生殖道沙眼衣原体和生殖支原体与女性不孕不育的相关性分析

袁晓文 袁诗韵 梁景星 吴国新 吴智鑫 张 欣 关紫云▲

1.广东省佛山市南海区人民医院检验科，广东佛山 528200；2.广东省佛山市南海区人民医院急诊科，广东佛山 528200；3.广东省人民医院南海医院病案统计科，广东佛山 528251；4.广东省佛山市中医院ICU，广东佛山 528200；5.广东省佛山市南海区人民医院妇科，广东佛山 528200

近年来，女性不孕不育症的发病率逐年上升，在门诊流产患者统计发现胚胎停止发育的比例不断增高，已高度引起社会以及医务工作者的关注。在一些环境污染严重的地方，女性不孕不育的发病率更高，不少学者针对何种因素导致女性不孕不育发病率的增加进行研究。女性不孕不育症的影响因素有很多，可分为内分泌、阴道、宫颈、输卵管和盆腔-腹膜等[1]。其中感染因素作为影响女性不孕不育的一个重要因素引起了学者们的高度关注[2-3]。据统计，8%～12%的育龄夫妇出现不孕不育，其中生殖道感染的占20%～60%，导致不孕不育症的一个关键原因是女性生殖道急性和慢性感染，而生殖道支原体（Mycoplasma genitalium，Mg）和沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）是引起生殖道炎症的重要病原体[4]。近年以来，研究发现自身免疫失调也可能导致不孕不育，抗子宫内膜抗体（anti endometrial antibodies，EmAb）就是引起不孕不育的一个重要免疫性抗体[5]。基于此，本研究探讨CT 和Mg 与女性不孕不育的相关性，为治疗女性不孕不育提供理论基础和指导意见。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2018年3月佛山市南海区人民医院收治的165 例不育不孕患者作为病例组，选取同期100 例正常生育女性为对照组。病例组患者年龄21～45 岁，平均（29.92±4.63）岁；原发性不孕不育78 例，继发性不孕不育87 例。对照组患者年龄23～46岁，平均（30.90±4.49）岁。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。纳入标准：①病例组患者符合《妇产科学》中关于不孕不育的诊断标准[5]；②患者染色体正常；③有1年正常性生活，未采取任何避孕措施，而未怀孕者。排除标准：①存在精神障碍者、内分泌失调、排卵障碍等引起不孕者；②生殖器畸形者；③合并严重器质病变者。所有患者及其家属均知情同意；本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 用医用棉拭子深入女性宫颈口中旋转1 周，停留10 s 后取出阴道分泌物，将拭子头置于1 ml 生理盐水中浸泡，选取500 μl 浸泡液与500 μl尿样保存液混合，该样本为待测样本。空腹抽两组患者静脉血液，离心后留取血清，将血清放在-20℃冰箱中保存待测EmAb。

1.2.2 仪器与试剂 ABIPrism 7500 型荧光定量PCR仪，Mg 和CT 检测试剂盒均购自上海仁度生物科技有限公司。FC 型酶标仪，抗子宫内膜抗体免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗体检测试剂购自潍坊市康华生物技术有限公司。

1.2.3 样本检测 Mg 和CT 检测：进行实验严格按照试剂盒以及仪器操作说明书，同时设置阴性、阳性和内标对照。采用实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing，SAT） 进行扩增，扩增条件为42℃1 min，40 个循环，荧光素通道设定为F1（FAM）和F2（HEX 或者VIC），荧光信号收集每分钟进行一次。阳性对照和阴性对照的dt 值应满足以下条件，否则，实验视为无效，需重新进行。①阳性对照，F1 通道： 阳性对照dt≤临界弱阳性对照dt≤35，同时熔解曲线在68±5℃区间有吸收峰，F2 通道有或者无数值；②阴性对照，F1 通道：dt 无数值或为40，熔解曲线在68±5℃区间无吸收峰，同时F2 通道：dt<35。抗子宫内膜抗体IgG 抗体检测：采用免疫酶联法测定患者血清抗子宫内膜IgG 抗体，试剂盒购于潍坊市康华生物技术有限公司，操作严格按照试剂盒说明书进行。EmAb 结果判断：Cut-off value（COV）参考值计算：COV=NC×3； 若NC<0.100，则按0.100 计算，NC>0.100 时，按实际值计算。阳性判定：样品吸光度（optical density，OD）值（S）COV≥1.0，说明该待测样本EmAb IgG 结果为阳性；阴性判定：样品OD 值（s）CO<10，说明该待测样本EmAb IgG 结果为阴性。

1.3 观察指标

比较两组患者Mg 及CT 的阳性检出率、 病例组中Mg 或CT 阳性患者与阴性患者的EmAb 阳性率、生殖道CT 及Mg 感染与女性不孕不育的相关性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 25.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用率表示，两组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman 相关分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者生殖道CT 及Mg 阳性检出率的比较

