大枣炒炭后主要活性成分含量变化研究*

刘世军，鲁 静

陕西中医药大学/陕西省中药资源产业化协同创新中心/秦药特色资源研究开发国家重点实验室（培育）/陕西省创新药物研究中心，陕西 咸阳712083

大枣为鼠李科枣属植物枣Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果实。秋天果实成熟变红时采收，摊开自然晒干。具有补中益气，养血安神功效，常用于脾虚少食，乏力便溏，妇人脏躁等症［1］。因产地、品种、生长环境、采摘时间不同，大枣中化学成分的含量存在差异。大枣中主要含有三萜类、皂苷类、生物碱类、黄酮类、糖类、维生素类、矿物质元素等［2］。现代药理研究发现大枣具有抗过敏、抗氧化、抗衰老、保肝、镇静及抑制肿瘤等作用；另外，大枣中含有的环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）具有抗心律失常，抑菌保肝、降低血糖和胆固醇等作用。大枣炒炭后起健脾止泻作用，从而抑制其滋腻碍胃不易消化的缺点，又不影响其补气补血功效。炒炭后大枣外部的一层碳化部分具有一定的吸附作用［3］。通过消化道进入人体后可吸附人体内有害物质，起排毒作用，因此炒炭后大枣产生止血，收敛作用。由于大枣炒炭后主要活性成分含量变化文献研究较少，本课题组对大枣炒炭后主要活性成分含量变化进行研究，为阐明大枣炮制原理提供线索。

1 材料

1.1 大枣来源大枣（陕西合阳，新疆和田）。

1.2 试剂浓盐酸（西安三浦化学试剂有限公司）；甲醇、冰醋酸、NaOH、乙酸乙酯、高氯酸、Folin试剂均购自天津市天力化学科技有限公司；九水硝酸铝（成都市科隆化学品有限公司）；香草醛（天津市科密欧化学试剂有限公司）；无水乙醇（安徽安特食品股份有限公司）；对照品芦丁（批号：16122801）与齐墩果酸（批号：16051205）均购自陕西乐博生化科技有限公司；没食子酸（批号：B20851）与莲心碱（批号：B20730）均购自上海源叶生物科技有限公司，所用化学试剂均为分析纯。

1.3 仪器电子分析天平（赛多利斯仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱、MH-500 型调温型电热套、KSW 型电炉温度控制器、箱式电阻炉、DZKW-4 型电子恒温水浴锅均购自北京科伟永兴仪器有限公司；TGL-20B 型高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；高速万能粉碎机（天津鑫博得仪器有限公司）；岛津UV-2600 型紫外可见分光光度仪（日本岛津公司）；KQ-300DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；C21-HT2109 型多功能电磁炉（广东美的生活电器制造有限公司）；WFH-201B 型紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 大枣炒炭将大枣净选，去核，切厚片，置于干净托盘内，摊开，于50℃烘箱内干燥。将干燥后的大枣厚片置炒锅内，用武火加热，炒至表面焦黑色，内部黄褐色，喷淋少许清水，灭尽火星，略炒，取出晾干，筛去碎屑［4］。将大枣生品及炒炭品分别用粉碎机粉碎。生品和炒炭品的水分控制在5%以下。

2.2 供试样品制备准确称取各样品0.5 g，转入50 mL离心管中。分别加80%甲醇溶液5 mL，100 W超声提取30 min，离心半径13.5 cm，4000 r/min离心10 min，收集上清液，残渣用上述方法再提取1次，合并上清液后过滤，滤液定容至10 mL，备用［5］。

2.2.1 总酚标准曲线制备及含量测定精密称量没食子酸对照品1 mg，用蒸馏水溶解且定容至10 mL，得浓度0.1 mg/mL 的对照品溶液，准确量取上述标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL 容量瓶中，用蒸馏水补充至约6 mL，摇匀后加入浓度为50%的Folin酚试剂0.5 mL，摇匀后静置1 min，加入1.5 mL 的20%Na2CO3溶液，混匀定容至10 mL，在水浴锅内75℃恒温反应10 min，取出冷却至室温，在760 nm处测定吸光度［6］。见图1。

图1 总酚标准曲线

精密量取各样品80%甲醇提取液0.1 mL 转入10 mL容量瓶中，用蒸馏水补充至约6 mL，摇匀后加入浓度为50% 的Folin酚试剂0.5 mL，摇匀后静置1 min，加入1.5 mL 的20% Na2CO3溶液，混匀定容至10 mL，在水浴锅内75℃恒温反应10 min，取出冷却至室温，于760 nm波长处测定其吸光度［5］。见表1。

