小而密低密度脂蛋白、Mac-2结合蛋白在急性缺血性脑卒中中的变化及作用研究

李兴 韩鹏飞 杨挲挲 赵乐 查江杰 李梦真 鞠传余

急性缺血性脑卒中（Acute ischemic stroke，AIS）是发病率及致残率较高的常见脑血管疾病，早期诊断及准确评估病情有助于缩短溶栓时间窗，对AIS 患者提高生存率及康复质量有重要的临床意义[1]。颈动脉粥样硬化性狭窄可以预测AIS 的发生[2]，近年来发现小而密低密度脂蛋白（Small dense low-density lipoprotein，sdLDL）是颈动脉内中膜厚度（Carotid intima-media thickness，CIMT）及不稳定斑块的独立危险因素[3，4]，Mac-2 结合蛋白（Mac-2 binding protein，M2BP）作为炎性蛋白，通过参与单核-巨噬细胞活化参与动脉粥样硬化过程[5]。虽然动脉粥样硬化作为AIS 的病理基础，sdLDL 与M2BP 参与动脉粥样硬化，但目前临床上sdLDL、M2BP 与AIS 的关系研究较少，尚未确定M2BP 与sdLDL 表达的相关性。本研究通过分析AIS 患者血清sdLDL、M2BP 水平变化及作用，旨在为临床早期诊断提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2020年9月～2021年10月于牡丹江医学院附属红旗医院（以下简称“该院”）神经内科确诊的100 例合并颈动脉粥样硬化性狭窄的AIS 患者（AIS 组），选取同期于该院体检并经颈动脉超声检查排除颈动脉斑块的100 例健康体检人员作为对照组。AIS 组中男72 例，女28 例，年龄41～70 岁，其中吸烟58 例，饮酒61 例，高血压69例。对照组中男65 例，女35 例，年龄46～70 岁，其中吸烟22 例，饮酒17 例，高血压30 例。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经该院伦理委员会批准，所有患者均知情同意。纳入标准：①符合《2018年中国急性缺血性脑卒中诊治指南》诊断标准，且经计算机断层扫描（CT）或磁共振成像（MRI）等影像学证实；②年龄40～70 岁；③经超声检查显示有颈动脉粥样硬化性狭窄。排除标准：①伴有各种先天或后天性心血管系统疾病，如先天性心脏病、高血压性心脏病、肺源性心脏病等；②伴有严重的器质性疾病，如肝、肾功能不全；③肿瘤、免疫性疾病、近4 周发生感染性疾病；④有其他可能干扰本研究的疾病，或长期使用降血脂药物的患者。

1.2 试剂与仪器 sdLDL 试剂盒购自天津悦和康生物技术有限公司，M2BP 试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司，同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）、游离脂肪酸（free fatty acids，FFA）试剂盒购自上海惠中生物科技有限公司，脂蛋白（a）[Lipoproteina，Lp（a）]、总胆固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白（High density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（Low density lipoprotein，LDL）、载脂蛋白A1（Apolipoprotein A1，ApoA1）、载脂蛋白B（Apolipoprotein B，ApoB）试剂盒购自广州科方生物技术股份有限公司。NanoQuant型酶标仪和hydroflex 型洗板机产自澳大利亚帝肯公司，全自动生化分析仪AU5800 产自美国贝克曼公司。

1.3 方法

1.3.1 指标检测 AIS 组于治疗前、对照组于体检当日，采集3～5ml 静脉血于分离胶管内，静置15min后以3 000r/min 离心10min，弃去乳糜及溶血样本，分离血清，于-80℃冰箱保存备用，检测当日于室温下自行解冻，待其恢复至室温条件进行检测。用全自动生化分析仪检测Lp（a）、TC、TG、HDL、ApoA1、LDL、ApoB、FFA、Hcy、sdLDL，酶联免疫吸附法检测M2BP。所有检验项目均严格按照试剂盒说明书操作方法进行，并采用同一批号的试剂在室内质控在控的条件下同时检测，排除非特异性干扰因素，以保证检测结果的稳定性和可比性。

1.3.2 颈动脉狭窄与脑卒中分级 根据2003年美国放射年会超声会议公布的标准，将AIS 组按颈动脉内径缩小程度分组：轻度组（0～49%）、中度组（50%～69%）、重度组（70%～100%）。脑卒中严重程度按照NIHSS 评分分组：轻度组（0～5 分）、中度组（6～13 分）、重度组（14～42 分）。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，采用GraphPad Prism 8 软件绘图，计量资料使用均数±标准差（±s）表示，两组比较采用独立样本t检验，多组比较采用单因素方差分析；计数资料用率表示，两组比较采用χ2检验，Pearson 相关性分析用于评估两参数之间的相关性，Logistic 二元回归分析用于分析AIS 的危险因素，ROC 曲线用于评价各指标诊断效能，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 AIS 组与对照组在性别、年龄方面差异无统计学意义（P＞0.05），在吸烟、饮酒、高血压等方面差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组人群一般资料比较[n（%）]

