细菌培养与涂片镜检在微生物检验中的临床价值分析

韩晓云

（大连市友谊医院，辽宁 大连 116011）

随着现代医学技术的迅猛发展，诊断、检测技术不断更新，但微生物测试的细菌培养研究中，尽管已有可以自动细菌培养的仪器，但培养仍需要较长时间，并且操作不当可能影响细菌培养的结果，不能让患者得到快速且准确地报告[1-2]。细菌培养耗时长以及结果的准确性低仍是微生物检测中的两个主要问题[3]。然而，在细菌培养之前注意直接涂片和染色显微镜检查，提供快速诊断信息，评价标本质量，对加强质量控制具有重要意义，并指导药物的使用和重获某些重症患者的生命，有效地提高细菌培养的速度和准确性[4-5]。现对细菌培养与涂片镜检进行研究比较，对比两种方法的准确性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以我院住院部和门诊部送检的300例样品为研究标本，分别进行细菌培养和涂片镜检，对比两种诊断方法的涂片镜检合格率与细菌培养的检出率。

1.2 方法 涂片镜检，即将标本进行直接涂片和离心沉淀后涂片，随后分别进行革兰染色和抗酸染色，镜下观察，若发现存在涂片阳性则报告其形态，若未找到细菌或无法辨认则报告涂片阴性。

细菌培养，根据涂片结果为标本选择不同的培养基，孵育18～24 h观察结果，48 h无细菌生长则报告无菌生长。

1.3 观察指标 标本直接涂片镜检标准分为三级：A级：低倍显微镜的白细胞不低于25，鳞状上皮细胞不超过10；B级：低放大倍数的白细胞不低于25，鳞状上皮细胞数在10～25，并且细菌不少于3种；C级：鳞状上皮细胞不小于25，是不合格的标本。A、B级适合细菌培养，C级不适合细菌培养。

细菌培养后，直接涂抹革兰染色镜检，观察到针对主要病原体和致病细菌或显性生长细菌的菌落特征。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件进行数据处理及统计学分析，计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 标本直接涂片镜检的合格率 根据标本涂片镜检的三级标准，得到研究结果如下：在300例标本中，涂片镜检合格的标本259例，合格率为86.33%，其中A类标本132例，占总数的44.00%，B类标本127例，占总数42.33%，涂片镜检不合格标本C类41例，占总数的13.67%。

2.2 标本涂片镜检ABC三类与细菌的检出率的关系 300例标本中有205例标本检出致病菌或优势生长菌，阳性检出率为68.33%，涂片镜检合格标本有259例，涂片镜检合格的标本检出细菌数为192例，检出率为74.13%，其中A级检出细菌数107例，检出率为55.72%；B级检出细菌数85例，检出率为44.27%。涂片不合格标本有41例，检出细菌13例，检出率为31.70%（13/41）。A级细菌检出率明显高于B级、C级，结果具有统计学意义（A与B相比较，χ2=6.740，P=0.007；A与C相比较，χ2=35.857，P＜0.001）；B级细菌检出率明显高于C级，结果具有统计学意义（χ2=15.820，P＜0.001）。

2.3 合格标本涂片镜检结果与细菌培养的符合率 259例合格标本共检出致病菌214例，涂片镜检合格标本涂片与细菌培养结果总符合率为82.62%。在214株阳性标本中检出革兰阴性菌135例，检出率为63.08%；革兰阳性菌43例，检出率为20.09%，检出的革兰阴性菌主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及流感嗜血杆菌；革兰阳性菌主要为金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎链球菌；真菌36例，检出率为16.82%，包括白色念珠菌及热带念珠菌。涂片阴性而培养出致病菌11例，检出率为26.82%；链球菌属3例，检出率为27.27%；肠杆菌属细菌4例，检出率为36.36%；白念珠菌3例，检出率为27.27%；非发酵菌1例，检出率为9.09%。涂片检出细菌而细菌培养未培养出致病菌的45例，占比为17.38%，详细结果见表1。

