PTC组织中MTA1、Gankyrin表达的变化与术后复发、转移的关系

潘晓培 钱连连 李红强 王慧慧

临床上甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid car⁃cinoma，PTC）是最常见的甲状腺恶性肿瘤。在长期精神压力或者高碘摄入的群体中，PTC 的发病率可进一步上升［1］。虽然经外科治疗大部分PCT患者能够获得较好的临床疗效，但肿瘤的转移、复发仍然是影响预后的主要因素［2］，临床上缺乏对于PTC 临床复发或者转移风险的评估指标，而通过对于PTC 发病过程中复发或者转移风险预测指标的研究，能够为临床上PTC 的治疗方案的制定提供参考。肿瘤相关蛋白在肿瘤细胞的生物学特征调控过程中发挥重要作用。肿瘤转移相关基因蛋白1（Tumor metastasis related gene protein 1，MTA1）是肿瘤细胞转移调控相关因子，其能够通过促进癌细胞上皮⁃间质转换提高肿瘤细胞的增殖浸润程度［3⁃4］；癌性锚蛋白重复序列（Cancerous an⁃kyrin repeat，Gankyrin）是癌细胞增殖调控因子，其对于癌细胞干细胞特性的维持作用，能够显著提高残留肿瘤细胞的复发风险［5］。为了揭示MTA1、Gankyrin 的表达与PTC 患者的病情关系，为临床PTC 的诊疗提供参考，本次研究探讨了PTC 患者中MTA1、Gankyrin 的表达情况，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取郑州大学第一附属医院2017年1月至2019年3月手术治疗的173 例PTC 患者术后标本作为PTC 组，其中男56 例、女117 例，年龄平均（48.5±9.7）岁；TNM分期标准［3］：Ⅰ期44例、Ⅱ期76例、Ⅲ期41 例、Ⅳ期12 例；病灶直径≥2.0 cm 75 例、<2.0 cm 98 例；淋巴结转移阳性74 例；术后5年复发23 例、转移9 例。另选取同期手术获取的甲状腺良性肿瘤组织160 例作为良性病变组，其中男55 例、女105 例，年龄平均（46.3±9.0）岁；其中甲状腺腺瘤90 例、结节性甲状腺肿47 例、其他23 例；两组研究对象年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 诊断标准

PTC 的诊断标准参考中华医学会制定的标准［6］：①患者年龄≤79 岁；②手术标本均来源于手术后；③手术前患者未接受放化疗、免疫治疗；④本研究符合《赫尔辛基宣言》中医学临床实验相关标准，基础资料完整。⑤所有受试者均知情同意。排除标准：①急性心肌梗死；②合并其它器官系统恶性肿瘤；③既往具有甲状腺手术史；④其他系统的严重疾病。

1.3 方法

①免疫组化染色：采用免疫组化进行MTA1蛋白、Gankyrin 蛋白的检测：PTC 组织标本常规甲醛固定，石蜡包埋切片，二甲苯及酒精脱蜡至水化，EDTA 修复抗原，3% H2O2孵育20 min 封闭过氧化物酶，加入山羊血清37℃温育10 min，加入MTA1、Gankyrin 第一抗体（MTA1：兔来源 浓度1∶100，购自ABGENT 公司；Gankyrin：兔来源 浓度1∶100，购自Abcam 公司），4℃孵育过夜，次日置于室温30 min 后，PBS 清洗3 次，甩干，加入生物素荧光标记的二抗（南京碧云天生物公司浓度：1∶2 000）3 mL，37℃孵育20～30 min，PBS 清洗3 次，每次5 min，加入HRP 辣根酶标记链霉卵白素（武汉生之源生物公司 试剂盒批号：20178496），HRP⁃DAB 底物显色试剂盒（PA110）显色，自来水冲洗，复染，脱水、透明、封片。

②结果判定［4］：MTA1 蛋白阳性着色主要定位于细胞核，Gankyrin 蛋白的阳性着色主要定位于细胞质、细胞膜，呈黄色、棕黄色、褐色表达，a.根据着色强度：0 分为无色、1 分为淡黄色、2 分为棕黄色、3 分为褐色；b.根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1 分、阳性细胞所占比例11%～50%为2 分、阳性细胞数51%～75%为3 分、阳性细胞数所占比例>75%为4 分，两种积分相乘总分<3 分为阴性、≥3 分为阳性。

1.4 统计分析

采用SPSS 21.0 软件进行数据分析统计，计量资料采用（±s）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用n（%）表示，行χ2检验；PTC 术后复发转移影响因素分析采用二元Logistic 回归分析法；P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTC 组和良性病变组标本中MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白阳性表达率比较

PTC 组患者MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白阳性表达率均高于良性病变组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1、图1。

表1 MTA1、Gankyrin 蛋白阳性表达率比较［n（%）］Table 1 Comparison of positive expression rates of MTA1 protein and Gankyrin protein［n（%）］

图1 PTC组织中MTA1、Gankyrin蛋白阳性表达（SP，×200）Figure 1 MTA1 and Gankyrin proteins were positively expressed in PTC tissue（SP，×200）

