大疱性类天疱疮患者白细胞介素-31、白细胞介素-16的表达水平及其与瘙痒的关系

张亚利，李小红，张曼曼

（郑州大学第一附属医院 皮肤科，河南 郑州 450052）

大疱性类天疱疮（bullous pemphigoid，BP）是一种自身免疫性大疱性皮肤病，好发于老年人，临床表现为红斑、厚壁水疱和大疱，BP患者常伴有不同程度的瘙痒，中重度瘙痒严重影响患者的生活质量。目前关于白细胞介素-31（interleukin-31，IL-31）和白细胞介素-16（interleukin-16，IL-16）与BP发生瘙痒的机制的研究较少。研究发现IL-31参与瘙痒性疾病的发生过程，如异位性皮炎、慢性自发性荨麻疹和结节性痒疹。Hashimoto等［1］研究显示，24例BP患者的血清IL-31表达上升，但未进行IL-31与BP患者瘙痒严重程度之间的相关性分析。也有研究发现，与健康对照组相比，BP患者血清IL-31水平未升高，但该研究未评估对照组的瘙痒评分［2］。Frezzolini等［3］研究显示，BP患者血清和疱液IL-16增加，BP皮损处表皮和真皮浅中层T细胞表达IL-16。Delli等［4］研究显示，BP患者IL-16水平在免疫球蛋白E水平升高组和正常组无差异，但未与其他疾病或正常人群进行对比。本研究对BP患者血清和疱液中的IL-31和IL-16水平及其与患者瘙痒程度的相关性进行分析，探讨这两者在BP瘙痒发生和持续中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年10月至2021年5月于郑州大学第一附属医院皮肤科首次确诊的22例BP患者，纳入BP组。其中男12例，女10例，年龄48～86（69.45±11.51）岁，收集BP患者的血清和疱液。（1）入选标准：①符合BP的诊断标准［5］；②结合病史、临床表现、组织病理、直接免疫荧光及血清中抗BP180和BP230抗体确诊；③首次就诊。选取37例同期在郑州大学第一附属医院皮肤科就诊的其他患者（寻常型天疱疮30例、疖肿5例、孢子丝菌病2例）作为对照组，其中男20例，女17例，年龄42～78（63.89±9.33）岁。所有入组人员不伴有荨麻疹、湿疹和药疹等其他过敏性疾病，1个月内无免疫抑制剂及糖皮质激素治疗史，未合并其他系统性疾病，如糖尿病、恶性肿瘤等。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 检测方式

1.2.1 标本采集和处理 采集BP组及对照组患者空腹静脉血5 mL，离心机离心分离血清（3 000 r·min-1，离心10 min），提取上清液，保存于-70℃冰箱备用。同时采集BP患者疱液2 mL，离心速率3 000 r·min-1，离心5 min后取上清液，保存于-70℃冰箱备用。

1.2.2 IL-31和IL-16水平的检测 采用酶联免疫吸附法检测各组标本血清及疱液中IL-31和IL-16水平。严格按照定量酶联免疫分析试剂盒使用说明操作，绘制标准曲线，通过标准曲线计算样品中IL-31和IL-16的水平。检测IL-31和IL-16的试剂盒购自上海晶抗生物工程有限公司。

1.3 瘙痒严重程度的评估 根据视觉模拟量表（visual analogue scale，VAS）评估患者的瘙痒程度［6］。按瘙痒严重程度从轻到重用0～10共11个数字表示，0表示“没有瘙痒”，10表示“难以忍受的剧烈瘙痒”。患者对采血当天的自觉瘙痒程度进行评分。按评分将瘙痒程度分为3个等级：轻度瘙痒（1～3分）、中度瘙痒（4～6分）、重度瘙痒（7～10分）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 26.0统计软件进行数据处理。计量资料以中位数（四分位数）［M（P25，P75）］表示，两组间比较采用非参数Mann-Whitney U检验；采用Spearman秩相关检验分析BP患者IL-31、IL-16水平与瘙痒程度的相关性。P＜