表1 合格标本涂片镜检结果与细菌培养的符合情况

3 讨论

涂片镜检和细菌培养是细菌学检测的基本方法[6]。涂片显微镜操作简单，细菌达到一定数量时，可以快速检测样本[7]。具有初步诊断但是源自正常菌群的位点的标本具有有限的临床意义。细菌培养是最可靠的细菌学检测方法，但细菌培养技术需要很长时间，培养过程容易产生污染，影响结果，实际工作中很难满足临床需求[8-9]。例如，脑脊液涂片，取脑脊液涂片镜检发现致病菌，其最初可以诊断为由脑膜炎奈瑟球菌引起的脑膜炎[10]。直接涂抹深层穿刺液以检测革兰阳性球菌，阴性杆菌，并在第一时间向诊所提供此信息。最初在临床中使用抗生素是有帮助的。实验室需要进行细菌培养的分级报告（涂片后，药物敏感后和鉴定后的顺序报告），并强调直接涂片的重要性[11]。同时，细菌培养清楚地表明革兰染色是细菌鉴定的前提。同时涂片观察还可以纠正仪器报告的错误，例如细菌和酵母样细菌，这些细菌很容易与形态学区分开来，并且可以完全避免误报。耐酸染色鉴定出抗酸杆菌，改良金色游泳染色是诺卡氏菌和红球菌的鉴定试验之一，因此可以看出涂片染色的重要性[12-13]。涂片显微镜和细菌培养很重要。例如，涂片可以快速检测到标本中的一定数量的死细菌和活菌，这不仅对非污染标本具有重要意义。此外，评估样本质量和细菌分布在同样十分重要[14]。细菌培养是黄金标准，阳性率也很高。临床重点是细菌培养，因此实验室工作人员应主动加强涂片的显微镜检查。涂片显微镜对细菌培养结果具有重要的互补作用。另外，由于病原体的多样性，生长特征是复杂的。特别是用于检测一些生长缓慢的菌落，非常小或混合的细菌感染病原体[15]。

但二者同时进行诊断时，仍存在一定概率的误差。细菌培养前涂片观察到存在某细菌，但培养后其结果与培养前不一致，应及时从如下几方面查找原因：①标本采集、运送等技术操作过程中存在不正确操作，细菌未能及时接种培养，造成细菌细胞死亡，产生假阴性结果，或外来细菌混入，产生假阳性结果[16-17]。②标本来自于已经接受抗菌药物治疗的患者，标本中存在残余的抗生素抑制了细菌的生长，产生了假阴性结果。③不合适的培养基所提供的培养条件，如培养基成分比例、pH值、培养温度、气体环境等不能达到要求等，不利于细菌的繁殖，甚至使细菌发生形态、染色性质的变异。④实验室内消毒不彻底，紫外灯照射时间过短，或操作不当，用过的培养物和培养基不及时处理，操作者无菌操作观念淡薄，可造成实验室内污染，使用培养结果与涂片结果不一致[18-19]。

文献研究表明，涂片阳性和阴性细菌培养物中的一株G+杆菌培养48 h。在长时间培养至72 h后，G－细菌快速生长并且细胞量很大。抑制了G+球菌的生长。在不同培养基上生长或检测相同属是导致错过诊断培养的因素之一[20]。本研究结果显示，本研究结果表明，300例标本中，涂片镜检合格的标本259例，合格率为86.33%，其中A类标本132例，占总数的44.00%，B类标本127例，占总数42.33%，涂片镜检不合格标本C类41例，占总数的13.67%。300例标本中有205例标本检出致病菌或优势生长菌，阳性检出率为68.33%，涂片镜检合格标本有259例，涂片镜检合格的标本检出细菌数为192例，检出率为74.13%，涂片不合格标本有41例，检出细菌13例，检出率为31.70%（13/41）。259例合格标本共检出致病菌214例，涂片镜检合格标本涂片与细菌培养结果总符合率为82.62%。在214株阳性标本中检出革兰阴性菌135例，检出率为63.08%；革兰阳性菌43例，检出率为20.09%，检出的革兰阴性菌主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及流感嗜血杆菌；革兰阳性菌主要为金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎链球菌；真菌36例，检出率为16.82%，包括白色念珠菌及热带念珠菌。涂片阴性而培养出致病菌11例，检出率为26.82%；链球菌属3例，检出率为27.27%；肠杆菌属细菌4例，检出率为36.36%；白念珠菌3例，检出率为27.27%；非发酵菌1例，检出率为9.09%。涂片检出细菌而细菌培养未培养出致病菌的45例，占比为17.38%。

总之，涂片镜检可以提前做出预测报告，作为诊断的初步依据，指导临床合理用药，两种诊断方法相互补充，可使临床细菌学检验缩短报告时间，增加可靠性，为临床正确分析细菌学检验结果提供参考。