2020 年我院手足口病患者病毒核酸分型检测及发病的危险因素分析

郑海珍，邓丽花，吴春芳，林荣华（湛江市第四人民医院检验科，广东 湛江 524008）

手足口病（Hand，foot and mouth disease，HFMD）在低龄儿童中属于一种普遍性传染病，其主要是由于肠道病毒而导致的，该疾病并发发展快速，传染性强，主要临床症状为手足、口腔等出现皮疹［1］。随着病情的扩展，部分患儿会发生呼吸道感染、脑炎以及心肌炎等并发症，甚至致死。HFMD 成人感染后或许不会发病，但依旧具有病毒传染的能力，故儿童为此病的主要发病人群，进一步研究儿童手足口病的危险因素尤为重要［2］。 在手足口病中，肠道病毒有20 余种，其中最为普遍的病毒为柯萨奇病毒A16 型（Cox-A16）与肠道病毒71 型（EV71）［3］。尽管手足口病的发病机制和临床体征相对比较确切，可国内有关该疾病传播危险因素的报道还比较少。基于此，本研究旨在深入分析2020 年我院手足口病患者病毒核酸分型检测及发病的危险因素，从而为临床提供参考依据。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年1 月至2020 年12 月我院收治的手足口病患者120 例作为观察组，另选取同期健康者120 例作为对照组。 对照组中男55 例、女65 例；年龄2～8（4.63±0.71）岁；体重10.22～22.57（16.32±1.34）kg。 观察组中男58 例、女62 例；年龄2～7（4.55±0.75）岁；体重10.84～22.24（16.41±1.27）kg。两组性别、年龄、体重等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。 本研究经我院医学伦理委员会审核批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）依据《手足口病诊疗指南（2015 年版）》诊断标准被诊断为手足口病患儿；（2）年龄≤8 岁者；（3）所有患儿及其家属均自愿签署知情同意书者；（4）无先天性畸形者；（5）对本研究所有药物无过敏症状者。 排除标准：（1）患者病例资料缺少者；（2）家属配合度较差，且不积极参与本活动者；（3）伴有药物过敏史者；（4）伴有合并免疫系统疾病者；（5）伴有遗传病史者。

1.3 方法

1.3.1 采集样本采用病毒采样管对收手足口病患儿的咽拭子样本进行收集，放置在-70℃的温度下进行保存，同时在48 h 内冷藏送至微生物实验室，由友康基业生物科技（北京）有限公司生产采样管［4］。

1.3.2 病毒RNA 的提取应用Ambion 公司的Mag-MAXTM-96Viral RNAI solation kit 配套于ThermoFisher Scientific KingFisherFlex 全自动磁珠提取系统，根据设备操作流程与试剂盒说明书提取病毒RNA［5］。

1.3.3 PCR 扩增主要仪器为美国ABI7500 实时荧光定量PCR 扩增仪，有江苏硕世生物科技有限公司与上海之江生物科技有限公司生产核酸检测试剂盒（PCR 荧光法）其操作严格根据说明书执行［6］。

1.3.4 评估结果严格根据试剂说明书进行评估。

1.4 临床观察指标 （1）核酸检测结果的评估：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测柯萨奇病毒A16 型（CV-116）IgM、血清肠道病毒71 型（EV-A71）IgM，采用实时荧光-定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测粪便或者肛拭子标记物中的肠道病毒通用型（EV）-RNA、CV-A16RNA 以及EV-A71RNA。（2）单因素的分析：分析患者单因素影响情况，其包括常住农村或者市郊、有外出就餐史、有患病1 周内公共场合暴露史、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史、非独生子女、无饭前便后用洗手液洗手的习惯以及散居儿童等。（3）多因素的分析：分析患者多因素影响情况，其包括常住农村或者市郊、有外出就餐史、有患病1周内公共场合暴露史、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史、无饭前便后用洗手液洗手的习惯以及散居儿童。

1.5 统计学处理 采用SPSS 25.0 统计学软件进行处理。 计量资料采用（±s）表示，行t检验；计数资料采用例（百分率）表示，行χ2检验。P＜0.05 示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组病毒检测结果分析 观察患者的阳性检测率显著高于阴性检测率，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表1。

表1 2020 年手足口病患者检测结果的分析［n(%)］

2.2 单因素影响情况分析 通过单因素分析可得，常住农村或者市郊、有外出就餐史、有患病1 周内公共场合暴露史、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史、 无饭前便后用洗手液洗手的习惯以及散居儿童的发病率较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 手足口病患者单因素分析结果（n=120）