0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 瘙痒程度 BP组患者均有瘙痒，其中中度瘙痒12例，重度瘙痒10例；对照组患者无瘙痒3例，轻度瘙痒14例，中度瘙痒20例。BP组VAS评分［6.00（4.00，8.00）分］较对照组［4.00（3.00，5.00）分］高（Z＝4.168，P＜0.001）。

2.2 血清IL-31、IL-16水平 两组血清IL-16水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；BP组血清IL-31水平高于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 BP组与对照组血清IL-31、IL-16水平比较［M（P25，P75），ng·L-1］

2.3 BP患者血清IL-31、IL-16水平与瘙痒程度的相关性 BP患者血清IL-31水平与瘙痒程度呈正相关（rs＝0.706，P＜0.05），见图1；BP患者血清IL-16水平与瘙痒程度呈正相关（rs＝0.691，P＜0.05），见图2。

图1 BP患者血清IL-31与瘙痒程度评分的散点图

图2 BP患者血清IL-16与瘙痒程度评分的散点图

2.4 BP患者疱液IL-31、IL-16水平与瘙痒程度的相关性 BP患者疱液IL-31水平与瘙痒程度呈正相关（rs＝0.900，P＜0.05），见图3。BP患者疱液IL-16水平与瘙痒程度呈正相关（rs＝0.861，P＜0.05），见图4。

图3 BP患者疱液IL-31与瘙痒程度评分的散点图

图4 BP患者疱液IL-16与瘙痒程度评分的散点图

2.5 BP患者血清、疱液IL-31与IL-16水平的相关性 BP患者血清IL-31水平与血清IL-16水平呈正相关（rs＝0.967，P＜0.05），见图5。BP患者疱液IL-31水平与疱液IL-16水平呈正相关（rs＝0.965，P＜0.05），见图6。

图5 BP患者血清IL-31与IL-16水平散点图

图6 BP患者疱液IL-31与IL-16水平散点图

3 讨论

BP以红斑、水疱伴中重度瘙痒为临床特征，组织病理可见表皮下水疱，浸润细胞以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主。BP发病过程中存在明显的Th2型炎症信号通路活化，Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13水平升高，在激活期诱导Th2依赖性IgG4亚型产生自身抗体。Th2细胞因子激活嗜酸性粒细胞，IL-4、IL-5和IL-13等细胞因子存在时嗜酸性粒细胞浸润皮肤，BP自身抗体存在时产生水疱，导致真表皮分离［7-10］。左亚刚等［11］通过对82例BP患者进行回顾性分析发现，外周血嗜酸性粒细胞水平与BP患者的病情严重程度一致。Farnaghi等［12］研究显示，BP患者皮损组织嗜酸性粒细胞增多与患者的病情严重程度密切相关。而BP病情严重程度往往和瘙痒严重程度呈正相关。BP患者的瘙痒是严重且持续的，对抗组胺药物治疗反应差，严重影响了患者的生活质量。相关证据表明嗜酸性粒细胞、IL-31、免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）等可能参与了BP的瘙痒发生过程［1-2］，但其导致BP出现瘙痒的确切机制尚不清楚。

