慢性宫颈炎患者HPV感染状况、基因型分布及其与阴道微生态指标的相关性研究

张海琴，刘娟娟，娄俊丽，雷申琼

铜川市妇幼保健院妇产科，陕西 铜川 727000

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)作为一种嗜上皮性病毒[1]，属于乳头多瘤空泡病毒科乳头瘤病毒属，分布广泛，宿主特异性高。不同类型HPV的致病程度差异明显[2]，高危型HPV感染是宫颈癌、宫颈上皮内瘤病变的主要发病原因[3]，而低危型HPV 感染与生殖器尖锐湿疣等密切相关[4]。慢性宫颈炎是妇科门诊较常见的疾病，多合并HPV 感染，同时慢性宫颈炎导致的宫颈糜烂，使病毒较易进入细胞，增大HPV感染风险。近年来，阴道微生态的相关研究是宫颈病变领域的关注热点[5-6]，许多妇科类疾病均与阴道微生态的状态有紧密联系[7-8]。有鉴于此，本研究分析慢性宫颈炎患者HPV感染分型的筛查结果，并探讨其与阴道微生态相关指标的相关性，以期为临床宫颈疾病的筛查、防治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年1 月至2020 年12月于铜川市妇幼保健院妇科门诊收治的140 例慢性宫颈炎患者为研究对象(病例组)，年龄18～65 岁，平均(34.56±10.82)岁，体质指数(22.49±2.74)kg/m2。纳入标准：①符合临床上宫颈炎的诊断标准[9]，经临床宫颈组织病理学检查确诊；②有既往性生活史；③患者对研究了解知情，并签署同意书。排除标准：①近3 d用药清洗阴道者；②有子宫切除手术史；③妊娠、孕期妇女；④近期有服用免疫抑制剂者；⑤患免疫缺陷疾病，如艾滋病等。另选取同期在我院体检的健康妇女60例作为正常组，年龄18～60岁，平均(33.70±9.56)岁，体质指数(22.75±2.93)kg/m2。两组受检者的年龄、体质指数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法 全部受试者接受阴道微生态检查与HPV 感染筛查。HPV 检测方法：使用无菌窥阴器，经生理盐水润滑后缓慢放入患者阴道内，轻拭去宫颈口黏液，宫颈充分暴露后，使用样本刷在宫颈管2 cm处和宫颈外口旋转3 圈，停留15 s，作为样本置于小管中，分离提取样本的HPV-DNA，使用试剂盒(迪安生物技术公司提供)采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增和杂交，然后通过反向杂交技术证实扩增产物和杂交结果，定性检测碱性磷酸酶系统，同时可鉴别HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68和6、11、43、44 等不同基因型，试剂盒由上海信裕生物科技公司提供。阴道微生态检测：患者使用生理盐水冲洗外阴，使用无菌棉签由阴道壁上1/3 取得阴道分泌物，棉签上可见清晰的阴道分泌物即为取样成功，采用细菌性阴道炎(BV)三联法检测分泌物中的白细胞酯酶、唾液酸甘酶，使用显微镜观察分泌物中乳酸杆菌、滴虫等的检出情况，使用pH试纸测定阴道分泌物pH值。

1.3 观察指标 (1)根据相关标准[10]检测所有受试者的阴道微生态指标(白细胞酯酶、唾液酸甘酶、pH 值、乳酸杆菌)并进行诊断。阴道微生态正常：唾液酸甘酶阴性，优势菌为乳酸杆菌，pH≤4.5，阴道分泌物中未发现滴虫、菌丝；白细胞酯酶阳性：pH≤4.5，阴道分泌物未发现滴虫、菌丝，白细胞酯酶阳性。(2)检测所有受试者的HPV基因型分布及患者的HPV多重感染情况。

1.4 统计学方法 应用SPSS20.0 统计学软件进行数据分析。计量资料符合正态分布，以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验，采用Spearman相关分析高危型HPV感染与慢性宫颈炎患者阴道微生态指标的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病例组患者的HPV 多重感染情况 病例组患者中检出HPV阳性72例，其中59例为单一感染，占42.14%，13 例为多重感染，占9.29%，以高危型多重感染为主，见表1。

表1 病例组患者的HPV多重感染情况[例（%）]

2.2 两组妇女的HPV 分型检出率比较 病例组患者的HPV6、HPV16检出率高于正常组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组妇女的HPV分型检出率比较[例（%）]

2.3 两组妇女的阴道微生态指标比较 病例组患者的乳酸杆菌多分布、阴道pH＞4.5 占比分别为62.86%、60.00%，明显高于正常组的36.67%、43.33%，差异均有统计学意义(P＜0.05)；病例组患者的白细胞酯酶阳性率、唾液酸甘酶阳性率分别为69.29%和61.43%，明显高于正常组的48.33%和45.00%，差异均有统计学意义(P＜0.05)；而两组受检者的滴虫阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 两组妇女的阴道微生态指标比较[例（%）]

