汉麻提取物延缓皮肤衰老作用研究①

韩鑫垚, 王金鑫, 张欣梦, 闫森博, 王 磊, 陈雨欣, 袁 敏

(佳木斯大学药学院,黑龙江 佳木斯 154007)

0 引 言

近年来,人口老龄化形势日渐严峻,皮肤抗衰老化妆品的开发成为研究热点[1-2]。化学制剂作为抗衰老剂不仅危害人体健康,同时也会对环境带来负面影响。天然植物提取物中的活性成分具有良好的抗氧化性,同时具有抗敏性、毒副作用小、温和、适应面广等优点,引起世界各国医药与化妆品行业的关注。目前,已被开发作为抗衰老剂的天然植物有茶多酚、葡萄籽和虾青素等[3-5]。

汉麻,为桑科大麻属一年生的草本植物,在我国具有悠久的栽培历史[6]。汉麻中主要含有大麻二酚(CBD)和四氢大麻酚[7]。四氢大麻酚具有致幻和成瘾性,已被列入第一类精神药品品种目录管制。相反,大麻二酚不具备精神活性,其具有抗氧化、抗炎活性、抗抑郁、抗菌活性等疗效,在医药产业及化妆品领域中具有重要应用[8-9]。

研究不同汉麻提取物的皮肤抗衰老活性,通过测定CBD 晶体、CBD 广 谱 油 和86.69%CBD 油 对透明质酸酶、胶原蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制率,从而分析其在抗衰老过程的作用。

1 实 验

1.1 试剂与仪器

试剂:甲醇(天津大茂化学试剂厂);磷酸二氢钠(天津大茂化学试剂厂);磷酸氢二钠(天津大茂化学试剂厂);弹性蛋白酶(美国Sigma公司);胶原蛋白酶(美国Sigma公司);N-(3-[2-呋喃基]丙烯酰)-亮氨酰-甘氨酰-脯氨酰-丙氨酸(FALGPA,美国Sigma公司);牛血清白蛋白(美国Sigma公司);茶多酚(EGCG,美国Sigma 公司);N-琥珀酰基- 三- 丙氨酸- 对硝基苯胺(SANA,美国Sigma 公司);透明质酸酶(美国Sigma公司);透明质酸(美国Sigma公司);CBD晶体(中升生物科技有限公司);CBD 广谱油(中升生物科技有限公司);86.26%CBD 油;Tris-HCl缓冲盐(上海阿拉丁生物科技有限公司)。

仪器:FC 型酶标仪(赛默飞世尔仪器有限公司);超声清洗仪(上海豫明仪器有限公司);79-1磁力加热搅拌器(山东邺城华鲁电热仪器有限公司);电热鼓风干燥箱(南京仪器厂)。

1.2 汉麻提取物抑制透明质酸酶实验

在96孔板中,依次加入样品溶液与透明质酸酶溶液,磷酸缓冲液,透明质酸钠溶液,震荡混匀,在37 ℃孵育45min,加入酸性白蛋白溶液。用酶标仪测定其在600 nm 处的吸光度。以EGCG 为阳性对照,每个样品重复三次。

1.3 汉麻提取物抑制胶原蛋白酶实验

在96孔板中,依次加入样品溶液与胶原蛋白酶溶液,Tris-HCl缓冲液,震荡混匀,在37 ℃孵育15min,加入FALGPA 溶液。用酶标仪测定其在345 nm 处的吸光度。以EGCG 为阳性对照,每个样品重复三次。

1.4 汉麻提取物抑制弹性蛋白酶实验

在96孔板中,依次加入样品溶液与弹性蛋白酶溶液,Tris-HCl缓冲液,震荡混匀,在37 ℃孵育15min;加入SANA 溶液,在37°C 恒温箱中孵育20min后,用酶标仪测定其在410nm 处的吸光度。以EGCG 为阳性对照,每个样品重复三次。

抑制率按下列公式计算:

式中,A样品:样品溶液、透明质酸钠(FALGPA,SANA)、磷酸缓冲液、透明质酸(胶原蛋白、弹性蛋白)酶混合物的吸光度;A空白:透明质酸钠(FALGPA,SANA)溶液、磷酸缓冲液、透明质酸(胶原蛋白、弹性蛋白)酶混合物的吸光度。

2 结果与讨论

2.1 汉麻提取物对透明质酸酶抑制效果研究

从天然植物中提取出的多酚类化合物,如茶多酚(EGCG),已被证实具有良好的抗氧化效果,能够清除体内自由基,抑制氧化反应的发生,同时具有抗敏性,因而广泛用于化妆品中。选用EGCG作为阳性药物作为对照,评价不同汉麻提取物样品的抗衰老活性。实验结果表明,随着浓度的增大,所有样品对透明质酸酶的抑制率均增大,当浓度为1.5mg/m L时,抑制率基本不再增加。当浓度为1.5 mg/m L 时,茶多酚、CBD 广 谱 油、CBD 晶 体、86.69%CBD 油对透明质酸酶的抑制率分别为89.336%,90.309%,93.513%,94.121%。与EGCG阳性对照相比得知,CBD 广谱油、CBD 晶体、86.69%CBD 样品对透明质酸酶的抑制率大于茶多酚,其中86.69%CBD 油对酶的抑制效果最为明显,说明汉麻提取物可有效抑制透明质酸酶的活性,维持皮肤中透明质酸的水平,从而避免皮肤中水分的流失、促进营养物质与代谢废物交换的过程。

图1 不同汉麻提取物对透明质酸酶的抑制活性

2.2 汉麻提取物对胶原蛋白酶抑制效果研究

随着浓度的增大,所有样品对胶原蛋白酶的抑制率均增大,当浓度为1.5 mg/m L 时,抑制率基本不再增加。当浓度为1.5mg/m L 时,茶多酚、86.69%CBD,CBD 晶体,CBD 广谱油对胶原蛋白酶的抑制率分别为75.255%,83.481%,83.512%,84.311%。与EGCG 阳性对照相比得知,CBD晶体,CBD 广谱油,86.69%CBD 油对胶原蛋白酶的抑制率大于茶多酚,其中CBD 广谱油对酶的抑制效果最为明显,说明汉麻提取物可有效抑制胶原蛋白酶的活性,维持皮肤中胶原蛋白的水平,增强皮肤的弹性和强度,保持皮肤的柔韧性。

2.3 汉麻提取物对弹性蛋白酶抑制效果研究

随着浓度的增大,所有样品对弹性蛋白酶的抑制率均增大,当浓度为1.5mg/m L时,抑制率基本不再增加。当浓度为1.5mg/m L 时,茶多酚,86.69%CBD,CBD 广谱油,CBD 晶体对弹性蛋白酶的抑制率分别为69.231%,90.924%,95.423%,95.433%。与EGCG 阳性对照相比得知,CBD 晶体,CBD 广谱油,86.69%CBD 油对弹性蛋白酶的抑制率大于茶多酚,其中CBD 晶体和CBD 广谱油对酶的抑制效果均十分显著,说明汉麻提取物可有效抑制弹性蛋白酶的活性,维持皮肤中弹性蛋白的水平,使皮肤富有弹性,延缓皮肤衰老过程。

图2 不同汉麻提取物对胶原蛋白酶的抑制活性

图3 不同汉麻提取物对弹性蛋白酶的抑制活性

3 结 论

主要探讨了不同汉麻提取物,即CBD 晶体、CBD 广 谱 油、86.69%CBD 油对 透 明 质 酸 酶、胶 原蛋白酶及弹性蛋白酶的抑制作用。实验结果表明汉麻提取物抗衰老效果显著,能很好地抑制透明质酸酶、胶原蛋白酶和弹性蛋白酶的活性,延缓皮肤衰老过程,未来将在医疗领域和化妆品领域有广阔的应用前景。