老年宫颈癌合并糖尿病患者细胞凋亡相关因子Fas和Bcl-2的表达及临床意义

苏峙宇 刘立红 刘畅 陈方旭 艾浩 (锦州医科大学附属第三医院,辽宁 锦州 121001)

宫颈癌是女性常见的一种恶性肿瘤，研究显示，宫颈癌的发病率近年来也呈现上升趋势〔1～3〕。糖尿病也是临床上老年人发病较多的慢性疾病，患者需要时刻并长期控制血糖水平。宫颈癌合并糖尿病患者在进行治疗时更需要时刻注意相关因子及指标是否达标，否则会对患者的生命安全、治疗后生活质量产生严重影响〔4～7〕。Fas是一种跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，与FasL组成的信号通路在细胞凋亡中起重要作用〔8，9〕。Bcl-2是一种膜整合蛋白，可以阻止细胞色素c从线粒体释放到细胞质从而可以抑制细胞凋亡〔10〕。本研究旨在探讨老年宫颈癌合并糖尿病患者细胞凋亡因子Fas、Bcl-2的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年6月至2021年6月锦州医科大学附属第三医院收治的200例老年宫颈癌合并糖尿病患者为研究组，年龄60～87岁，平均(69.83±7.07)岁，平均体重(68.25±11.96)kg。纳入标准：(1)自愿参加本次研究；(2)发现肿瘤前存在明确的糖尿病史，且由宫颈刮片细胞学检查、阴道镜检查等确诊为宫颈癌的患者；(3)血常规其他指数正常；(4)患者临床资料齐全，具有正常的阅读及沟通能力，能够与医护人员正常理解及沟通。排除标准：(1)存在重要脏器功能不全者；(2)存在自身免疫性疾病及其他部位恶性肿瘤者；(3)有精神疾病，无法进行正常沟通交流者；(4)发现宫颈癌后在治疗过程中并发糖尿病者。选取同期在我院收治的186例老年宫颈癌患者(宫颈癌组)及进行健康体检的201例女性健康人群(对照组)，平均年龄(70.52±7.03)岁，平均体重(66.08±13.16)kg。本研究中全部宫颈癌患者按照国际妇产科联盟(FIGO)病理分期标准，其中宫颈癌组Ⅰ期40例，Ⅱ期65例，Ⅲ期68例，Ⅳ期13例，平均年龄(69.04±6.72)岁，平均体重(68.97±15.17)kg；研究组Ⅰ期37例，Ⅱ期73例，Ⅲ期81例，Ⅳ期9例；3组年龄、体重无统计学差异(P>0.05)。

1.2Fas、Bcl-2阳性水平检测 免疫组织化学SP法，取各组宫颈组织，制成石蜡切片，切片于60℃干燥箱中烘干过夜，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精入水，使用0.01 mol/L柠檬酸钠缓冲液微波加热进行切片的抗原修复，使用10%羊血清室温孵育30 min，分别加入Fas及Bcl-2的抗体，4℃孵育过夜，隔日用1倍TBS洗涤3次，每次5 min，随后加入对应二抗于37℃孵育1 h，随后用1倍TBS洗涤3次，每次5 min，加入现配的二氨基联苯胺(DAB)溶液，苏木素复染1 min，用中性树胶封片。本研究中以乳腺癌组织作为Fas、Bcl-2阳性对照，以正常宫颈组织作为阴性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)为空白对照。结果判定标准：免疫组化染色以细胞质或细胞核染成黄色或棕褐色为阳性；判断标准：每张切片选择5个高倍视野(放大400倍)进行观察，对染色深浅评分，无色或蓝色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。计数每张切片中的阳性细胞数，每次计数200个，共计数3次，取平均值，按照颜色计算分值，阳性细胞比例≤5%为0分，6%～20%为1分，21%～50%为2分，≥51%为3分。按照阳性细胞分值与染色分值的乘积进行分类，0分为阴性(-)，否则为阳性。

