431839例临床样本Rh(D，C，E，c，e)血型分型检测结果及分析

王晓宁，程 野，钟 靖，李凌波

(1.吉林大学第一医院 输血科，吉林 长春130021；2.青岛市市立医院 输血科；3.邵阳市中心医院 输血科；4.长春博迅生物技术有限责任公司)

血型抗原是位于红细胞膜上的多态性抗原，在妊娠期间[胎儿和新生儿溶血性疾病(HDFN)]或输血后[溶血性输血反应(HTRs)]，个体极有可能诱发免疫反应。个体发生同种异体免疫反应的概率取决于人群中抗原的发生率(已知不同人群和种族群体之间存在差异)[1]，也取决于其免疫原性和患者的免疫状态[2]。输血前检测，最重要的血型系统是ABO和RhD。输入具有除D抗原外未知Rh表型的ABO同型血可能会导致同种免疫，特别是对于多次输血的病人[3]。因此，了解临床待输血患者中红细胞Rh抗原表型分布有助于我们评估这些表型的频率，从而建立一个红细胞抗原的供体数据库。此外，立即为免疫病人提供抗原阴性血液，以及预防多次输血病人出现同种免疫也是有益的。本研究分析了431839例临床样本Rh(D，C，E，c，e)血型分型检测结果，并探讨输血前进行Rh(D，C，E，c，e)血型分型的重要性及微柱凝胶免疫分析技术在Rh血型抗原检测中的作用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本来源临床医院需要输血的手术患者、非手术患者、孕妇、部分新生儿血液标本共431839例，其中男231652例，女200187例，年龄0天-91岁。

1.2 试剂与仪器Rh血型抗原检测卡(单克隆抗体)，长春博迅生物技术有限责任公司生产，每卡6孔。TD-3A型血型血清学用离心机，由长春博研医学生物仪器公司生产。

1.3 方法采集被检对象静脉血，加入含EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的试管中。将采集的标本配制成0.8%红细胞生理盐水悬液。将Rh血型抗原检测卡(单克隆抗体)做标记，将待检者0.8%红细胞悬液分别加入第1- 6支微管中(第1-5支微管分别含有IgM单克隆抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗体，第6支微管为中性胶做阴性对照)，每管50 μl。使用专用离心机离心5 min，900 rpm 2 min，1 500 rpm 3 min，取出，根据试剂说明书，判定结果。

1.4 统计方法Rh血型表现型依照AABB 19版表达方式；抗原频率计算为该抗原阳性例数与统计总例数之比。

2 结果

2.1 样本Rh血型系统5种主要抗原检测结果应用微柱凝胶Rh血型抗原检测卡对431839例临床样本进行Rh血型系统5种主要抗原的检测，测得Rh(D)阳性428298例(99.18%)，阴性3541例(0.82%)。在Rh(D)阳性中，测得Rh血型抗原表现型共10种，结果见表1。