2.2 PTC 标本中MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白阳性与患者病理学特征及术后复发转移的关系

PTC 标本中MTA1 蛋白阳性表达在不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、是否出现术后复发转移的患者中比较，差异有统计学意义（P<0.05）；Gankyrin 蛋白阳性表达率在术后是否出现复发转移的PTC 组织中比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 PTC 标本中MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白阳性表达与患者病理学特征及术后复发转移的关系［n（%）］Table 2 Relationship between the positive expression of MTA1 protein and Gankyrin protein in PTC specimens and pathological characteristics and postoperative recurrence and metastasis［n（%）］

2.3 影响PTC 术后复发转移的多因素分析

采用Logistic 回归分析PTC 术后复发转移的危险因素，结果显示，MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白阳性表达及TNM 分期为Ⅲ期+Ⅳ期是在术后出现复发转移的独立危险因素（P<0.05）。见表3。

表3 Logistic 回归分析结果Table 3 Logistic regression analysis results

3 讨论

甲状腺癌是由于不同因素诱导的甲状腺上皮细胞的异常增殖及细胞永生化。近年来随着生活压力的增加和工作节奏的加快，甲状腺恶性肿瘤的发病具有显著低龄化趋势。其中PTC 占到了所有甲状腺恶性肿瘤的35%以上，是甲状腺恶性肿瘤的主要类型之一，由于其在甲状腺恶性肿瘤中占有较高的比例，因此PCT 的临床治疗在甲状腺外科中尤其受到重视［7⁃8］。PTC 术后的复发转移，不仅是影响患者预后的主要因素，而且复发后的再次外科治疗，发生副损伤的机率增高，增加了PTC 患者的致残风险。现阶段缺乏对于PTC 患者复发转移的相关因素的预测评估，主要通过其临床及影像特征，目前尚且缺乏有效的血清学指标。虽然甲状腺球蛋白等血管因子，能够在甲状腺恶性肿瘤的复发转移评估过程中发挥作用，但依靠甲状腺球蛋白等指标预测PTC 复发转移风险的灵敏度不足35%，其对于PTC 患者临床结局预测的可靠性较低［9⁃10］。本次研究通过对于PTC 患者病灶组织中MTA1、Gankyrin 的表达分析，不仅能够揭示PTC 患者的病情进展内在机理，同时能够为临床上PTC 的治疗提供复发预测指标。

MTA1 是转移调控相关因子，其主要表达于癌细胞间质及癌细胞线粒体中。MTA1 结构上包括有4⁃5 个磷酸化巯基结构，能够通过结合癌细胞膜表面糖蛋白受体，进而诱导癌细胞生物学行为的恶化；Gankyrin 是癌细胞增殖转录调控因子，其对于肿瘤细胞转录上游启动子的激活，能够显著加剧癌细胞核DNA 的扩增。部分研究者探讨了MTA1 在甲状腺癌患者病灶组织中的表达情况，认为在甲状腺癌患者中，MTA1 蛋白的表达阳性率明显上升［11］，但缺乏对于Gankyrin 的表达与PTC 的关系研究。

本次研究通过免疫组化，揭示了MTA1、Gan⁃kyrin 蛋白在PTC 患者病灶组织中的表达情况，发现在PTC 患者中，MTA1、Gankyrin 蛋白的表达阳性率水平均明显上升，表明MTA1、Gankyrin 蛋白的高表达均能够影响到甲状腺恶性肿瘤的病情进展过程。之所以存在较高的MTA1、Gankyrin 表达，主要由于甲状腺乳头癌细胞异常癌变的过程中，部分癌细胞的异常凋亡能够显著促进癌细胞内MTA1、Gankyrin 蛋白的释放［12⁃13］。在不同的临床病理特征的患者中，可以发现在TNM 分期较晚、发生了淋巴结转移或者复发转移的患者中，MTA1 蛋白的表达阳性率较高，提示了MTA1 蛋白的高表达能够显著促进PTC 患者的整体性病情的进展。这主要由于MTA1 的上升，能够提高乳头状癌细胞的浸润和粘附能力，促进了其对于淋巴结内皮组织的浸润，进而促进了淋巴结转移的发生［14］。而MTA1 对于残留癌细胞内MAPK 或者AKT 信号通路的激活，能够显著加剧肿瘤细胞的自我增殖效应，促进癌细胞的复发转移［15⁃16］；在出现复发转移的PTC 患者中，Gankyrin 蛋白的表达阳性率较高，表明Gankyrin 同样能够显著影响到甲状腺肿瘤的病情进展过程。这主要由于Gankyrin 能够通过影响到乳头状上皮细胞癌基因的表达，维持癌细胞干细胞特性，提高了甲状腺乳头状癌细胞的上皮⁃间质转换风险，促进了术后复发转移［17］。但在不同临床分期或者淋巴结转移的患者中，Gankyrin 的表达并无明显的差异，提示Gankyrin 并不能影响到乳头状癌细胞对于淋巴结组织的粘附能力［18⁃20］。危险因素分析发现，MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白阳性表达及TNM 分期为Ⅲ期+Ⅳ期是在术后出现复发转移的独立危险因素，临床上对于相关PTC 患者，应增加临床干预，进而改善PTC 的临床结局。

综上所述，MTA1 表达与PTC 恶性程度增加有关，MTA1 蛋白、Gankyrin 蛋白表达增强可能会增大PTC 患者术后复发转移的风险。