DICR基因多态性与变异性哮喘易感性的研究

林祥晓 丁宇 张雪梅

随着分子生物学和基因学的发展，对于变异性哮喘易感性患者的研究逐渐深入，发现患者基因多态性表型以及等位基因频率与变异性哮喘易感性的发生有密切联系，基因通过信号传导作用于机体免疫细胞，下调免疫细胞活性，从而导致免疫系统紊乱，导致气道高反应，进而导致咳嗽迁延不愈，呼吸困难，严重影响患者正常生活[1-2]。树突状细胞免疫受体(Dendritic cell immune receptor，DICR)能够平衡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子信号通路，调节树突状细胞生长周期，DICR受体缺失鼠模型中DC细胞过度增殖上调免疫应答而加重哮喘症状，DICR受体也成为哮喘治疗的新靶点[3-4]。本研究对本院52例变异性哮喘易感性患者展开随机对照，探究DICR基因多态性与变异性哮喘发生的相关性。

资料与方法

一、一般资料

选取2018年7月―2019年2月期间本院收治的52例变异性哮喘易感性患者作为哮喘组，其中男24例，女28例，年龄19～48岁，平均年龄(27.34±2.26)岁。并选取同期的40例健康者作为健康者组，其中男15例，女25例，年龄19～48岁，平均年龄(28.16±2.43)岁。2组性别(χ2=0.693，P=0.405)、年龄(t=1.670，P=0.099)等均线资料较为接近，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：(1)经诊断符合变异性哮喘诊断标准，年龄>18岁；(2)无严重心、肝、肾功能障碍者；(3)无全身性免疫性疾病者；(4)患者及家属同意并签署知情通知书者。

排除标准：(1)合并血液系统疾病者；(2)合并全身性慢性疾病者；(3)孕妇哺乳期妇女；(4)不配合基因多态性检测研究者。研究获我院伦理研究委员会批准。

二、方法

DICR基因检测：引物均由美国应用生物系统公司合成，采用Gene Amp9300定量聚合酶链反应(PCR)仪(ABI)进行SNP检测及终点读序。使用常规序列引物，确定DICR基因有TT、TC、CC基因型分布，引物稀释冷藏处理后待PCR扩增，PCR体系采用美国erkin．Elmer公司引物合成，采用SYBR Green实时定量PCR扩增法及标准曲线法进行相对定量分析(ABI实时定量PCR 7300)，确定DICR基因T、C两种等位基因分布频率。

三、观察指标

1 2组研究对象DICR基因rs2377422位点基因型和等位基因频率分布 根据DICR 基因检测结果分别统计DICR基因 TT、TC、CC型和T、C两种等位基因频率在2组研究对象中的分布情况。

2 2组研究对象DICR基因rs10840759位点基因型和等位基因频率分布 根据PCR扩增反应结果统计2组研究对象DICRT、C两种等位基因频率的分布情况。

3 变异型哮喘易感性与DICR基因相关性 采用Pearson对2组研究对象的DICR基因型和等位基因进行相关性分析。

四、统计学方法

应用SPSS 19.0分析，计数资料以n(%)来表示，采用χ2检验；多组相关性分析采用双侧检验，检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、2组DICR基因型比较

DICR基因rs2377422位点基因型中，2组研究对象TT型和CC型基因分布频率差异显著，哮喘患者组T型和C型基因型分布频率显著高于健康组(P<0.05)，而2组研究对象DICR基因rs2377422位点T型和C型等位基因分布频率无明显差异P>0.05(见表1)。

表1 2组DICR基因rs2377422位点基因型和等位基因频率分布比较[n(%)]

二、2组DICR基因rs10840759位点分布频率比较

DICR基因rs10840759位点基因型中，2组研究对象T型和C型基因型分布频率无明显差异显著(P>0.05)，而2组研究对象T型等位基因分布频率存在显著差异，哮喘患者组T型基因分布频率显著高于健康组(P<0.05)，而T型等位基因分布频率无明显差异显著(P>0.05)见表2。

表2 2组DICR基因rs10840759位点基因型和等位基因频率分布比较[n(%)]