表1 大枣样品中总酚含量比较

表1 中各样品大枣总酚含量表明大枣在炒炭后总酚的含量有所增加，新疆大枣生品及炒炭后总酚的含量均高于陕西大枣生品。

2.2.2 总黄酮（芦丁）标准曲线制备及含量测定取芦丁对照品2 mg，80%甲醇溶解且定容至10 mL的容量瓶中，得0.2 mg/mL的芦丁标准溶液，分别量取芦丁标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置10 mL容量瓶中，再用80%甲醇溶液补充至5.0 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀静置6 min 后再加0.3 mL10% Al（NO3）3溶液，摇匀，静置6 min 后加入4 mL 1 mol/L 的NaOH溶液，混匀后再使用80%甲醇溶液定容至10 mL，再次摇匀，10 min后在510 nm波长处测定吸光度［6］。见图2。

图2 芦丁标准曲线

精密量取80%甲醇提取液2.0 mL（炒炭样品为1.0 mL），再用80%甲醇溶液补充至5.0 mL，加入5% NaNO2的溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min 后再加0.3 mL10%硝酸铝溶液，摇匀，静置6 min 后加入4 mL 1 mol/L的NaOH溶液，混匀后再使用80%甲醇溶液定容至10 mL，再次摇匀，10 min 后在510 nm波长处测定吸光度。见表2。

表2 大枣样品中总黄酮（芦丁）的含量比较

从表2 中各样品大枣总黄酮含量可以看出大枣炒炭后总黄酮的含量增加，新疆大枣生品总黄酮含量低于陕西大枣生品，新疆大枣炒炭后总黄酮含量高于陕西大枣炒炭后。

2.2.3 总三萜（齐墩果酸）标准曲线制备及含量测定精确称取齐墩果酸对照品1.0 mg，置于10 mL容量瓶中，80%甲醇溶解并定容。最后得到浓度为0.1 mg/mL的齐墩果酸对照品溶液，分别依次精密取对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL容量瓶中，水浴挥干80%甲醇溶剂，分别加入0.4 mL5%的香草醛冰醋酸溶液及高氯酸试剂1.6 mL，混匀后放于90℃水浴反应15 min，取出冷却至室温，乙酸乙酯定容，摇匀，560 nm处测吸光度［5］。见图3。

图3 齐墩果酸标准曲线

精密量取各样品80%甲醇提取液0.1 mL 并稀释5 倍置于10 mL 容量瓶中，水浴挥去溶剂后，再分别加入0.4 mL5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸试剂1.6 mL，混匀后置于90℃水浴反应15 min，取出冷却至室温，乙酸乙酯定容，摇匀，在560 nm 波长处测定吸光度［6］。见表3。

表3 大枣样品中总三萜（齐墩果酸）的含量比较

表3中各大枣样品总三萜含量表明大枣炒炭后总三萜的含量增加，新疆大枣生品中的总三萜含量略小于陕西大枣生品。

2.2.4 总生物碱（莲心碱）标准曲线制备及含量测定 精密称量2 mg 莲心碱对照品置于10 mL 容量瓶中，无水乙醇溶解并定容10 mL，得0.2 mg/mL莲心碱对照品溶液。分别量取0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4 mL对照品溶液置于10 mL容量瓶中，无水乙醇定容，282 nm处测定吸光度［7］。见图4。

图4 莲心碱标准曲线

配制1%盐酸250 mL，1%氢氧化钠300 mL 备用；分别称取各样品0.5 g 于离心管中，每个离心管中分别加入10 mL1%盐酸，调节pH=2，浸泡2 h，使生物碱形成生物碱盐溶于酸水中。碱化：每个离心管中分别加入1%氢氧化钠，调节pH为9～10，游离生物碱；有机溶剂萃取：分别加入无水乙醇15 mL，封盖，超声处理40 min，取出离心管，过滤样品溶液，将过滤的溶液用无水乙醇定容到50 mL 容量瓶中备用［7］。

将上述制备的提取液适当稀释后于282 nm波长处测定吸光度。见表4。

表4 大枣样品中总生物碱（莲心碱）的含量比较

从表4可以看出大枣炒炭后总生物碱含量增加，新疆大枣生品中总生物碱含量小于陕西大枣生品。

3 结论

新疆大枣生品的总酚大于陕西大枣生品，但是总黄酮、总三萜、总生物碱等小于陕西大枣生品。这可能与大枣产地、光照、降水量多少有关。大枣炒炭后可以起到治疗内痔出血［3］及健脾止泻作用，从而抑制其滋腻碍胃不易消化的缺点，同时又不影响其补气补血功效。大枣炒炭炮制后主要活性成分含量的变化研究可为大枣炒炭炮制品在临床的应用提供依据。