2.2 两组各指标比较 AIS 组血清Lp（a）、TC、TG、Hcy、sdLDL、M2BP 及sdLDL/LDL 水平均高于对照组，AIS 组血清HDL、ApoA1 水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组人群各指标比较（±s）

表2 两组人群各指标比较（±s）

指标 AIS组（n=100）对照组（n=100） t P Lp（a）（mg/L） 216.73±17.01 190.95±13.24 11.963 0.000 TC（mmol/L） 4.93±0.33 4.61±0.26 7.473 0.000 TG（mmol/L） 1.97±0.14 1.82±0.13 8.395 0.000 HDL（mmol/L） 1.10±0.05 1.19±0.07 -10.870 0.000 ApoA1（g/L） 1.06±0.07 1.19±0.07 -13.167 0.000 LDL（mmol/L） 2.65±0.18 2.63±0.19 0.876 0.382 ApoB（g/L） 0.87±0.11 0.87±0.09 0.121 0.904 FFA（mmol/L） 1.54±0.17 1.57±0.14 -1.344 0.181 Hcy（μmol/L） 17.00±2.09 14.38±1.64 9.885 0.000 sdLDL（mmol/L） 0.66±0.07 0.57±0.07 8.915 0.000 M2BP（ng/ml） 10.74±1.38 8.89±0.87 11.327 0.000 sdLDL/LDL 0.25±0.03 0.22±0.03 7.850 0.000

2.3 颈动脉狭窄轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP比较 将临床常用的脂质项目Hcy 作为内参，比较颈动脉狭窄轻、中、重度组血清Hcy、sdLDL、M2BP水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 颈动脉狭窄轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较（±s）

表3 颈动脉狭窄轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较（±s）

注：与轻度组比较，①P＜0.05；与中度组比较，②P＜0.05

组别 n Hcy（μmol/L） sdLDL（mmol/L） M2BP（ng/ml）轻度组 50 15.53±1.16 0.61±0.04 9.68±0.56中度组 33 17.45±0.87① 0.68±0.03① 11.15±0.62①重度组 17 20.46±1.17①② 0.78±0.04①② 13.08±0.61①②F 137.270 132.673 224.517 P 0.000 0.000 0.000

2.4 脑卒中轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较 脑卒中轻度组、中度组、重度组间血清Hcy、sd-LDL、M2BP 水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 脑卒中轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较（±s）

表4 脑卒中轻、中、重度组间Hcy、sdLDL、M2BP 比较（±s）

注：与轻度组比较，①P＜0.05；与中度组比较，②P＜0.05

组别 n Hcy（μmol/L） sdLDL（mmol/L） M2BP（ng/ml）轻度组 58 15.67±1.14 0.62±0.04 9.84±0.66中度组 27 17.94±0.89① 0.70±0.05① 11.33±0.72①重度组 15 20.47±1.44①② 0.77±0.05①② 13.18±0.57①②F 120.391 71.789 166.063 P 0.000 0.000 0.000

2.5 相关性分析 Pearson 相关性分析结果显示，M2BP与Hcy、sdLDL、NIHSS 评分均呈正相关（r=0.898、0.864和0.824，P＜0.05），sdLDL 与Hcy、M2BP、NIHSS 评分均呈正相关（r=0.820、0.864 和0.800，P＜0.05）。

2.6 AIS 危险因素分析

2.6.1 Logistic 二元回归单因素分析 Logistic 二元回归单因素分析结果显示：吸烟、饮酒、高血压、Lp（a）、TC、TG、Hcy、sdLDL、M2BP、sdLDL/LDL 是AIS 发生的危险因素（P＜0.05），HDL、ApoA1 是AIS 的保护因素（P＜0.05）。见表5。

2.6.2 Logistic 二元回归多因素分析 Logistic 二元回归多因素分析结果显示：Lp（a）、TG、M2BP 是AIS发生的独立危险因素（P＜0.05），HDL 是AIS 的独立保护因素（P＜0.05）。见表6。

2.7 Hcy、sdLDL、M2BP 对AIS 的诊断效能 Hcy、sdLDL、M2BP 的AUC 分别为0.855、0.867、0.918，截断值分别为15.050μmol/L、0.595mmol/L、9.215ng/ml，灵敏度分别为84.0%、92.0%、93.0%，特异度分别为74.0%、76.0%、79.0%；联合检测Hcy、sdLDL、M2BP的AUC 为0.937（见表7、图1）。

