40%邻羟基苯乙酸溶液高效液相色谱分析

李春艳，高 翀，庞怀林

(1.南通泰禾化工股份有限公司，南通 226407；2.上海泰禾化工有限公司，上海 201615)

邻羟基苯乙酸是一种有着广泛用途的精细化工中间体，化学名称为2-(2-羟基苯基)乙酸，分子式为C8H8O3，化学结构见图1。其被广泛用于嘧菌酯、苯并呋喃酮等药物及中间体的合成[1-3]。

图1 邻羟基苯乙酸结构式

嘧菌酯属高效、广谱的甲氧丙烯酸酯类杀菌剂，其几乎对所有的作物真菌病害均有良好的防治效果，主要登记用于防治谷物、水稻、花生、葡萄、马铃薯、果树、蔬菜、咖啡、草坪等植物病害[4-5]。邻羟基苯乙酸是生产嘧菌酯的主要原料，其质量控制对嘧菌酯等药物及中间体的合成有着重要意义，但目前有关其分析方法尚未见公开报道。基于此，本文采用高效液相色谱仪建立了邻羟基苯乙酸的定性定量分析方法，该方法分离效果好，操作简单快速，适用于邻羟基苯乙酸在合成嘧菌酯等药物过程中的质量控制。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪配具可变波长的二级管阵列检测器和岛津配套色谱工作站Labsolution (日本岛津公司)；DTC-27J 型超声波清洗仪(湖北鼎泰生化科技设备制造有限公司)；ME204/02 型电子天平(瑞士梅特勒托利多集团)；有机相滤膜(孔径0.45 µm)(上海安谱实验科技股份有限公司)。

乙腈，色谱纯(上海安谱实验科技股份有限公司)；磷酸，分析纯(国药集团)；蒸馏水(广州屈臣氏)；邻羟基苯乙酸标样，已知质量分数98.0% (南通泰禾化工股份有限公司提供，沈阳化工研究院有限公司定值)；40%邻羟基苯乙酸溶液试样(南通泰禾化工股份有限公司提供)。

1.2 色谱条件

检测器为二极管阵列检测器；色谱柱为岛津Itertsil ODS-3不锈钢色谱柱 (250 mm×4.6 mm i.d.，内装5 µm填充物)；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，经滤膜过滤和脱气，流速为1.0 mL/min；检测波长为270 nm；柱温为(40±2) ℃；进样体积为20 µL。采用梯度洗脱程序，其洗脱条件见表1。在上述色谱操作条件下，邻羟基苯乙酸的保留时间约11.2 min。邻羟基苯乙酸标样和试样的高效液相色谱图如图2所示。

表1 液相色谱梯度洗脱条件

图2 邻羟基苯乙酸标样(上图)和试样(下图)的高效液相色谱图

1.3 溶液配制

1.3.1 标样溶液的配制

称取约0.1 g (精确至0.000 1 g)邻羟基苯乙酸标样置于50 mL 容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比50∶50)溶解定容并摇匀，作为标样储备溶液。准确移取标样储备溶液5 mL 于另一50 mL 容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比50∶50)溶解、定容、摇匀并过滤备用。

1.3.2 试样溶液的制备

称取约0.25 g (精确至0.000 1 g) 40%邻羟基苯乙酸溶液置于50 mL 容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比50∶50)溶解定容并摇匀，作为试样储备溶液。准确移取试样储备溶液5 mL 于另一50 mL容量瓶中，用乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比50∶50)溶解、定容、摇匀并过滤备用。

1.4 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻2 针的峰面积相对变化小于1.0%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5 计算

将测得的2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中邻羟基苯乙酸峰面积分别进行平均。试样中邻羟基苯乙酸的质量分数X(%)按式(1)计算：

式中：为试样中邻羟基苯乙酸的质量分数，以%表示；为试样溶液中邻羟基苯乙酸峰面积的平均值；m1为标样的质量的数值，单位为克(g)；P为标样中邻羟基苯乙酸的质量分数，以%表示；为标样溶液中邻羟基苯乙酸峰面积的平均值；m2为试样的质量的数值，单位为克(g)。

2 结果和分析

2.1 分析方法特异性

本试验采用HPLC-DAD 峰纯度分析法来鉴别邻羟基苯乙酸。邻羟基苯乙酸标样的最小峰纯度相似度为1.000 000，最小峰纯度阈值为0.999 999，最小峰纯度指数为0，说明标样色谱峰中不含有杂质峰；40%邻羟基苯乙酸溶液中的邻羟基苯乙酸HPLC-DAD 峰纯度中最小峰纯度相似度为1.000 000，最小峰纯度阈值为0.999 999，最小峰纯度指数为0，说明样品色谱峰中不含有杂质峰。标样与试样的色谱峰保留时间差在1.0%以内，如图2 所示。标样和试样的峰纯度图如图3 所示。

图3 邻羟基苯乙酸标样(上图)和试样(下图)中目标峰纯度

2.2 分析方法的线性相关性的测定

按照本方法中1.3.1 节标准溶液配制的步骤，称取不同质量的邻羟基苯乙酸标样，配制成6 个不同质量浓度的邻羟基苯乙酸线性相关溶液，按照本方法中所示条件，待仪器基线稳定后，按顺序测定每个邻羟基苯乙酸溶液的峰面积，取2 次测定平均值，以邻羟基苯乙酸质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果见图4。可见，质量浓度为104.4～344.1 μg/mL 时，邻羟基苯乙酸的质量浓度与其响应值之间呈现出良好的线性关系，其线性方程为y=19 527x-2 795.2，相关系数R2=1.000 0，完全可以满足定量分析的要求。

图4 邻羟基苯乙酸峰面积与质量浓度关系图

2.3 分析方法的精密度试验

对同一溶液准确连续称取5 个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得邻羟基苯乙酸的质量分数，试验结果见表2。由表2 可见，邻羟基苯乙酸的变异系数为0.05%，说明该方法精密度良好，能满足日常的定量分析。

表2 40%邻羟基苯乙酸的精密度试验结果

2.4 分析方法的准确度试验

采用加标回收法，准确称取6 个已知含量的同一邻羟基苯乙酸溶液试样，加入不同质量已知含量的邻羟基苯乙酸标样至50 mL 容量瓶中，按照本方法中1.3.2 节进行配制备用。在上述色谱操作条件下分别进行分析，见表3。可见，邻羟基苯乙酸的回收率为99.2%～100.7%，平均回收率为100.1%，说明该方法准确度良好，能满足日常的定量分析。

表3 40%邻羟基苯乙酸溶液的准确度试验结果

3 结 论

本文采用高效液相色谱仪建立了快速测定40%邻羟基苯乙酸溶液中有效成分的定性定量方法。采用ODS-3 不锈钢色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.×5 µm)和二极管阵列检测器在270 nm 波长下，以乙腈和0.1%磷酸水溶液为流动相，采用梯度洗脱方式，测得有效成分的精密度和准确度高、线性关系良好。该方法具有操作简便，检测过程稳定，结果准确，分离效果好等特点，可用于40%邻羟基苯乙酸溶液的检测。