α位双取代氯甲基萘同分异构体的分离和检测

张 丽，刘发贵，王东旭，刘思光，李铁健，张贵民

（1. 山东新时代药业有限公司，山东 临沂 273400；2. 鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276002）

1-氯甲基萘是一种无色油状液体，被广泛用作表面活性剂、减水剂、分散剂、原料药的有机合成原料，其结构见图1[1]。由于生产工艺的不同，1-氯甲基萘中可能存在α位的双取代化合物。以1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘为例，4号位置与5号位置同属α位，使两者的物理化学性质十分接近。通过检索“ChemSpider”网站数据库，1, 5-二氯甲基萘（CAS号：1733-76-2）与1, 4-二氯甲基萘（CAS号：6586-89-6）物理化学特性除沸点和闪点存在细微区别外，其余均一致。两者化学结构见图1。

图1 氯甲基萘系列化合物结构

目前未检索到关于这两种化合物或类似位置双取代异构体分析检测的文献，仅有关于单取代或α位和β位双取代化合物检测的报道[2-7]。本研究建立了1-氯甲基萘中1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的检测方法，可为其类似α位或β位双取代异构体的分离检测提供参考。

1 仪器和材料

1.1 仪器

Waters HPLC e2695（美国沃特世公司），配备柱温箱，PDA检测器；XPR10型电子分析天平（Mettler Toledo公司）；MS205DU型电子分析天平（Mettler Toledo公司）；以硅胶表面涂敷纤维素-三（4-甲基苯甲酸酯）为填充剂的CHIRALCEL®OJ-RH色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）。

1.2 试药

1, 4-二氯甲基萘对照品（美国STD，批号：2085609B-SL-01）；1, 5-二氯甲基萘对照品（美国STD，批号：19856010B-SL-01）；1-氯甲基萘（安耐吉化学，批号：RQR2RKE2，RDR6DDH2）；甲醇为色谱级，乙腈为色谱级。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

空白溶剂为乙腈-水（80:20）；分别称取1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘各约2 mg，置10 ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为两者的对照品储备液；分别精密量取上述两种对照品储备液各1 ml，置同一10 ml量瓶中，溶剂稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。精密量取1-氯甲基萘10 μl，置10 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2 色谱条件

考虑到1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的化学性质，首先选用具有代表性的3种不同类型的常规反相色谱柱，包括C18色谱柱（Phenomenex Kinetex XB-C18，4.6 mm×100 mm，2.6 μm）、苯基色谱柱（Phenomenex Kinetex Biphenyl，4.6 mm×100 mm，2.6 μm）和五氟苯基色谱柱（YMC Triart PFP，4.6 mm×250 mm，5 μm），分离效果见图2A～C。由图2A～C可见，两者完全重合，未见任何分离趋势。再次选用3种手性色谱柱，包括CHIRALPAK®AS-RH、CHIRALPAK®AD-RH和CHIRALCEL®OJ-RH（规格均为4.6 mm×150 mm，5 μm），分离效果见图2D～F。由图2D～F可见，AD-RH色谱柱无法使1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘分离，AS-RH色谱柱分离效果明显不如OJ-RH色谱柱。综上，选用以下色谱条件。色谱柱：CHIRALCEL®OJ-RH（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（87:13）；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ℃；检测器：PDA（电二极管阵列检测器）；扫描范围：200～400 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。

图2 色谱柱的筛选结果

2.3 检测波长的确定

利用PDA检测器的全波长扫描功能，得到1-氯甲基萘、1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的紫外扫描图，见图3。由图3可见，三者均为较好的末端吸收，且在285 nm附近存在最大吸收，故暂定检测波长为285 nm。

图3 1-氯甲基萘、1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘紫外吸收光谱

2.4 方法学验证

2.4.1 专属性 分别取空白溶剂，1, 4-二氯甲基萘、1, 5二氯甲基萘和供试品溶液，进样分析，结果空白溶剂对两者检测无干扰，1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘分离良好，见图3。

2.4.2 检测限和定量限 分别取2.1项下1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘对照品储备液，用溶剂逐步稀释，得到两者信噪比约为3的检测限溶液，信噪比约为10的定量限溶液。结果表明，1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘的检测限分别为0.922，1.506 μg/ml，定量限分别为2.765，4.518 μg/ml。

2.4.3 线性与范围 分别取2.1项下1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘对照品储备液各0.2，0.6，0.8，1.0，1.2，1.5，2.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，得两者的浓度梯度线性溶液，进样分析，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制线性回归方程。1, 4-二氯甲基萘在2.765～46.080 μg/ml范围内，回归方程为A=18 865.88C-2137.88，r=1.0000；1, 5-二氯甲基萘在4.518～45.180 μg/ml浓度范围内，回归方程为A=18 717.74C-3881.22，r=1.0000。

2.4.4 回收率 按2.1项下方法，分别配制1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘浓度均为20 μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液；配制1-氯甲基萘浓度为20 mg/ml的溶液，作为供试品溶液；配制含1-氯甲基萘20 mg/ml，1, 4-二氯甲萘和1, 5-二氯甲基萘浓度均为20 μg/ml的混合溶液，作为100 %加标溶液。同法配制含1-氯甲基萘20 mg/ml，1, 4-二氯甲萘和1, 5-二氯甲基萘浓度均为16 μg/ml的混合溶液，作为80 %加标溶液；含1-氯甲基萘20 mg/ml，1, 4-二氯甲萘和1, 5-二氯甲基萘浓度均为24 μg/ml的混合溶液，作为120 %加标溶液。取以上溶液，进样分析，结果1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘平均回收率分别为95.34 %，101.74 %，RSD分别为1.4 %，1.3 %，表明本法的准确度良好，符合要求，具体结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.4.5 耐用性 按2.1项下方法，分别配制1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘浓度均为20 μg/ml的混合对照品溶液，1-氯甲基萘浓度为20 mg/ml的供试品溶液， 1-氯甲基萘浓度为20 mg/ml、1, 4-二氯甲萘和1,5-二氯甲基萘浓度均为20 μg/ml的混合溶液（加标溶液）。分别于标准条件及分别改变波长（±5 nm）、流速（±0.1 ml/min）、柱温（±5 ℃）及流动相中甲醇-水的比例（±2 %）的条件下，取以上溶液进样分析，1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘两者分离度良好，平均回收率分别为94.13 %，98.31 %，RSD分别为3.4 %，1.8 %，表明本法的耐用性良好，符合要求。

3 讨论

1-氯甲基萘作为重要的工业原料，用途广泛，在某些特定情况下，对其纯度要求较高。分析1-氯甲基萘的生产工艺[8]，杂质最大可能是不同取代位置或取代基不同的物质，其中大部分均可通过普通的分离分析方法即可实现检测。但以1, 4-二氯甲基萘和1, 5-二氯甲基萘为代表的类似α位或β位双取代的异构体检测，国内外尚未有报道，本研究为此类化合物的检测提供了良好的参考依据。

本法采用手性色谱柱进行分离，流动相采用甲醇和水，普通高效液相色谱仪进行分析。方法准确、操作简单快捷，可应用于1, 4-二氯甲基萘和1,5-二氯甲基萘及其类似物的分离分析。同时由3种物质的全波长自外紫外扫描图可知，方法中检测波长采用285 nm，如果更改为靠近末端吸收的检测波长，可有效增加方法的检测灵敏度，这有待进一步研究。