表5 AIS 危险因素的Logistic 二元回归单因素分析

表6 AIS 危险因素的Logistic 二元回归多因素分析

表7 Hcy、sdLDL、M2BP 对AIS 的诊断效能

图1 Hcy、sdLDL、M2BP 对AIS 诊断的ROC 曲线

3 讨论

根据《中国心血管健康与疾病报告2020》[6]显示，AIS 患者出院人数、次数的年均增速居中国心血管病前三位，随着中国人口老龄化的进展，AIS 的发病率逐年上升。《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[7]指出，对于AIS 患者发病6h 内进行静脉溶栓、超过6h 进行血管内取栓仍是疗效更好的治疗手段。有研究显示[8]，溶栓时间窗在3h 及以上是AIS 静脉溶栓患者发生早期神经功能恶化的独立危险因素，因此及时在溶栓窗内治疗是减少患者出现不良结局的关键因素，寻找能够用于AIS 早期快速诊断的生物标志物成为国内外学者的研究热点。

sdLDL 具有颗粒小、易被氧化修饰、半衰期长、易粘附等特点[9]，对于脑血管疾病，sdLDL 较LDL体现出更好的预测价值[10]，sdLDL 与AIS 的发生及病情程度有一定的关系。本研究发现，AIS 组血清sdLDL 水平、sdLDL/LDL 显著高于对照组（P＜0.05），sdLDL 在作为AIS 生物标志物方面表现出更高的潜能，与有关研究[11]相符，但本研究中sdLDL、sdLDL/LDL 并不是AIS 的独立危险因素（P＞0.05），与此前研究结果不符[12]，可能与样本量过少及纳入的影响因素过多有关。此外，sdLDL 可通过提示CIMT[13]来反映颈动脉狭窄程度，本研究结果显示，颈动脉狭窄程度越高、脑卒中程度越严重，血清sdLDL 的含量越高（P＜0.05），且sdLDL 与Hcy、NIHSS 评分呈正相关，表明sdLDL 在一定程度上可以反映AIS患者颈动脉狭窄程度。颈动脉粥样硬化性狭窄是导致AIS 常见危险因素之一[2]，由于AIS 复发率较高，sdLDL 是否可以通过提示颈动脉狭窄来提示AIS 复发的风险，还需要进一步的研究。

M2BP 又称为人可溶性半乳糖凝集素3 结合蛋白，是一种致炎性蛋白，存在于人体多种体液中，被认为是肝纤维化的生物标志物，而肝纤维化有助于识别心血管疾病高风险患者，因此M2BP 与心血管疾病间存在某种关联[14，15]。根据以往研究[16]报道，M2BP 与颈动脉斑块易损性相关，在脑卒中或短暂性脑缺血患者外周血中高表达。本研究发现，AIS 组血清M2BP 含量显著高于对照组（P＜0.05），提示M2BP 与AIS 发生有关。Logistic 二元回归分析显示，M2BP 是AIS 的独立危险因素（OR=7.039，P＜0.05），表明高水平的M2BP 可以预测AIS 的发生。近年来发现M2BP 与冠状动脉管腔狭窄有关，M2BP 可以提示术后患者易发生血管管腔狭窄[17]。本研究结果显示，随着颈动脉狭窄程度升高、脑卒中病情程度加重，血清M2BP 的含量越高（P＜0.05），同时血清M2BP 含量与NIHSS 评分呈正相关，表明M2BP 一定程度上可以反映颈动脉狭窄程度及AIS病情程度。

M2BP 除参与炎症反应外，还可能影响脂质代谢。有研究发现，M2BP 与HDL 呈负相关，与LDL 呈正相关，可能与γ 干扰素刺激有关[18，19]。但是M2BP与sdLDL、Hcy 的表达相关性尚未明确。本研究发现，M2BP 与Hcy、sdLDL 均呈正相关，提示M2BP 可能通过影响脂质代谢参与AIS 发生，但具体机制还需进一步研究。由于检测方法的差异，目前临床上sdLDL、M2BP 仍缺乏合适的参考区间[20]。基于临床常用的AIS 脂质生物标记物Hcy[21]，本研究结果显示，sdLDL、M2BP 对AIS 的诊断效能优于Hcy，相比于单一指标，三项指标联合检测能够提高对AIS 的诊断效能，sdLDL＞0.595mmol/L、M2BP＞9.215ng/ml 可能预测AIS 的发生。

综上所述，sdLDL、M2BP 与AIS 发生有关，且与颈动脉狭窄程度及脑卒中严重程度有关，对于诊断AIS 较Hcy 有更高的诊断效能。检测AIS 患者血清中sdLDL、M2BP 含量有助于判断是否发生颈动脉狭窄及脑卒中严重程度，sdLDL、M2BP 或可作为AIS 的辅助诊断指标。