旋涡振荡法测定进口大豆粗脂肪含量(干基)的可行性研究*

李增琴 杨富东

(防城港中储粮仓储有限公司 538000)

近几年，我国进口大豆战略储备量大幅增长[1]，储存库点增多，多数储存库点还是第一次储藏保管进口大豆，对其质量指标和检测方法尤为关注。目前国内进口的大豆一般属于高油大豆，根据GB 1352-2009《大豆》规定，高油大豆定等的关键性指标为粗脂肪含量(干基)。因此，粗脂肪含量(干基)是储存库点检验进口大豆质量的重点内容，做到准确、高效测定粗脂肪含量(干基)极为重要。目前大豆粗脂肪含量的测定通常采用现行的国家标准GB 5009.6-2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》[2]第一法索氏抽提法。

1 索氏抽提法测定

现行国家标准GB 5009.6-2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》第一法测定大豆粗脂肪含量(干基)。

1.1 材料与试剂

所选大豆均为进口大豆；快速滤纸；脱脂棉；石油醚,沸程30℃～60℃。

1.2 仪器与设备

索氏抽提器；电热数显恒温水浴锅，型号BHS-4，宁波产；锤片式粮食粉碎机(也称旋风磨)，型号FSJ-ⅡA，成都产；电热恒温鼓风干燥箱，型号DHG-9240A，上海产；分析天平：感量0.0001 g，AL204，上海产；干燥器，内装有效干燥剂；玻璃棒；玻璃研磨钵(具有磨砂玻璃表面)。

1.3 分析步骤

1.3.1 试样处理 去除大杂和小杂的大豆样品约80 g，经旋风磨磨成粉后，称取5 g试样，精确至0.0001 g，全部移入快速滤纸做成的滤纸筒内。

1.3.2 抽提 将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的接收瓶，由抽提器冷凝管上端加入石油醚(沸程30℃～60℃)至瓶内容积的三分之二处，于水浴上加热，使石油醚不断回流抽提(6次/h～8次/h)，一般抽提6 h～8 h。提取结束时，用玻璃棒接取1滴提取液到磨砂玻璃表面，磨砂玻璃表面无油斑，则证明提取结束。

1.3.3 称量 取下接收瓶，回收石油醚，待接收瓶内溶剂剩余1 mL～2 mL时在水浴上蒸干，再于105℃烘箱内干燥1 h，放干燥器内冷却0.5 h后称量。重复以上操作直至质量恒定(两次称量差不超过2 mg)。

1.3.4 分析结果的表述 试样中的粗脂肪含量(干基)按式①计算。

Y干基=10000×m1÷[m×(100-M)]

①

式中:Y干基——试样中粗脂肪含量(干基)(以质量分数计)，g/100g；

m1——粗脂肪质量，g；

m——试样质量，g；

M——试样水分(以质量分数计)，g/100g；

10000——换算系数。

计算结果保留到小数点后一位。

1.3.5 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%，即相对相差不超过10%。

索氏抽提法操作比较简单，且该方法是仲裁方法，具有结果准确、重现性好等优点[3]；但该方法也存在不足，一是耗时过长，仅抽提时间就要(6～10)h[4]；二是对于终点的判断，操作起来比较困难，打开玻璃仪器连接处接取提取液时，仪器内石油醚容易上冲，从而造成脂肪的损失，导致实验结果不准确。经过笔者多次的实验，探索出了一种较为高效，且实验结果准确，重复性好的方法，以下均称旋涡振荡法。实验利用旋涡振荡器能快速高效混合的特性，用沸程30℃～60℃石油醚对大豆脂肪进行多次反复振荡提取，收集多次振荡后静置的上清液，减压过滤，回收溶剂，得到粗脂肪。

2 旋涡振荡法测定

2.1 材料与试剂

所选大豆均为进口大豆；中速滤纸；石油醚,沸程30℃～60℃;

2.2 仪器与设备

旋涡振荡器，型号CY-30S，武汉产；旋转蒸发器，型号RE-52A，上海产；循环水式真空泵，型号SHZ-D(Ⅲ)，巩义产；锤片式粮食粉碎机(也称旋风磨)，型号FSJ-ⅡA，成都产；电热恒温鼓风干燥箱，型号DHG-9240A，上海产；分析天平：感量0.0001 g，型号AL204，上海产；干燥器，内装有效干燥剂；布氏漏斗：直径55 mm和250 mL上嘴抽滤瓶；玻璃棒；玻璃研磨钵(具有磨砂玻璃表面)；离心管(50 mL)。