表1 428298例Rh(D)阳性患者血型表型分布

2.2 Rh(D)阳性样本C、c、E、e抗原分布及百分率428298例Rh(D)阳性患者C、c、E、e抗原分布见表2。患者4种抗原(C、c、E、e)阳性所占百分率由高到低依次为e>C>c>E。

表2 428298例Rh(D)阳性患者C、c、E、e抗原分布及与国内报道[4]数据比较

3 讨论

Rh血型系统的ISBT的命名是RH，系统编号004，目前确认系统抗原55个(http://www.isbtweb.org/fileadmin/user_upload/Table_of_blood_group_antigens_within_systems_v9.0_03-FEB-2021.pdf)。RH抗原的基因位点在1号染色体短臂3区6带(1p36.11)，由两个独立的基因构成：RHD/RHCE[5]。RHD基因与RHCE基因高度同源，高度相似，二者都是从RHAG(030血型系统)基因突变进化而来，在漫长时间的生物进化过程中，RHAG基因先形成RHCE基因，然后再形成RHD基因，RHD基因与RHCE基因的核苷酸有约98.6%相同[6]。不同的RHD/CE基因在不同人群中的分布不一致，而且基因突变的情况也不一样。所以，RH系统的各个抗原在各人群中表达也不一样，一般情况是：D基因的频率依次为：黄种人>黑种人>白种人；C基因的频率依次为：黄种人>白种人>黑种人；E基因的频率依次为：黄种人>白种人>黑种人，CDe单倍型频率依次为：黄种人>白种人>黑种人；cDE单倍型频率依次为：黄种人>白种人>黑种人；CDE单倍型频率依次为：黄种人>白种人>黑种人；cde单倍型频率依次为：白种人>黑种人>黄种人[7]。在中国人中，以CDe单倍型频率最高，单基因频率为C>c，e>E[8]。在人类学上，中国人属于蒙古人种，在蒙古人种中的调查，无论南方蒙古人种，还是北方蒙古人种，RHD/CE基因分布没有太大差异。

常见的Rh抗原为:D、C、c、E、e最初是按字母顺序写的(如CDE)，后来，当发现C抗原和E抗原是整体遗传时，已更改为DCE[6]。5 种抗原的抗原性强弱依次为D>E>C>c>e，因此，临床上一次随机输血产生抗-E 的机会要比抗D大，多次输血的患者易产生抗-E，而导致溶血。因为Rh血型系统的抗原抗体复杂性，及引起的溶血性输血反应和HDN，输血时要做好Rh血型分型，做到同型相输，避免免疫性抗体产生而造成不良输血反应。本研究检测了431839例临床样本Rh(D，C，E，c，e)血型抗原检测结果，431839例患者共检出Rh(D)阳性428298例(99.18%)，阴性3541例(0.82%)。在Rh(D)阳性中，Rh血型抗原表现型分布由高到低DCe(178541例)>DCcEe(154113例)>DCce(38816例)>DcE(35478例)>DcEe(16067例)>DCEe(2820例)>Dce(1525例)>DCcE(914例)>DCE(22例)>D----(2例)，C、c、E、e抗原频率分别为87.61%、57.65%、48.89%、91.50%，Rh(D)阳性患者C、c、E、e抗原分布及与国内报道数据接近[4]。鉴于Rh系统的5种主要抗原均具有很强的免疫原性，在临床上均可导致溶血性输血反应等疾病，因此，同预防抗-D一样，可考虑输血前对患者和献血者常规检测Rh系统其他主要抗原，对二者Rh血型抗原准确分型，甚至建立一个红细胞抗原的供者数据库，以实现ABO、Rh系统的相容性输血，由此也可以避免临床实践中因为Rh系统抗原不明引起的反复交叉配血不合造成的贻误输血时机，及时挽救患者生命。

微柱凝胶试验作为一种新型免疫学检测方法，近年来随着该技术的发展其在输血领域应用的范围不断扩大。此技术的本质是血凝试验，即将分子排阻层析原理应用于血型血清学检测，利用凝胶分子筛的滤过作用使红细胞抗原抗体在微柱腔内的凝胶介质中发生肉眼可见的免疫凝集反应。该方法结果清楚、易于判断且保存时间长，目前在检测致敏红细胞、交叉配血、血型鉴定和检测不规则抗体等方面已相继得到临床广泛应用[9]，其操作规范、简单快捷，检测不完全抗体省去了洗涤步骤，有效避免了人为误差。随着微柱凝胶试验检测Rh血型抗原技术的日臻成熟，国内亦有将利用此技术的国产检测卡应用于临床试验并取得了满意度较高的检测结果[10]。本研究应用微柱凝胶免疫分析技术对431839例待输血患者进行Rh血型系统5种主要抗原的检测，将所得数据与国内报道相比较得出了较一致的结论，说明该技术反应稳定、特异性较好，为临床常规检测Rh血型抗原以保证输血安全提供了简单易行的方法。