伴MELF 模式子宫内膜样癌中MMP-2 蛋白表达及病理意义

王伟 于水

子宫内膜样癌是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤,是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤之一,在我国发病率仅次于宫颈癌,发病率呈明显上升趋势［1］。Murray 等［2］在2003 年首次描述了一种特殊的子宫内膜样癌浸润子宫肌层的模式,浸润的腺体呈微囊性（microcystic）、拉长（elongated）及碎片状（fragmented）,简称为MELF 模式。伴MELF 模式子宫内膜样癌常与深肌层浸润、脉管内癌栓及淋巴结转移相关,其浸润潜能相关的机制尚不十分清楚。基质金属蛋白酶（MMPs）几乎能降解细胞外基质（ECM）中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障,在肿瘤侵袭转移中起关键性作用［3］。MMPs 可由肿瘤实体细胞直接分泌,但最常由反应性间质包括成纤维细胞和炎性细胞等合成分泌。ECM 主要是由Ⅳ型胶原蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白组成。MMPs 中的MMP-2 在多种恶性肿瘤中可观察到其过表达现象。本实验通过检测52 例国际妇产科协会（FIGO）分级Ⅰ～Ⅱ级伴MELF 模式子宫内膜样癌间质反应中免疫组化MMP-2 蛋白表达情况,探讨其病理意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性收集大连市妇女儿童医疗中心(集团)春柳妇产院区病理科诊断的52 例伴MELF 模式的子宫内膜样癌患者的临床资料,术前均未接受辅助治疗,除2 例患者没有进行淋巴结清扫术外,其余均已行全子宫+双附件切除术及淋巴结清扫术。所有患者均由两名具有高级职称的病理医生独立进行镜下确认。满足MELF 模式诊断标准［4］。

1.2 方法 鼠抗人MMP-2 单克隆抗体以及相应生物素化二抗购自基因科技(上海)股份有限公司。DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用S-P法检测MMP-2 蛋白表达,一抗均稀释100 倍,37℃孵育45 min,二抗稀释100 倍,37℃孵育20 min。

1.3 观察指标 观察MELF 模式中MMP-2 蛋白表达,分析MMP-2 蛋白阳性表达灶数与肿物浸润最深处距子宫浆膜距离、深肌层浸润及淋巴结转移的相关性。

1.4 判定标准 MMP-2 蛋白：着色范围以无细胞显色为0 分,＜25%为1 分,25%～50%为2 分,＞50%为3 分；着色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分,无色为0 分,淡黄色为1 分,棕黄色为2 分,棕褐色为3 分；两项评分相加作为综合评分,0～1 分为阴性,2～3 分为“+”,4～5 分为“++”,＞5 分为“+++”,以“+”及以上表达计为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS24.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验；采用Spearman相关以及Logistic 回归进行相关性分析。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MELF 模式中MMP-2 蛋白表达 MELF 区主要位于肿瘤浸润灶前沿处,MELF 腺体周围可见明显的间质反应区,反应区细胞成分主要包括成纤维细胞及炎细胞。见图1,图2。MELF 区中MMP-2 蛋白的表达主要为两种细胞成分：MELF 腺体周围的CAFs 和MELF 腺体周围炎细胞浸润区的中性粒细胞。见图3,见图4。

图1 MELF 腺体周围成纤维细胞增生(↑),400×；图2 MELF 腺体周围大量中性粒细胞浸润,400×；图3 MMP-2 蛋白表达于MELF 腺体周边成纤维细胞增生区(↑↑),与之对应的非MELF 区腺体周围未见MMP-2 蛋白阳性表达(↑),100×；图4 MMP-2 蛋白表达于MELF腺体间中性粒细胞浸润区,400×

2.2 MMP-2 蛋白阳性表达灶数与肿物浸润最深处距子宫浆膜距离的相关性分析 通过Spearman相关分析,发现MMP-2 阳性表达灶数和肿物浸润最深处距子宫浆膜距离存在负相关（r=-0.859,P＜0.05）。见表1。

表1 MMP-2 蛋白阳性表达灶数与肿物浸润最深处距子宫浆膜距离的相关性分析

2.3 MMP-2 蛋白阳性表达的灶数与深肌层浸润及淋巴结转移的相关性分析 MMP-2 蛋白阳性表达≥4 灶与深肌层（≥1/2 肌层）浸润具有相关性（P＜0.05）；与淋巴结转移无相关性（P＞0.05）。见表2。

表2 MMP-2 蛋白阳性表达的灶数与深肌层浸润及淋巴结转移的相关性

3 讨论

近年来,肿瘤微环境逐渐成为研究肿瘤领域的焦点。有报道称,伴MELF 模式子宫内膜样癌与肿瘤微环境相关［5,6］。肿瘤微环境是指肿瘤细胞、基质细胞、趋化因子等。其中,基质细胞是指成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞等。肿瘤微环境中的免疫细胞,包括肿瘤相关巨噬细胞（TAM）和肿瘤相关T 细胞（TAT）等,可促进肿瘤的侵袭及转移［7,8］。本研究发现,MELF 腺体周边间质反应的主要细胞成分为CAFs 及淋巴细胞、中性粒细胞等。MMP-2 蛋白在MELF 区的CAFs 及中性粒细胞呈现高表达状态,而在非MELF 区肌层浸润处未见到明确阳性表达。

本研究结果显示,通过Spearman 相关分析,发现MMP-2 阳性表达灶数和肿物浸润最深处距子宫浆膜距离存在负相关（r=-0.859,P＜0.05）。肿瘤微环境中的CAFs 及中性粒细胞分泌过多的MMP-2 蛋白,与肿瘤浸润肌层深度相关［4,9］。同时,MMP-2 蛋白阳性表达≥4 灶与深肌层（≥1/2 肌层）浸润具有相关性（P＜0.05）；与淋巴结转移无相关性（P＞0.05）。认为,在MELF 模式中肿瘤微环境的CAFs 及中性粒细胞分泌过多的MMP-2 蛋白可能对于远处转移如淋巴结转移的影响较小,而对于肿物的肌层浸润深度意义较大。

综上所述,伴MELF 模式子宫内膜样癌中,MELF腺体周围间质MMP-2 蛋白阳性表达灶数与肿物浸润深度呈正相关,MMP-2 蛋白阳性表达≥4 灶与深肌层（≥1/2 肌层）浸润具有相关性,但其具体的分子机制还需要大量的样本深入研究。