2.3 分析步骤

2.3.1 试样制备 分取代表性样品约80 g，去除大杂和小杂，再用旋风磨磨成粉备用。

2.3.2 提取 称取约5 g试样，准确至0.0001 g，全部移到离心管中，加25 mL石油醚(30℃～60℃)，旋涡振荡4 min，振荡频率调至最大，约为4000 r/min，静置4 min，将上清液倒出三角烧瓶中，继续往离心管中加入20 mL石油醚(30℃～60℃)，旋涡振荡4 min，静止4 min后将上清液倒入同一个三角烧瓶中，如此反复操作，直到用玻璃棒蘸取一滴上清液到磨砂玻璃表面，磨砂玻璃表面无油斑，证明提取完毕，此振荡过程根据实际情况需要5次左右。

2.3.3 过滤 集并后的滤液用中速滤纸、布氏漏斗和真空泵组成的过滤系统进行减压过滤。操作方法为：真空泵连接上嘴抽滤瓶，拧紧布氏漏斗，打开真空泵，在布氏漏斗中放置中速滤纸，移动滤纸位置，当真空泵指针稳定指示在负压区，有一定的读数，才可开始过滤，上清液倒完后，向三角瓶加入5 mL石油醚(30℃～60℃)清洗，继续倒入布氏漏斗中过滤，清洗三角瓶的操作反复3～5次，确保三角瓶、布氏漏斗和滤纸中的残余油脂全部转移到上嘴抽滤瓶中。过滤完毕后，将上嘴抽滤瓶中的滤液转移到烘至恒重的旋转蒸发仪的蒸馏瓶，转移完后，向上嘴抽滤瓶加入5 mL石油醚(30℃～60℃)清洗，倒入旋转蒸发仪的蒸馏瓶，清洗操作进行3次。

如此过滤具有以下优点：一是需要的滤纸面积小，易于后期清洗；二是减压过滤速度快，1 min 便可过滤出100 mL左右的滤液；三是减压过滤能快速挥发出部分溶剂，有利于减少后期溶剂挥发所需时间。

2.3.4 蒸发去除溶剂 设定旋转蒸发仪的水浴温度为80℃，先常压旋转蒸发回收，待冷凝管中没有明显液滴滴下来，取下回收瓶，倒出石油醚，再装好回收瓶，连接真空泵，在压力(-0.08～-0.1)MPa的负压条件下将溶剂蒸发完。

2.3.5 称量 取下旋转蒸发仪的蒸馏瓶，于105℃烘箱干燥1 h，转移到干燥器内冷却30 min后称量。重复以上操作直至恒重(两次称量的差不超过2 mg)。

2.3.6 分析结果的表述 同索氏抽提法。

2.3.7 精密度 同索氏抽提法。

3 结果与分析

3.1 涡旋振荡法与索氏抽提法对比检测

选取不同大豆样品，分别用漩涡振荡法和索氏抽提法进行粗脂肪含量(干基)的检测，结果见表1。

表1 漩涡振荡法和索氏抽提法测定粗脂肪含量(干基)对照表

从表1可以看出，旋涡振荡法和索氏抽提法测定结果的相对相差在0～1.4%以内，符合GB 5009.6-2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》中精密度要求，表明旋涡振荡法测定结果是准确可靠的[5]，用此法来检测大豆粗脂肪含量(干基)是可行的。

3.2 涡旋振荡法的精密度

用旋涡振荡法检测进口大豆样品，测得的5次实验结果见表2。

表2 旋涡振荡法平行测定结果表

从表2可以看出，按照旋涡振荡法来测大豆粗脂肪含量(干基)，测得5次实验结果的相对标准偏差为0.96%，符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》中对精密度的要求[6]，说明该方法所测得的结果波动相对较稳定，具有良好的重复性。

3.3 两法提取粗脂肪的时间比较

涡旋振荡法与索氏抽提法主要区别在于粗脂肪提取环节，试样处理、前后烘恒质、称量等其他步骤均相同，列出两种方法提取粗脂肪消耗的时间见表3。

表3 两种方法提取粗脂肪消耗的时间 (单位：min)

从表3可看出，使用索氏抽提法需要(360～480)min，而旋涡振荡法提取粗脂肪环节仅需(51～60)min，比索氏抽提法最多可节省300～400 min，检测效率显著提高。

4 结论与展望

本文研究的旋涡振荡法测定进口大豆粗脂肪含量，所测得的粗脂肪含量结果的相对相差符合GB 5009.6-2016精密度要求，实验重复性较好，结果准确可靠。该检测方法在满足检验结果准确性要求下，可大大减少检测用时，提高检测效率[7-8]。

近几年来，国内进口大豆增储量大幅攀升，入库过程时间紧、任务重，此时可考虑采用检测时间短的旋涡振荡法，另目前市面上有很多种类多孔旋涡振荡器，可以满足同时进行多个样品检测的要求，进一步提高检测效率。因此，本文的研究可为测定大豆粗脂肪含量(干基)检测提供可行性的新思路和新方法。