IL-31是2004年新发现的与瘙痒相关的细胞因子，人类IL-31基因定位于12q24.31。成熟的IL-31分子由141个氨基酸组成，含4个螺旋结构，其受体是由IL-31RA/GPL/GLM-R和OSMR共2个亚基组成的异源二聚复合体。生理状态下，IL-31表达水平较低，活化CD4+的Th2细胞高表达IL-31 mRNA。在人和鼠的脊髓背根神经节中部分神经元表达IL-31的特异性受体IL-31RA，这些IL-31RA阳性的神经元同时还表达瞬时受体电位通道家族的受体TRPV1和RTPA1，当阻断了TRPV1和RTPA1的作用时，IL-31诱发的瘙痒反应明显减弱［13］。OSMR是构成IL-31功能性受体的另1条受体链，只有当OSMR与IL-31RA结合共同构成功能性受体后，IL-31RA与IL-31的亲和力才会增加并产生活化信号［14］，涉及JAK-STAT信号通路和MAPK通路。IL-31激活内皮素-1反应性神经元，促进脑钠肽释放，引发瘙痒。Bonciani等［15］和Salz等［16］研究显示，BP患者皮损组织和血清中IL-31升高。Rudrich等［17］研究表明，BP患者皮损组织和疱液中IL-31升高，IL-31在血清中仅有轻度升高。BP患者皮损组织和疱液中的嗜酸性粒细胞表达IL-31，提示嗜酸性粒细胞是BP患者IL-31的主要来源［18］。Lilianna等［2］研究显示，与正常人群相比，BP患者血清IL-31水平降低，但该研究未进行对照组的瘙痒评分，所以不能明确IL-31水平与BP瘙痒的相关性。故BP患者血清中IL-31水平较低可能与JAK-STAT信号通路有关。本研究中BP组比对照组瘙痒程度高，符合BP的疾病特征，BP患者血清和疱液IL-31水平较对照组高，且血清和疱液IL-31升高水平和瘙痒程度评分均呈正相关（血清组rs＝0.706，疱液组rs＝0.900），疱液IL-31水平与瘙痒程度评分相关性更强。这提示IL-31结合其受体可能参与BP患者瘙痒的发生和维持过程。

IL-16是一种早期促炎因子，其作为T细胞趋化剂于1982年被首次报道，人IL-16基因定位于15q26.1，其mRNA长2.6 kb，编码分子质量为67～80 kD的IL-16前体。成熟的IL-16是由130个氨基酸组成17 kD的糖蛋白，而具有生物活性的IL-16分子是同源四聚体，其分子量为56 kD。IL-16是CD4分子天然的可溶性配体，可趋化并激活CD4+T细胞、嗜酸性粒细胞等多种细胞，可以刺激CD4+T细胞增殖，导致Th1和Th2细胞因子网络失衡，同时嗜酸性细胞也可以分泌IL-16。IL-16在炎症性疾病包括BP［3］、银屑病［19］、过敏性鼻炎［20］中均有升高。Frezzolini等［3］研究显示，BP患者血清IL-16水平高于健康对照者，且和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和可溶性CD30呈正相关，提示IL-16在BP的发病过程中参与了嗜酸性粒细胞和Th2细胞的募集过程，嗜酸性粒细胞和CD4+的Th2细胞均可以作为IL-31的来源。Delli等［4］研究显示，BP患者血清和疱液IL-16水平在IgE升高组与IgE正常组无差异，但该研究未与其他疾病或正常人群的IL-16水平进行对比，推测IL-16在BP中的致病作用可能依赖于炎症环境。Mcfadden等［21］通过研究推测，在皮肤炎症部位，IL-16可能通过优先诱导现有Treg细胞的迁移反应，促进了Treg细胞的选择性扩增。在本研究中，BP组血清IL-16水平与对照组比较无明显差异。这可能与本研究中对照组有相当数量的天疱疮患者有关。天疱疮发病中存在Th2型炎症，但IL-16在天疱疮发病中的具体作用尚不清楚，仍需进一步研究。本研究结果显示，BP组血清和疱液IL-16升高与瘙痒程度评分呈正相关，疱液相关性更强，且血清IL-31升高和IL-16水平也呈正相关。这提示IL-16和IL-31可能共同参与BP瘙痒的发病过程。IL-16升高可能通过趋化或激活作为IL-31重要来源的嗜酸性粒细胞，作为IL-31的上游细胞因子参与BP瘙痒的发生和维持过程。

本研究样本例数较少，可增加病种、扩大样本并进行组织的IL-31受体及相关通路的研究，进一步了解IL-31和IL-16在BP瘙痒中的发生机制。在最近的报道中，新型生物制剂度普利尤单抗在BP患者的难治性瘙痒中取得了很好的疗效［22］，其主要作用机制为结合IL-4和IL-13的共受体IL-4Rα，从而阻断2型炎症通路。因此，进一步探讨BP瘙痒的发生机制有利于发现更多新的治疗BP并发瘙痒的方法。