1.3流式细胞技术测定细胞凋亡指数(AI) 取宫颈组织，置于盛有PBS的小烧杯内，使用眼科剪及眼科镊将其反复剪碎及撕扯后过滤(160目尼龙网筛)制成单细胞悬液，通过细胞计数板调整细胞浓度为1×109cells/L。取1 ml单细胞悬液，离心后去上清，加入1 ml PBS重悬细胞，并重复离心去上清，使用70%乙醇4℃固定细胞1～2 h，随后800 r/min，离心5 min，弃上清后使用PBS漂洗1次，离心去上清，加入50 μg/ml碘化丙啶(PI)1 ml，4℃避光染色30 min，用流式细胞仪检测，计算AI。

1.4统计学方法 使用SPSS22.0统计学软件进行t检验、χ2检验及方差分析。

2 结 果

2.1各组细胞凋亡因子Fas和 Bcl-2阳性表达水平比较 研究组、宫颈癌组中四期患者Fas、Bcl-2阳性率与对照组有显著差异(P<0.001)。研究组整体Fas、Bcl-2阳性率与对照组阳性率差异显著(χ2=136.643、132.717，均P<0.001)，与宫颈癌组有显著差异(χ2=3.940、3.963，均P<0.05)，见表1。

2.2各组AI比较 3组AI有统计学差异(F=601.987，P<0.05)，其中宫颈癌组(6.15±3.05)显著高于对照组(2.09±0.88；t=18.078，P<0.001)，但明显低于研究组(9.56±2.06；t=12.951，P<0.001)。

表1 各组Fas、Bcl-2阳性率比较〔n(%)〕

3 讨 论

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，是女性癌症死亡的主要原因之一，临床表现为接触性出血、阴道异常出血及阴道排液增多等症状。宫颈癌的发病高峰期一般在60周岁以上，老年妇女的性生活停止或减少，出现接触性出血较少，即早期症状并不明显，而确诊时一般已处于中晚期〔1～3〕。宫颈癌治疗常用的方法包括但不限于手术、放疗、化疗等综合应用。但由于老年患者年龄偏大、机体抵抗力差、合并疾病多、手术范围大等一系列原因使得手术风险增大〔2〕。糖尿病是一种多病因的代谢类疾病，其特征是高血糖。老年患者一般是2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病，患者仍然分泌一定量的胰岛素，但其降低血糖的能力降低，机体对葡萄糖的利用能力随着年龄也呈下降趋势。糖尿病患者需要通过控制脂肪、糖等成分的摄入来稳定血糖水平，但合并宫颈癌患者，考虑其是一种消耗性疾病，不能对脂肪、糖进行过度限制〔4,5,7〕，因此对老年宫颈癌合并糖尿病患者血清的相关指标进行测定，有利于临床上掌握对该类患者治疗及护理条件〔5,6〕。

细胞凋亡又称细胞程序性死亡，是一种与有丝分裂相反的方式调节细胞群体稳定的重要方式。细胞凋亡对肿瘤的发生、抗癌药物的治疗及细胞间信息传递同样有重要作用。有研究表明当宫颈上皮细胞发生不典型增生时，也会伴随细胞凋亡的增加，而宫颈癌患者AI减少，表明宫颈癌的发生发展与细胞凋亡之间有密切相关性〔14～17〕。随着疾病的进展及细胞内相关基因表达的变化，细胞凋亡受到抑制，导致宫颈上皮细胞平衡被破坏，从而引发癌变。Fas与Bcl-2均在细胞凋亡及宫颈组织发生癌变的过程中发挥了重要作用〔9～13〕。

有研究表明糖尿病患者更容易并发癌症〔18,19〕，本研究结果表明Fas、Bcl-2不仅参与老年宫颈癌发生发展过程，同时对宫颈癌组织细胞凋亡发挥一定影响作用，而Fas、Bcl-2在合并糖尿病的老年宫颈癌患者组织的细胞凋亡中参与度更高，但其具体机制还需要深入研究。