病例组患者Mg 和CT 阳性检出率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），Mg 和CT 合并感染有8 例，检测结果见表1。

表1 两组患者生殖道CT及Mg 阳性检出率的比较[n（%）]

2.2 病例组中Mg 或CT 阳性患者与阴性患者EmAb阳性率的比较

病例组165 例不孕不育患者中EmAb 阳性13例，EmAb 阴性152 例；Mg 和CT 阳性患者的EmAb 阳性率高于Mg 和CT 阴性患者，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

表2 病例组中Mg 或CT 阳性患者与阴性患者EmAb 阳性率的比较[n（%）]

2.3 CT、Mg 和EmAb 与女性不孕不育的相关性分析

Spearman 相关性分析显示生殖道CT 及Mg 感染与女性不孕不育成正相关（P<0.05）（表3）。

表3 CT、Mg 和EmAb 与女性不孕不育的相关性分析

3 讨论

随着社会的高速发展，人们交往频繁，性观念不断变化，泌尿道生殖道疾病由于不洁性行而不断蔓延，而人们缺乏保护意识，严重缺乏性卫生相关知识，泌尿道生殖道感染疾病不断增多，对人类身体健康造成严重威胁[6]。据统计，8%～12%的育龄夫妇会出现不孕不育，其中生殖道感染有关的占20%～60%，导致不孕不育的一个重要原因是女性生殖道急性和慢性感染，而Mg、CT 是诱发泌尿道生殖道炎症的重要病原体[4]。

Mg 能在无生命的培养基中生长繁殖，在动物或者人的腔道黏膜上存在的原核微生物。它在人体腔道的黏膜上寄宿，当机体免疫力下降或黏膜受损，可诱发人体的泌尿系统感染[7]。Risser 等[8]报道，支原体感染可通过引起女性泌尿生殖道阻塞、粘连和炎症从而成为造成女性不孕症的主要原因之一。方智淑等[9]报道，支原体感染既可单独引起盆腔炎症，还可协同其他病原体促进盆腔炎症的发生，进而导致女性不孕不育。衣原体也是一种原核微生物，如果黏膜衣原体感染，其产生的疤痕可能会导致输卵管炎后致不育，而CT 是革兰氏阴性病原体，它有始体和原体两种发育形式，而原体的感染力很强，它偏向于侵入柱状上皮细胞，所以其主要靶器官是宫颈[10]。CT 侵入人体后主要存在于粪便、精液、尿道分泌物、宫颈及宿主细胞内，它经过性交、直接的体液交换和亲密接触来传播，在泌尿道感染中，CT 感染已成为欧洲国家性传播疾病的首位病原体，CT 感染率在我国也有上升趋势[11]。CT 和Mg 主要通过性行为传播，导致自然流产和胚胎停止发育的概率较大，由于抗生素的滥用，病原菌耐药性不断增强，防治CT 成为一个难题[12-13]。

本研究结果显示，病例组患者Mg 和CT 阳性检出率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），提示不孕不育与生殖道Mg 和CT 感染有一定的关系。本研究进一步证实了实生殖道CT 及Mg 感染均与妇女的不孕不育存在相关性。女性感染Mg 或CT 后，炎症可以沿生殖道上行，引发输卵管阻塞、输卵管炎症、子宫内膜炎症等，炎症一方面可通过直接影响女性卵子运行和受精、受精卵运行、胚胎着床发育来引起不孕或流产，炎症另一方面还可通过引起单核巨噬细胞和T 淋巴细胞聚集置炎症部位，同时吞噬受损的组织，进而诱发免疫反应，造成机体自身丢失或重复的配子，进而会形成染色体单体或部分染色体三体的合子，从而致使受精卵卵死亡最终流产[14]。

EmAb 是育龄妇女针对子宫内膜异位症、子宫内膜炎等病理情况而产生的免疫抗体，妇女子宫内膜正常情况下在卵巢激素的调节下产生周期性剥落，然后随月经排出，所以一般不会诱导产生自身免疫抗体[10，15-16]。本研究结果显示，Mg 和CT 阳性患者的EmAb 阳性率高于Mg 和CT 阴性患者，差异有统计学意义（P<0.05），提示不孕不育患者的EmAb 的产生和Mg、CT 感染有一定关系，生殖道感染可以诱导机体产生EmAb。女性患者生殖道感染后，损伤子宫内膜，巨噬细胞吞噬损伤的组织，诱导机体免疫反应，产生EmAb。

综上所述，CT 和Mg 与女性不孕不育具有相关性，应当引起高度关注，而EmAb 的产生与生殖道Mg、CT 感染有关，可作为辅助诊断女性不孕不育的重要有效手段。从优生优育角度考虑，可将CT、Mg 和EmAb 列入孕前筛查，同时也列入不孕不育常规检查，有助于早发现、早治疗，从而减少泌尿生殖道感染引起的不孕不育，提高优生优育水平。