基于月季蜡叶标本颜色量化研究的方法探讨

王丽 吴闯 李翔 黄萍 何丹丹

（南京中医药大学附属中西医结合医院药学部；江苏省中医药研究院药学部 南京 210028）

中药蜡叶标本需有根、茎、叶、花、果实和种子等器官以便于鉴定。压制过程中受温度、湿度、压力等外界环境因素影响，叶绿素易发生氧化降解而变色和退绿，花色素含量减少，使得植物特征难以辨别，在教学、科研、中医药文化宣传研究中带来困难[1]。目前，对中药蜡叶标本颜色的评价主要通过目测法鉴定，这种方法操作简单，但主观因素影响过大，且相关的研究鲜有报道。

本研究对象月季为蔷薇科植物月季（Rosa chinensisJacq.）全株，属于直立株型、重瓣、花径3～5 cm的红色系月季[2-3]。采用目测评价法、色差仪检测法、紫外分光光度法测定色素含量，对月季蜡叶标本颜色进行量化分析比对，以提高精确度和准确率，验证传统目测评价法判断蜡叶标本颜色的可行性、准确性。

1 材料和方法

1.1 材料

JZ-350色彩色差计（深圳市金准仪器设备有限公司）；HE53水分检测仪（梅特勒-托利多仪器（上海）分公司）；Cary 60 紫外可见分光光度计（美国安捷伦公司）；AL204电子天平、FE28ph计（梅特勒-托利多仪器有限公司）；HH-4数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）。试剂均为市售化学品。

1.2 方法

1.2.1 目测评价法

外观评价专家小组由具有副主任中药师资格的5人组成。以植物园中新鲜相同种属红月季作为参照，观察、对比10株干燥月季花、叶的颜色变化、完整度、是否有斑点三个方面，用5、3、1评分法评分：5分表示优，标本接近于鲜品；3分表示中等，标本较鲜品轻微变化；1分表示差，标本较鲜品变化较大[4]。将5位专家评分均值作为评分值。

1.2.2 色差仪检测法

取月季药用植株中部附近叶片、花瓣各10片，叶片和花瓣无损伤，测量部位为叶正面中间叶肉部分和花瓣中心颜色均匀的位置。测定前对仪器进行零位和白板较准，较准完毕后进入测试。选择光源条件D65/10°，色彩空间选择数据L*a*b*值。需要测定的指标如下：L代表颜色的明度，即颜色的亮度，L=0时指示为黑色，∆L+表示偏白，∆L-表示偏黑。a代表红绿色轴，∆a+表示偏红，∆a-表示偏绿。b代表黄蓝色轴，∆b+表示偏黄，∆b-表示偏蓝。选取每株月季中部形态完整、色泽均匀的10片叶，做好标记。用色差计在叶片中心重复测量3次，取平均值，记录L、a、b值。

1.2.3 紫外分光光度法

参照先前月季叶绿素[5-6]、月季花红色素[7]的制备工艺条件制备待测样品，分别采用紫外分光光度法扫描其在200～800 nm波长范围内的紫外-可见吸收图谱，通过月季叶样品在663.6 nm和646.6 nm波长处的吸光度值，计算样品中叶绿素含量；通过测定月季花样品在525 nm波长处的吸光度值，比较样品中红色素的变化趋势。

2 结果

2.1 目测评价

按照5、3、1打分法，5名专家对月季标本鲜品及用传统方法压制的标本进行打分，通过表1得出，月季叶、花鲜品评价得分均值均高于干品。

表1 月季（叶、花）目测法评价得分

2.2 色差仪检测

月季蜡叶标本在制作过程中，极易发生褪色和变色，影响着标本的品质。新鲜的月季叶和花L值最大，a值最小，b值最大，色泽较为鲜亮。干品月季叶和花L值变小，说明干品色泽变暗；干品月季叶a值变大，说明绿色损失严重，干品月季花a值变小，说明干品花偏红；干品月季叶和花的b值均变小，说明干品月季颜色没有变黄（表2）。

表2 月季蜡叶标本颜色值测定（±s，n=10）

表2 月季蜡叶标本颜色值测定（±s，n=10）

月季部位△L △a △b叶 40.61±0.83 9.61±0.37 22.18±1.00 40.47±0.71 2.57±0.52 19.96±0.92 0.14±0.54 7.04±0.70 2.22±1.05花 58.82±2.76 38.41±3.50 77.01±7.17 49.05±2.85 13.61±1.14 42.03±2.86 9.77±2.08 24.80±2.67 34.97±7.28鲜品 干品 差值L a b Lab

2.3 紫外分光光度检测

计算得出月季叶鲜品叶绿素含量均值为（31.46±1.92） mg/g，干品含量均值为（9.82±0.55）mg/g，干品叶绿素含量较鲜品显著降低。紫外分光光度法扫描显示，月季花鲜品红色素在525 nm波长处的吸光度均值为0.65±0.07，干品红色素的吸光度均值为0.24±0.06。月季花干品红色素吸光度值较鲜品显著减弱（图1）。

3 讨论

颜色是中药蜡叶标本最直观的外观质量评价因素[8]。目测法观察月季叶的颜色亮度变暗，由墨绿色变为浅绿色；色差法测得干品月季叶和花均变暗，月季叶绿色损失严重，月季花偏红；紫外分光光度法测得干品的叶绿素含量小于鲜品、红色素吸光度值较鲜品显著减弱。三种方法测得的结果一致，目测法主观因素影响大，误差大；色差法操作简便，数据客观精确，但需要重复测量来减少误差；紫外分光光度法扫描叶绿素、红色素吸光度，操作复杂，提取耗时长，但实验结果精确，误差小。

叶绿素含量高低是评价叶片衰老的标志，月季叶的绿色来源于叶绿素，叶绿素是非常不稳定的非亲水性色素物质，标本鲜品的颜色常因产地、种属、种植养护等因素变化而变化，标本制作过程中由于温度、湿度、压力、光线等外界因素引起组织细胞中叶绿素结构被破坏。红月季花的颜色鲜艳，花色素极易受温度、压力、光照的影响而变色，花瓣质地轻薄，标本换纸的时候，容易损伤花瓣。本研究中，在外观判定颜色的基础上对月季叶、花的颜色进行科学量化分析，颜色值的量化分析与视觉颜色判定结果相吻合，说明月季的颜色值能较好地反映外观判定结果。

蜡叶标本颜色的保持是蜡叶标本制作、储存中一个亟待解决的问题，本研究探讨不同方法量化研究蜡叶标本颜色，为蜡叶标本保色研究提供有利的测定方法。