Rh 血型中同种抗体和类同种自身抗体的血清学特征及交叉配血

李占伟，张琳，韩丹

（1.河南科技大学第一附属医院输血科，河南 洛阳 471000；2.洛阳中和医院检验科，河南 洛阳 471000；3.河南省正骨医院检验科，河南 洛阳 471000）

Rh 血型系统较为复杂，是除ABO 血型系统之外最重要的血型系统。 Rh 抗原为温自身抗体最多见的靶抗原，这些含有Rh 特异性自身抗体会导致自身免疫性溶血性贫血 (autoimmune hemolytic anemia,AIHA)，想要明确患者红细胞和血清中的这种特异性自身抗体则需要将Rh 表型细胞进行吸收放散试验[1-4]。 若一个呈活动性溶血持续状态患者的自身抗体对应一个清晰特异性的单一抗原，那么此患者便该采用缺乏此抗原的血液进行输血治疗，这种血液中的红细胞寿命比患者自身血液红细胞的寿命更长，若无明确证据表明输入此特异抗原血液会导致溶血或减少红细胞生存期，那么可忽略自身抗体的特异性[5-7]。 本研究对一例既有类同种自身抗体又有同种抗体的患者进行了血清抗体筛查与鉴定，研究报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 患者年龄74岁，男性，因乏力、头晕入院，入院诊断为胃癌，入院后因患部持续活动性出血，曾进行多次输血治疗。 2018年6月4 日因交叉配血过程中主侧及次侧凝集，于是对患者血液进行意外抗体鉴定与交叉配血。

1.2 血清学检查 EDTA 、LISS 放散液、单克隆抗-A 和抗-B（上海科华生物工程股份有限公司，生产批号20161107），抗-D、抗-C、抗-e、抗-E、抗-c、抗-IgG、抗-C3d 抗人球蛋白试剂（上海羽朵有限公司，生产批号：20161804、20163001、20163401、20163201、20165102、20165202、20165332）、 微柱凝胶广谱抗人球蛋白卡、谱细胞（上海羽朵有限公司，生产批号：20170101、20170912）、反定型红细胞试剂盒（北京东西仪有限公司，生产批号:20170921）、筛选细胞（上海酶联有限公司，生产批号：20170410）、聚凝胺介质试剂（上海翊圣有限公司，生产批号：116013）、血库离心机（奥豪斯国际贸易有限公司，型号KH19A）。

1.3 血型鉴定与直抗蛋白试验 将红细胞采用盐水洗涤三次后制作为2%红细胞悬液，并采用试管法进行检测分析。

1.4 抗体筛选与抗体鉴定 将抗体分别用试管法抗球蛋白法和聚凝胺法进行检测，并将筛选细胞按照微柱凝胶广谱抗球蛋白卡、 试管法离心以及凝聚胺法检测。

1.6 吸收放散试验 吸收试验：以添加LISS 增强的方法进行，将1ml 血清、低离子液与0.5ml 压积红细胞（O 型Rh 分型ccDEE）充分混匀后在37℃下孵育20min 后进行第一次吸收，离心后取上液，再加0.5ml 浓缩红细胞（O 型Rh 分型ccDEE）充分混匀在37℃下孵育20min 后进行第二次吸收分离上层清液待用。 放散实验：红细胞6 次洗涤后配置为浓缩红细胞，同时加入甘氨酸-盐酸/EDTA 放散，并取1ml 放散液待用。

1.7 吸收后血清和放散液抗体鉴定 采用试管法盐水离心、 微柱凝胶广谱抗人球蛋白卡分别对吸收后血清和放散液试管法室进行抗体鉴定。

1.8 交叉配血试验 筛选出B 型ccDEE 的悬浮红细胞3 份，采取盐水离心、微柱凝胶广谱抗球蛋白卡、抗球蛋白法分别与患者进行交叉配血试验。

2 结果

2.1 ABO 血型、Rh 血型鉴定及直接抗球蛋白试验（DTA） 正定型显示为B 型，反定型显示Bc 及Oc出现凝集，自身对照显示呈阴性，Rh 表型为ccDEE，但与抗-C 及抗-e 试剂出现混合视野；DAT检测显示患者红细胞与抗-IgG 弱凝集，与抗-C3d出现混合视野。

2.2 抗体筛选及抗体鉴定 盐水试管法结果表明筛选细胞Ⅰ与血清未出现凝集，与Ⅱ、Ⅲ凝集；抗体的反应性在37℃下以盐水试管法孵育15min 后增强； 经典抗球蛋白法结果表明筛选细胞Ⅰ与血清未发生凝集，血清与筛选细胞Ⅱ及Ⅲ出现凝集；聚凝胺法结果表明血清与筛选细胞未发生凝集，筛选细胞Ⅰ凝集弱于Ⅱ及Ⅲ。 抗体鉴定结果：试管法盐水直接离心，血清与Ce 阴性及e 杂合子谱细胞未发生凝集，血清与Ce、e 纯合子出现凝集，出现抗-C、e 特异性，血清与e 阳性C 阴性细胞的凝集弱于C 阳性细胞； 微柱凝胶广谱抗球蛋白卡中血清未与谱细胞发生凝集，但凝集强度差异显著:e 阴性细胞＜e 阳性细胞，出现类似抗-e 特异性，且与e 杂合子的凝集弱于e 纯合子。