2.3 患者多因素影响结果分析 多因素分析显示，常住农村或者市郊、有外出就餐史、有患病1 周内公共场合暴露史、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史、非独生子女以及无饭前便后用洗手液洗手的习惯等是手足口病患者的危险因素（P＜0.05）。 见表3。

表3 手足口病患者多因素分析结果

3 讨论

HFMD 主要是由于诸多肠道病毒所导致，以EV71 与CAV16 最为多见，而且EV71 感染一方面能导致HFMD 发生，另一方面还能诱发无菌性脑膜炎、脊髓灰质炎样麻痹以及脑干脑炎，极其引起神经系统疾病，甚至对生命造成威胁，所有危害性极大［7］。详细了解HFMD 的病原学分型对检测病毒核酸具有重要作用，能有效防控HFMD 的发生，同时还能为检测病毒核酸分型给予科学的参考价值。 就目前而言，HFMD 的病原学检测技术通常包括血清学检测、分子生物学检测以及病毒培养等，而最佳选择便是分子生物学检测。除此之外，患儿发病后会在短时间内拓展感染范围，从而导致中枢系统后遗症，严重威胁患儿的生命安全。 而且手足口病还是一种全球性传播疾病，大多数地区皆有关于此疾病的报道［8］。 到目前为止，临床上仍然无预防手足口病的疫苗和特异性药物，加之我国人口数量多，人口流动性较大以及各地区公共卫生条件较差，因此手足口病发病率极高，故分析手足口病的危险因素意义重大［9］。

Real-time RT-PCR 方法作为一种检测病毒核酸的重要方式，其检测优势主要包括灵敏度高、特异性好，不过在采集、储存以及运输样本过程中，提取DNA 的要求非常高，倘若没有根据要求提取DNA，那么就会降解DNA，同时在检测病毒DNA 过程中，粪便不是最适宜的样本，在检测的时候会出现假阴性。在检测HFMD 是，检测方式和样品类型存在差异，阳性检测率也会存在一定差异，规范采集样本会大大提高阳性检测率，本研究结果显示，患者的阳性检测率显著高于阴性检测率（P＜0.05），提示Real-time RTPCR 检测法能够有效检测出HFMD 患者的阳性率，这是因为RT-PCR 检测效果理想，敏感性好，安全性高，与张万军等［10］研究结果基本一致。

本研究单因素Logistic 回归分析结果显示，常住农村或者市郊、有外出就餐史、有患病1 周内公共场合暴露史、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史、非独生子女以及无饭前便后用洗手液洗手的习惯以及散居儿童的发病率较高（P＜0.05），提示手足口病的发生和常住农村或者市郊、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史、非独生子女以及无饭前便后用洗手液洗手的习惯以及散居儿童，公共场所人流量巨大、外出用餐餐厅卫生差等有着紧密的联系。分析认为由于社会分工的细化，外出就餐和外卖便成为了常见的生活方式，由于工作忙等各种因素，大部分父母常带儿童在外面吃饭和公共娱乐场所等，可儿童抵抗及较低，极其容易导致交叉感染，大大提高了儿童手足口病的发生率。

本研究结果显示，多因素分析显示，常住农村或者市郊、有外出就餐史、有患病1 周内公共场合暴露史、有和他人共用洗漱用品的习惯、有饮用生水史以及无饭前便后用洗手液洗手的习惯等是手足口病患者的危险因素（P＜0.05），提示家长尽可能不要带儿童区公共场所玩，外出就餐等。 如果非要外出就餐，一定要选择卫生环境较好的地方。 分析认为儿童家庭没有培养儿童良好的卫生行为，缺乏卫生防控知识的认知度，并且还与未将儿童送至幼儿园学习相关，居住在农村或者郊区的儿童教育体系并不完善，因此这也导致手足口病发生的原因之一［11］。 因此为了培养儿童的行为习惯，降低手足口病的发生率，首先要健全农村、郊区等地区的教育设施，并且相关部门应增强散居儿童及其家长的教育知识，使宣传工作得以加强。对于幼儿园、小学则可以在校园内张贴洗手流程图，在老师的引导下，养成不饮用生水、饭前便后洗手的良好行为习惯。

综上所述，手足口病患者病毒核酸分型检测过程中，其病原体主要为EV71 型、CoxA16 型，致使患者发病的危险因素各式各样，采用Real-time RT-PCR方法对患者核酸进行检测，从而为临床提供一定的参考依据。受样本量限制，本研究结果有待扩大化的中心试验证实。