三、变异型哮喘易感性与DICR基因相关性比较

对与变异性哮喘相关基因型采用双侧检验，结果显示，DICR基因rs2377422位点下基因型与变异型哮喘易感性具有相关性(P=0.004，95%CI：1.135～1.647)，而rs10840759位点下等位基因与变异型哮喘易感性具有相关性(P=0.015，95%CI：1.158～1.322)(见表3)。

表3 变异型哮喘易感性与DICR基因相关性

讨 论

变异型哮喘是一种复杂的多基因遗传性疾病，因咳嗽和呼吸困难，易导致人体多脏器功能不全或功能衰竭，威胁患者生命安全[5-6]。易感性主要由基因决定，变异型哮喘易感性患者因遗传基因对免疫调节作用下降，其患病风险增加，因此，对哮喘易感基因的研究成为遗传学的一个重要方面。树突状细胞免疫受体(DICR)是一个主要表达于树突状细胞上的C型凝集素，是一种跨膜蛋白，其外部有一个碳化化合物结合域，内部有一个传达反馈信号区域，其结构决定DICR在免疫反应中具有调节树突状细胞调作用[7-8]。在基因敲除小鼠试验中证实，DICR在自身免疫性疾病中具有负反馈调节作用[9-10]。本次研究也同样证实，DICR基因在变异型哮喘易感性发生中具有重要联系，变异型哮喘患者DICR基因T型携带者比例更高。因此，对变异型哮喘患者进行基因检测，有助于指导基因调节治疗。

DICR基因位于人体12号染色体p13区域，是树突状细胞表面表达的一类C型凝集素受体，DICR分子结构具有细胞膜外的糖链识别区(CRD)和细胞膜内的酪氨酸依赖的抑制型基序(ITIM)两部分，其ITIM的抑制性结构，可特异性的与酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2结合，从而向细胞内传递抑制性信号，达到下调细胞活性的作用[11-12]。因此，DCIR被认为是细胞内部传达抑制信号的负调节受体。而研究通过2组研究对象DICR基因型比较发现，2组研究对象DICR基因中rs2377422位点T型和C型基因型分布频率显著高于对照组，说明变异型哮喘患者DICR基因中TT型、CC型携带比例更高，提示DICR基因中T型、C型对变异型哮喘的发生具有一定促进作用[13-14]。而2组研究对象DICR基因等位基因分布频率比较发现，DICR基因中rs10840759位点2组研究对象T型和C型等位基因分布频率无明显差异，而在rs10840759位点2组研究对象T型等位基因分布频率存在显著差异，哮喘患者组T型等位基因携带者所占比例(51.92%)显著高于健康者(30.00%)，说明DICR基因中T型等位基因是变异型哮喘易感性发生的独立危险因素，DCIR SNP rs2377422与变异型哮喘发病易感相关。DICR缺失会导致树突状细胞重要调节细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落，从而刺激因子(GM-CSF)的信号表达增强，进而导致树突状细胞过度累积，诱发免疫性疾病[15-17]。而树突状细胞是一种抗原呈递细胞，树突状细胞的异常增殖或激活，会影响自身免疫反应，因此，其表达免疫应答中发挥重要作用[18-19]。另外，经相关性分析显示，DICR基因中基因型(P=0.004，95%CI：0.918～1.025)和等位基因(P=0.015，95%CI：0.923～1.322)与变异型哮喘易感性相关，也证实DICR在免疫疾病中的调节作用。哮喘患者因气道炎症反应导致。机体炎性细胞因子被激活分泌，导致机体免疫反应紊乱，患者免疫力低下，易敏性风险增加，而DICR基因免疫调节可促进患者以免疫力提高，进而一定程度上降低变异型哮喘易感性的发生[20-21]。临床可通过激活DICR抑制树突状细胞过度增殖，为DICR配体治疗药物提供基础。但是，研究中样本对象较少，加上基因表达的个体差异，且DICR基因只是变异型哮喘遗传和免疫研究的一小部分，且遗传机制较为复杂，涉及多个基因，因此还需扩大样本进行进一步深入研究，进一步探究基因多态性在变异性哮喘易感性发生机制的意义，为临床指导治疗提供可靠依据[22-23]。

综上所述，DCIR基因检测，通过深入了解其基因型和等位基因频率的分布和表达情况，找到其基因多态性与变异性哮喘易感性的内在因素，为早期发现和基因调控治疗提供了可能性和参考意义。