2.4 不同HPV基因型患者的阴道微生态指标比较 高危型患者的乳酸杆菌多分布占比为34.78%，明显低于低危型患者的66.67%，差异有统计学意义(P＜0.05)；高危型患者的白细胞酯酶、唾液酸甘酶阳性率分别为56.52%和60.87%，明显高于低危型患者的27.78%和33.33%，差异均有统计学意义(P＜0.05)；而两组受检者的的阴道pH、滴虫阳性率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表4 不同HPV基因型患者的阴道微生态指标比较[例（%）]

2.5 高危型HPV感染与慢性宫颈炎患者阴道微生态指标的相关性 高危型HPV感染与慢性宫颈炎患者的乳酸杆菌、白细胞酯酶、唾液酸甘酶呈正相关(r=0.684，P=0.018；r=0.523，P=0.025；r=0.621，P=0.020)。

3 讨论

阴道作为女性开放性的腔道，能反映妇女体内重要微生态群、宿主及环境的动态平衡。一般健康女性的阴道环境呈酸性，而阴道微生态的核心是阴道菌群，以乳酸杆菌为代表。既能维持阴道酸性环境、激活机体免疫力，也能作为屏障阻断外界菌种侵袭。HPV 是在妇女阴道中较为多见的病原体，正常情况不会造成感染；而当阴道微生态失调，HPV 持续感染，可导致宫颈上皮增生、甚至发展成宫颈癌。有报道指出[11]，长期的HPV 感染是宫颈癌的重要病因；同时高危型HPV 感染也极易导致宫颈癌发生[12]。所以本研究通过分析宫颈炎患者不同HPV基因型、感染情况以及与阴道微生态的关系，有助于完善早期筛查项目，为宫颈癌的临床防治提供可参考的建议。

本次研究结果发现，140例慢性宫颈炎患者中，检出HPV 阳性72 例，其中59 例为单一感染(42.14%)，13 例为多重感染(9.29%)，以高危型多重感染为主，这一结果与叶云等[13]的研究结果基本类似。同时，本研究还发现，病例组HPV6、HPV16 检出率均高于正常组，与方美玉[14]的研究结果基本保持一致。

另一方面，本研究结果显示，病例组的乳酸菌分布情况、阴道pH、白细胞酯酶阳性率、唾液酸甘酶阳性率与正常组之间存在明显差异；而两组滴虫阳性率比较，差异无统计学意义。提示相比正常妇女，慢性宫颈炎患者的阴道微生态明显失衡，而阴道微生态失衡，造成大量外来病菌侵袭，对宫颈上皮细胞产生不同程度的损害，可能是导致宫颈炎产生的重要原因。同时，本研究还表明，在不同HPV 基因型患者的阴道微生态指标比较中，高危型患者与低危型患者的乳酸菌分布、白细胞酯酶阳性率、唾液酸甘酶阳性率比较，差异亦有统计学意义；但两组的阴道pH、滴虫阳性率比较，差异无统计学意义。提示高危型HPV感染者的阴道微生态失衡状态比低危型HPV 感染者更严重，GODOY等[15]、谢建萍等[16]在报道中亦持相似观点。至于两组的阴道pH无明显差异，与之前病例组、正常组的结果不同，推测是样本量较少所致，同时阴道分泌物采集过程中亦存在一定差异，对此尚需今后做进一步深入研究。

最后对高危型HPV 感染和慢性宫颈炎患者阴道微生态指标的相关性分析中，研究结果显示，高危型HPV感染与阴道微生态指标(乳酸杆菌、白细胞酯酶、唾液酸甘酶)均呈正相关，且相关性系数均大于0.5，提示阴道微生态指标与慢性宫颈炎患者的高危型HPV 感染具有较高的相关性。原因可能是乳酸杆菌下降，表现为H2O2缺乏，进而影响阴道酸性环境，抑制致病微生物的能力减弱，增加宫颈HPV 尤其是高危型HPV 感染风险。罗秀清等[17]在相关研究中同样表示阴道微生态失衡与高危HPV 感染有一定关系；但同时也有研究显示[18]，高危型HPV感染的原因和危险因素可能包括过度的阴道冲洗、无保护措施的性生活等，且高危型HPV 感染率未伴随乳酸杆菌下降而增加，表明两者之间具体相关性亟待于大量临床实践予以证实。

综上所述，慢性宫颈炎患者HPV 感染率较高，多为单一感染，复合型感染以高危型多重感染为主；且慢性宫颈炎患者存在阴道微生态失衡，高危型HPV感染与阴道微生态指标存在较强的相关性。但本研究仍存在不足之处，如针对高危型、低危型HPV 感染与阴道微生态相关性研究样本不足，具体机制仍未完全清楚，今后应扩大样本量，多中心研究予以深入探明。