2.3 吸收后血清和放散液抗体鉴定 血清抗体鉴定：试管法盐水离心后，谱细胞及血清显示出抗-C、e 特异性；微柱凝胶广谱抗球蛋白卡中与1、2 号谱细胞出现凝集，与原血清凝集度相比有明显减弱，与e 阳性细胞反应强度未减，抗-e 特异性的越明显，未发生剂量效应。 放散液抗体鉴定：与谱细胞在试管法盐水离心后，未出现凝集；微柱凝胶广谱抗球蛋白卡中与谱细胞未出现凝集，但与e 阴性细胞反应明显弱于e 阳性细胞，出现类似抗-e特异性。

2.4 交叉配血试验结果 主侧: 盐水离心及经典抗球蛋白试验中未出现凝集及溶血反应，微柱凝胶广谱抗球蛋白卡中出现微弱凝集但无溶血反应出现，并且与1、2 号谱细胞的凝集强度相同。 次侧:盐水离心试验中未出现凝集反应及溶血反应，经典抗球蛋白试验、 微柱凝胶广谱抗人球蛋白卡中出现微弱凝集反应。 对供血者进行意外抗体鉴定，结果呈阴性。

2.5 患者输血过程及输血后状况 患者输血过程顺利，未见发热及其他不良输血反应。 输血后复查血常规，血红蛋白含量较前有明显提升，患者头晕无力等临床症状明显改善； 远期监测患者输血效果，血红蛋白量未见明显波动，监测胆红素水平、及尿常规与输血前无明显变化，提示给予鉴定抗体后筛选对应红细胞输注无免疫因素导致的溶血，输血成功。

3 讨论

Rh 血型系统患者可能会在输血及妊娠的过程中产生不规则抗体，常有特异性同种抗体及无特异性的自身抗体，但近年来有研究表明，除同种抗体及自身抗体之外还可出现一种类同种自身抗体，这类抗体既具有特异性的针对相应红细胞上的某种血型抗原同种抗体的性质，同时又具有自身抗体的性质，特异性抗原阴性的红细胞还可对这类抗体进行吸收[8-11]。 张秋会[12]等人研究发现，196 例自身免疫性溶血性贫血（Autoimmune hemolytic anemia，AIHA）患者中检查出类同种特异性自身抗体45 例占23.0%(45/196)，类同种特异性自身抗体中,Rh 血型系统抗原占77.8% (35/45)，AIHA 患者中出现类同种特异性自身抗体的情况相当多见，大部分见于抗Rh 抗原，少部分见于Kidd 及Duff 抗原。

表1 ABO 血型、Rh 血型鉴定及DTA 试验

表2 抗体筛选结果

表3 吸收后血清和放散液抗体鉴定对照表

本研究中该患者血清中出现了IgM 类的抗-C、e，经过RhcE 纯合子细胞吸收后出现IgG 类的抗-e ；放散液中又出现了IgG 类的抗-e 显然符合同种抗体的血清学特性与类同种自身抗体的特征血清学特性。 血清用RhCe 的特异性抗原细胞在37℃温度下吸收后，不被吸收的为同种抗体，能被吸收的为类同种自身抗体,且类同种自身抗体在放散液中仍呈现出 “类似” 抗-e 的特异性，这是抗-e为同种抗体或类同种自身抗体的区分关键[13-16]。 本研究利用LISS 增强了抗体吸收，吸收后e 阳性细胞反应强度未减，抗-e 特异性的越明显，且放散液中也检测出抗-e 类同种自身抗体。 本研究最终以盐水离心法及经典抗球法的结果作为交叉配血的判断依据，为了规避患者血清中抗-C、e 同种抗体带来的风险，选用了选择B 型ccDEE 的血液对患者进行输血治疗，患者输血后并无溶血反应出现。临床输血前的血型鉴定和交叉配血试验若出现异常，应对不规则抗体产生的原因全面分析与检测，避免类同种抗体的无法检出,针对具有类同种自身抗体的患者应采用同种抗体配血的方法，选择缺乏血型抗原的红细胞输血，确保输血安全性[17-20]。

综上所述： 对于同时具有同种抗体及类同种抗体对患者采用红细胞Rh 表型、直接抗球蛋白试验以及放散液抗体特异性分析，可更好区分出抗体类型。