离子色谱法测定妥布霉素地塞米松滴眼液中依地酸二钠含量

姚晶晶，匡 钊，丁苏苏

（江苏省扬州市食品药品检验检测中心，江苏 扬州 225001）

妥布霉素地塞米松滴眼液为混悬复方制剂，具有抗菌作用，主要用于治疗眼睑、球结膜、角膜及眼球前段组织病变［1］。滴眼液处方中加入依地酸二钠（EDTA-2Na）作为螯合剂，可增强其稳定性［2-4］，但过量使用依地酸二钠会造成混悬滴眼液结块，影响疗效。依地酸二钠的测定方法主要包括衍生化高效液相色谱法和离子色谱法［5-6］。衍生化高效液相色谱法需加入金属离子络合，干扰因素多；而离子色谱法常用于检测无机离子和有机小分子离子，具有操作简便、灵敏度高、专属性好、分析准确可靠等优势，广泛用于药物质量控制［7-10］。本研究中采用抑制性离子色谱系统测定依地酸二钠阴离子，为控制妥布霉素地塞米松滴眼液中依地酸二钠的用量提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Thermo ICS-5000+型离子色谱仪（赛默飞世尔科技＜中国＞公司）；Milli-Q IQ 7000 型超纯水系统（德国Merck Millipore 公司）；XS205DU 型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度为0.01 mg）；KH-400KDB型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；ARES 500 型抑制器（4 mm，美国Dionex 公司）。

1.2 试药

依地酸二钠对照品（曼哈格检测技术股份有限公司，批号为C0006654，含量为99.9%）；妥布霉素地塞米松滴眼液（厂家A，批号分别为190503，190817；厂家B，批号为J 190709；厂家C，批号为19D30BA）；氢氧化钾溶液（美国Dionex 公司）；苯扎溴铵对照品（中国食品药品检定研究院，批号为135051 -201401，含量为10.9 mg／mL）；氯化钠、亚硫酸二钠、硫酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钠均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

阴离子色谱柱：Dionex IonPacTMAS11-HC 分析柱（250 mm×4 mm）；Dionex IonPacTMAG11-HC 保护柱（50 mm×4 mm）；淋洗液：含30 mmol／L 的氢氧化钾溶液；流速：1.0 mL／min；电导检测器：ASRS-ULTRA 抑制模式，抑制电流为75 mA；检测池温度：25 ℃；进样量：25 μL。

2.2 溶液制备

1.EDTA2- 2.Cl- 3.SO32- 4.SO42- 5.Br- 6.NO3- 7.PO43-图1 系统适用性试验离子色谱图1.EDTA2- 2.Cl - 3.SO32- 4.SO42- 5.Br - 6.NO3- 7.PO43-Fig.1 Ion chromatogram of the system suitability test

取依地酸二钠对照品37.22 mg，精密称定，置25 mL 容量瓶中，加水定容，即得对照品溶液。精密量取样品（厂家A）1 mL，置50 mL 容量瓶中，加水定容，摇匀，即得供试品溶液A；精密量取样品（厂家B、厂家C）各1 mL，分别置10 mL 容量瓶中，加水定容，摇匀，即得供试品溶液B，C。取氯化钠29.21 mg，亚硫酸二钠25.20 mg，硫酸钠14.17 mg，依地酸二钠27.22 mg，硝酸钾20.25 mg，磷酸氢二钠27.60 mg，精密称定，分别置25 mL 容量瓶中，加水定容，精密量取上述溶液各0.25 mL，苯扎溴铵对照品0.1 mL，置20 mL 容量瓶中，加水定容，即得质量浓度为5～100 mg／L 的系统适用性试验用混合溶液。以水为空白溶剂。

2.3 方法学考察

系统适用性试验和专属性试验：取2.2 项下混合溶液25 μL，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，各阴离子理论板数均＞2 000，分离度均≥1.5，相互间分离良好，详见图1。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处有相应峰出现，且空白溶剂对测定结果无干扰。详见图2。

线性关系考察：取2.2 项下对照品溶液75，100，200 μL 及0.5，1.0，1.5 mL，分别置20 mL 容量瓶中，用水定容，摇匀，即得质量浓度分别为5.58，7.44，14.89，37.22，74.44，111.66mg／L 的系列对照品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以依地酸二钠质量浓度（X，mg／L）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y ＝0.049 6 X-0.005 0（r ＝0.999 9，n ＝6）。结果 表 明，依 地 酸 二 钠 质 量 浓 度 在5.58～111.66 mg／L 范围内与峰面积线性关系良好。

1.依地酸二钠A.空白溶剂 B.对照品溶液 C.供试品溶液图2 专属性试验离子色谱图1.disodium edetateA.Blank solvent B.Reference solution C.Test solutionFig.2 Ion chromatograms of the specificity test

定量限考察：取依地酸二钠对照品溶液（质量浓度为5.58 mg／L），用水逐级稀释，并按2.1 项下色谱条件进样测定，以信噪比（S／ N）为10 ∶1 时计算定量限。结果定量限为23.25 ng。

精密度试验：取2.2 项下对照品溶液，按2.1 项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果依地酸二钠峰面积的RSD 为0.84%（n ＝6 ），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2 项下对照品溶液，分别于室温下放置0，2，4，8，12，24，48 h 时按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果依地酸二钠峰面积的RSD 为1.31%（n ＝7），表明对照品溶液在室温下放置48 h 内稳定性良好。

重复性试验：取样品（批号为190817）适量，共6 份，依法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果依地酸二钠的平均含量为0.968 7 mg／mL，RSD 为1.40%（n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取已知含量的样品（批号为190817）2.5 mL，置100 mL 容量瓶中，共9 份，分别精密加入对照品溶液1.0，1.5，2.0 mL，各3 份，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n ＝9）Tab.1 Results of the recovery test（n ＝9）

2.4 样品含量测定

取4 批样品各适量，分别按2.2 项下方法制备供试品溶液，再按2.1 项下色谱条件进样测定，每批样品测定2 份，记录峰面积，并计算样品含量。结果批号为190503，190817，J190709，19D30BA 样品中依地酸二钠含量分别为0.876 0，0.968 7，0.257 1，0.120 9 mg／mL。

3 讨论

妥布霉素地塞米松滴眼液常见辅料包括依地酸二钠、氯化钠、硫酸钠、苯扎溴铵，考虑到上述辅料中Cl-，Br-，SO42-等离子可能干扰依地酸二钠含量测定，故本研究中对上述离子进行考察。结果表明，妥布霉素地塞米松滴眼液中其他离子对依地酸二钠含量测定均无干扰。

依地酸二钠在离子色谱柱中保留能力弱，选用Dionex IonPacTMAS11-HC 分析柱和氢氧化钾淋洗液，可使依地酸二钠较快出峰，为了更好地分离依地酸二钠与常规阴离子，本研究中在1.0～1.5 mL／min 范围内改变淋洗液流速，考察流速对依地酸二钠含量测定的影响。结果，流速变化对依地酸二钠与其他离子的分离度影响不明显；再将淋洗液氢氧化钾质量浓度从20 mmol／L调至30 mmol／L，使各阴离子间的分离度得到了改善。依地酸二钠在工艺处方中常用作稳定剂［11-13］，可提高药物的稳定性，但不同厂家的用量差异较大，依地酸二钠的安全用量有待进一步研究。