血清中 IGFBP-6、HIF-1α 及 VEGF 水平与不同活动度类风湿性关节炎相关性分析

类风湿性关节炎 ( rheumatoid arthritis，RA ) 是以侵蚀性和对称性多关节炎为主要临床表现的一种慢性、全身性及系统性自身免疫性疾病，其病因和发病机制至今尚未阐明，有研究发现，RA 发生与关节缺氧微环境有密切关系

。胰岛素样生长因子结合蛋白-6 ( insulin-like growth factor binding protein-6，IGFBP-6 ) 是胰岛素样生长因子 ( insulin-like growth factors，IGFs ) 家族的重要成员之一，可与胰岛素样生长因子-2 ( insulin-like growth factor-2，IGF-2 ) 特异性结合而抑制 IGF-2 活性，同时也可抑制血管内皮生长因子 ( vascular endothelial growth factor，VEGF )功能，从而抑制血管新生

。而缺氧诱导因子-1α( hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α ) 是调节细胞对缺氧反应的核转录因子，在促进滑膜炎症、血管新生及血管翳形成、软骨破坏及骨侵蚀方面均发挥着重要的作用

。同时 VEGF 是促进血管形成的一种最重要的细胞因子，可直接促进血管内皮细胞增殖，与 RA 血管翳形成密切相关

。为此，本研究对RA 患者和非 RA 健康人群血清中 IGFBP-6、HIF-1α及 VEGF 水平进行对比分析，并探讨其与不同活动度 RA 相关性，现报道如下。

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材料与方法

一、纳入标准与排除标准

1.纳入标准：( 1 ) RA 组 2019 年 7 月至 2021 年3 月，在深圳市龙华区中心医院和人民医院确诊的RA 患者；( 2 ) 符合 RA 诊断标准

者；( 3 ) 首次确诊者；( 4 ) 无抗风湿药使用史者；( 5 ) 患者及家属知情同意，并签署知情同意书者。

2.排除标准：( 1 ) 患有其它自身免疫性疾病者；( 2 ) 复诊者；( 3 ) 伴有肿瘤、糖尿病及血液等疾病者；( 4 ) 有严重器官实质性病变者；( 5 ) 需非常规治疗者；( 6 ) 怀孕及哺乳者。

二、研究对象

本研究经医院伦理委员会审核批准。

随着 RA 患者活动度加重 IGFBP-6 水平不断下降，而 HIF-1α 和 VEGF 水平不断升高，不同活动度差异有统计学意义 (

＜ 0.05 ) ( 表3 )。

AE-275 全自动酶联免疫分析仪 ( 深圳爱康生物公司，AE-275 )。

三、仪器与试剂

本研究 RA 组纳入 87 例，其中男 59 例，年龄 32～65 岁，平均 ( 41.57±10.24 ) 岁；女 28 例，年龄 31～67 岁，平均 ( 40.29±11.06 ) 岁。对照组纳入同期非 RA 患者 120 例，其中男 81 例，年龄30～68 岁，平均 ( 42.01±12.52 ) 岁；女 39 例，年龄 32～65 岁，平均 ( 41.85±10.97 ) 岁，体查均无自身免疫性疾病、肿瘤、肝肾功能不全、代谢综合征、骨与关节相关性疾病。两组的年龄、性别等一般资料差异无统计学意义 (

＞ 0.05 )，具有可比性。RA 组患者根据 RA 疾病活动度评分标准 ( DSA280 )分为轻度活动组 ( DSA28 ＜ 3.2 ) 31 例、中度活动组( 3.2 ＜ DSA28 ＜ 5.1 ) 37 例、重度活动组 ( DSA28 ＞5.1 ) 19 例。

四、试验方法

“简单来说，就是一个前体mRNA分子可以经过不同的加工方式，形成不同的成熟mRNA产物。”该论文第一作者、中国农业大学玉米改良中心陈秋月博士解释，这就像用剪刀去剪绳子，再把剪下来的绳段重新打结一样，剪哪里、剪几刀、留下哪些绳段、以什么顺序打结，这些都会产生不同的新绳。

1.标本采集：抽取清晨空腹静脉血 3～5 ml 于干燥无抗凝剂管内，室温放置 30 min 后离心分离血清，及时检测，不能及时完成检测的于 -20 ℃ 冰箱内保存。

2.IGFBP-6、HIF-1α 及 VEGF 水平： 采用酶联免疫吸附法 ( enzyme linked immunosorbent assay，ELSIA ) 分别检测血清中 IGFBP-6、HIF-1α 及 VEGF水平，操作按仪器和试剂说明书进行。

五、统计学处理

RA 组 IGFBP-6 水平明显低于对照组，而 HIF-1α及 VEGF 水平明显高于对照组，差异有统计学意义(

＜ 0.05 ) ( 表1 )。

结 果

一、IGFBP-6、HIF-1α 及 VEGF 水平

在综合验收方面，制定科学有效的验收办法，由区县农发办、财政局联合具有一定资质的第三方机构或土建、水利等社会机构专家，严格按照下达的投资计划进行全面验收。建立健全追责机制，对项目通过验收但因建设内容不达标等问题的，分别追究项目实施主体和验收人员的责任。

二、不同性别 RA 患者的 IGFBP-6、HIF-1α及 VEGF 水平

如表2所示，对PP注塑件VOC八项物质进行检测，主要检出物为甲醛和乙醛，其它物质由于含量较低无法检出(ND)。造成该结果的原因是PP材料在高温下会发生热氧化降解，其主要产物为醛类小分子化合物。从图1中可以看出，随着注塑温度升高，甲醛和乙醛含量增大，当温度高于210℃时，热氧化降解加强，产生的醛类物质开始大量增加。如表2所示，随着注塑温度升高，PP注塑件的气味越来越大，主要为焦糊味，注塑温度超过210℃后，焦糊味越来越浓，逐渐无法接受。所以在PP材料注塑加工过程中，把加工温度控制在在210℃以下，有利于降低PP注塑件的气味、VOC。

