异，冷冻干燥粉和真空干燥粉的IP＜0.5，IPP 和IGC 均＜5，鼓风干燥粉的IP＜0.5，压缩成型性较差；喷雾干燥粉的IP＞0.5，IPP 和IGC 均大于5，具有良好的压缩成型性，可用于直接压缩。

表4 四种桃核承气汤浸膏粉可压缩成型性分析结果

2.3 桃核承气汤浸膏粉的指标成分含量测定

2.3.1 色谱条件［12］色谱柱：ZORBAX SB-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～15 min，10% A；15～30 min，10%～20% A；30～55 min，20%～50%A；55～70 min，50% A；70～85 min，50%～80% A；85～90 min，80%～100%A；90～95 min，100% A）；检测波长：210 nm（0～30 min，苦杏仁苷），290 nm（30.01～50 min，肉桂酸），250 nm（50.01～95 min，甘草酸、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

2.3.2 对照品溶液的制备分别取苦杏仁苷、肉桂酸、甘草酸、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，置25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液，备用。

2.3.3 供试品溶液的制备取桃核承气汤浸膏粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理（功率300 W，频率50 kHz）30 min，取出，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 专属性试验分别精密吸取空白溶剂、混合对照品溶液及供试品溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，如图4。供试品溶液色谱图分离度良好，与混合对照品溶液色谱图相比，在相应保留时间处有相应色谱峰，且空白溶剂无干扰，表明该方法专属性良好。

图4 专属性试验HPLC色谱图：A.空白溶剂；B.混合对照品溶液；C.供试品溶液

2.3.5 线性关系试验分别精密吸取“2.3.2”项下混合对照品溶液，加甲醇稀释制成系列浓度的混合对照品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定。以进样浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程和相关系数，结果表明各成分在一定范围内线性关系良好，见表5。

表5 线性关系试验结果 μg/mL

2.3.6 精密度试验精密吸取“2.3.2”项下混合对照品溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样6 次，记录色谱图，计算各色谱峰峰面积的RSD。结果各色谱峰峰面积的RSD 均小于3%，表明仪器精密度良好。

2.3.7 稳定性试验取桃核承气汤喷雾干燥粉适量，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、12、24 h，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，计算各色谱峰峰面积的RSD。结果各色谱峰峰面积的RSD 均小于3%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性较好。

2.3.8 重复性试验取桃核承气汤喷雾干燥粉适量，按“2.3.3”项下方法平行制备6 份供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，计算各指标成分含量的RSD，结果各色谱峰峰面积的RSD 均小于3%，表明该方法重复性良好。

2.3.9 加样回收率试验取已知含量的桃核承气汤喷雾干燥粉适量，精密称取9 份，每份约0.25 g，分为3 组，每组分别加入低、中、高3 个浓度的混合对照品溶液，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，计算得到各色谱峰的平均加样回收率分别为102.07%、98.47%、102.79%、98.70%、99.65%、98.83%、100.75%、101.11%，RSD 均小于3%，表明该方法准确性良好。

2.3.10 浸膏粉样品含量测定分别取四种桃核承气汤浸膏粉样品适量，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，各指标成分的含量测定结果见表6。结果表明，各指标成分含量的RSD 均小于4.0%，说明四种桃核承气汤浸膏粉的指标成分含量差异无统计学意义，不同干燥方式对桃核承气汤浸膏粉指标成分含量无显著影响。

表6 四种桃核承气汤浸膏粉的指标成分含量测定结果（n=3）

3 讨论

桃核承气汤由5 味中药组成，根据中药君、臣、佐、使的配伍原则，优先选择方中君药（燀桃仁、大黄），臣药（肉桂），佐药（炙甘草）的指标成分作为工艺评价指标［13］。本研究以2020 年版《中国药典》一部各品种项下的含量测定指标为依据，首选含量高、性质稳定且易于检测的物质作为定量成分，同时兼顾各检测波长下的色谱峰形状及保留时间，确定合适的定量物质。现代研究表明，苦杏仁苷来源于燀桃仁，具有抗动脉粥样硬化、抗肺纤维化、抗肿瘤、免疫调节等广泛的药理作用［14］。蒽醌类成分来源于大黄，具有抗炎、抗肿瘤、保护心血管等生物活性，是桃核承气汤发挥泻下作用的主要成分［15］。甘草酸类成分来源于甘草，具有抗肿瘤、抗癌、免疫调节等作用［16］。肉桂酸来源于肉桂，具有抑制人肝癌细胞的增殖，并诱导细胞凋亡的作用［17］。因此，选择苦杏仁苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、甘草酸、肉桂酸含量作为桃核承气汤浸膏粉的质量评价指标。

本研究通过测定桃核承气汤浸膏粉的物理指纹图谱和指标成分含量，可以对浸膏粉的质量属性进行综合表征，从而加深对制剂过程的理解。喷雾干燥粉及冷冻干燥粉的流动性、可压性明显优于其余两种干燥方式，可有效提高干法制粒或压片过程的效率。喷雾干燥具有较好的压缩成型性，与其粉末颗粒均一性较好密切相关。四种浸膏粉的指标成分含量差异无统计学意义，说明浸膏粉的主要化学成分基本一致。综合考虑桃核承气汤浸膏粉的质量和生产效率，认为喷雾干燥更适用于桃核承气汤浸膏粉的产业化生产。

古代经典名方是历代医家在大量临床实践中形成的中医药精华，国家近年来高度重视并出台了系列政策法规指导研发，其研发是目前中医药行业的热点，也是中药产业发展的新机遇。本研究比较了四种干燥方式对桃核承气汤浸膏粉质量的影响，对桃核承气汤的制剂开发具有指导意义，也可为其他复方制剂干燥工艺的评价及选择提供了参考。