三、不同活动度 RA 患者 IGFBP-6、HIF-1α及 VEGF 水平比较

分析乾隆南巡期间排名前十的游览景观，杭州以西湖、孤山和云栖3处景观列在首位，苏州和镇江都以2处景观即寒山和灵岩山、金山和焦山并列第二，江宁、扬州和常州各以1处景观即栖霞山、大明寺、惠山位居第三。此外，苏州的虎丘是乾隆帝赋诗吟诵的重要景观，扬州的天宁寺和高旻寺、杭州的织造府行宫是乾隆帝题联赐匾的重要景观。

不同性别 RA 患者血清中 IGFBP-6、HIF-1α 及VEGF 水平差异均无统计学意义 (

＞ 0.05 ) ( 表2 )。

四、RA 组 GFBP-6、HIF-1α 及 VEGF 水平与DAS28 评分相关性分析

RA 组 IGFBP-6 水平明显降低，而 HIF-1α 及VEGF 水平明显升高。经 Spearman 相关性分析，RA 患者 IGFBP-6 水平与 DAS28 评分呈负相关(

= -0.6172，

= 0.0328 )，而 HIF-1α 和 VEGF 水平与 DAS28 评分呈正相关 (

= 0.7349，0.7802，

=0.0279，0.0236 )。

讨 论

RA 是临床上最常见的一种炎性关节病，其基本病理变化为关节滑膜首先出现慢性炎症及血管翳形成，然后关节软骨和骨遭受破坏，最终导致关节结构变形及功能丧失，严重者可致残，其发病率全球约为 0.5%～1.0%，我国约为 0.33% 左右，给患者生活质量和身心健康造成严重影响

。目前，常用于 RA 诊断的类风湿因子 ( rheumatoid factor，RF )、C-反应蛋白 ( C-reactive protein，CRP ) 及红细胞沉降率 ( erythrocyte sedimentation rate，ESR ) 对 RA 诊断灵敏度高，但特异度低，而抗环瓜氨酸肽 ( cyclic citrullinate peptide，CCP ) 抗体诊断特异度高，但灵敏度低，给 RA 早期诊断和活动度评估造成很大困难

。因此，寻找更适合 RA 早期诊断和活动度评估指标尤为重要。

RA 是一种引起多处小关节慢性炎症的全身性自身免疫性疾病，其发病机制极为复杂，且尚不明确。目前多数认为 RA 主要由免疫细胞和炎症细胞因子共同作用所引起的一种炎症性疾病

。IGFBP-6 是 IGFs 活性的调节因子，人体组织、细胞及体液中广泛存在，与 IGF-2 特异性结合后具有抑制 IGF-2 和 VEGF 生物活性，抑制新血管生成，同时还具有调节细胞生长、增殖、分化及凋亡等功能。此外，还能依赖促分裂原活化的蛋白激酶途径促进细胞迁移。最新研究表明，IGFBP-6 可抑制骨代谢并能促进中性粒细胞生成活性氧类及释放髓过氧化物酶，趋化免疫细胞迁移至关节滑膜，参与 RA发病

。本研究结果显示，RA 患者血清中 IGFBP-6水平明显降低，且与活动度呈负相关 (

＜ 0.05 )。提示 IGFBP-6 在 RA 发病过程中可能发挥负调控作用，其水平降低减弱了其对 IGF-2 和 VEGF 抑制作用，从而促进 RA 发生和发展。

RA 最早病变是血管新生，其为促进炎症细胞浸润、血管翳形成及慢性炎症持续存在的重要因素，并贯穿 RA 病理过程的全程。有研究发现，RA发生与病变部位缺氧微环境有密切关系

。HIF-1α是一种在特异性缺氧状态下发挥生物活性的转录因子，其在缺氧条件下多种类型的细胞内表达水平增加，进一步促进多种靶基因如促红细胞生成素、VEGF 等基因的转录，从而引起血管新生及炎症的发生

。VEGF 是一种促进血管形成最重要的细胞因子之一，同时也是 HIF-1α 调控的一种下游因子，可直接促进血管内皮细胞增殖，与血管翳的形成有直接关系，在滑膜血管新生过程中起关键作用。此外，VEGF 可上调基质金属蛋白酶的水平，从而可引起一系列炎症反应。有研究表明，VEGF 水平与RA 发病有密切关系

。本研究结果显示，RA 患者血清中 HIF-1α 和 VEGF 水平明显升高，且与 RA活动度呈正相关 (

＜ 0.05 )。提示：( 1 ) HIF-1α 和VEGF 在 RA 发病中互相发挥了重要的促进作用；( 2 ) RA 患者可能存在微缺氧状态；( 3 ) HIF-1α 在RA 患者中的作用可能与其在微缺氧状态下表达水平增加，可进一步促进其下游因子 VEGF 基因转录及抑制 IGFBP-6 水平表达，从而促进 RA 发生和发展等有关。

综上所述，RA 患者 IGFBP-6 水平明显降低，而HIF-1α 及 VEGF 水平明显升高，且与活动度有关。因此，加强 IGFBP-6、IF-1α 及 VEGF 水平监测，对RA 及时诊断、病情评估及发病机制的研究具有一定的参考价值，值得临床推广应用。

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