基于全国中药资源普查的益母草药材质 量 分 析*

周 颖，唐登峰，张文婷，毛思浩，马临科，昝 珂

（1.浙江省食品药品检验研究院/国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，浙江 杭州310052；2.中国食品药品检定研究院，北京102629）

益母草又名茺蔚，为唇形科植物益母草Leonurus japonicas Houtt.的新鲜或干燥地上部分，具有活血调经、利尿消肿、清热解毒的功效，是临床常用的妇科良药[1]。益母草在全国大部分地区均有分布，主产江苏、福建、广东、广西、贵州、云南、四川等地[2]。益母草主要化学成分有生物碱类、二萜类、黄酮类、苯丙醇苷类、环烯醚萜类、香豆素及木脂素[3]，并含有锰、铁、硒、锌等多种微量元素[4]，其中益母草碱和盐酸水苏碱是益母草药材中主要的活性成分[5-6]。

国家于2013年启动了第四次中药资源普查项目，对全国的中药资源进行系统梳理，益母草因土壤、水分、光照强度和物候等因素的影响，导致其质量参差不齐[7-9]。为科学地评价益母草质量状况，依照2015年版《中华人民共和国药典》一部益母草项下方法，对本次全国中药资源普查中采集的益母草药材进行了检验，并对质量进行分析与评价，针对发现的问题，通过探索性研究寻找对策，为该药的质量监管提供科学依据。

1 仪器与试剂

戴安Ultimate3000超高效液相色谱仪（美国Thermo Fisher公司，配置SRD-3600真空在线脱气机，DGP-3600双三元梯度泵，WPS-3000TRS自动进样仪，TCC-3000RS柱温箱，DAD-3000RS二极管阵列检测器，VWD-3400RS可变波长检测器，Chromeleon 7.2 SR5色谱工作站）；LC-20A 1200型高效液相色谱仪（美国Agilent，配制G1322A真空在线脱气机，G1311A四元梯度泵，G1329B自动进样仪，G1316柱温箱，G1314B可变波长检测器）；ELSD 2000ES蒸发光散射检测器（美国Alltech公司）；DHG-9140恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；XPE-2015型电子天平[d=0.01 mg，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Mili-Q去离子水发生器（美国Milipore公司）。

盐酸水苏碱对照品（批号：110712-201513）、盐酸益母草碱对照品（批号：111823-201202）（中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯，Sigma公司）；辛烷磺酸钠（批号：201303401，山东禹王实业有限公司化工分公司）；冰醋酸、磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；实验用水为超纯水。检测样品由中国中医科学院中药资源中心提供，采集时间为2012年5月至2014年7月，源于全国10个省市共82批次。

2 方 法

2.1 普查方法 针对我国中药领域一直存在“家底”不清、资源动态不明等问题，国家开展了第四次全国中药资源普查工作。通过调查代表性区域的药用资源的分布等信息，制订出样品采集要求。（1）采集地点：本次普查以区域为单元，对区域内所有中药资源（野生和栽培）进行调查，益母草属于一般品种药材，在普查区域内遇到即采集；（2）采集数量：每份益母草样品要求来源10个植株以上，每份药材一般500 g；（3）采集时间：益母草全草均可用药，而全草多在植物充分生长时采集；（4）采集后处理：通过晒干或烘干方式对样品进行干燥；（5）样品保存：在保证益母草充分干燥的情况下，进行真空包装，确保不漏气，经过冷冻杀菌，并在包装箱内添加适量樟脑，同时控制贮藏温湿度，以确保样品尽可能减少变质现象[10-11]。

本次资源普查的82批次的益母草样品中，采集区域涉及到全国10个省市自治区，具有一定的代表性。资源普查信息显示2批来源为细叶益母草（Leonurussibiricus L），1批来源为鬃尾草状益母草（Leonuruschaituroides C.Y.），其余均为益母草（Leonurus japonicus Houtt.）。采集部位为地上部分的有69批次，全草有11批次，标明茎叶的1批次，标明其他的为1批次，本次抽样的82批次样品均为干品。采集时间段主要集中在6—9月，见表1～2。中药资源普查工作的重点在于中药材的资源种类、分布等相关信息，解决中药材的“量”的问题，对于中药材“质”的问题，则需要进一步对普查样品开展大量的性状、有效成分等的检测分析工作，为科学严谨制修订《中华人民共和国药典》提供数据支撑。

表1 益母草药材采集时间与批次情况

表2 益母草药材采集地与批次情况

2.2 检验方法 按2015年版《中华人民共和国药典》一部检验，主要检验项目有[性状]、[鉴别]（显微鉴别、薄层色谱鉴别）、[检查]（水分）、[浸出物]、[含量测定]（盐酸水苏碱、盐酸益母草碱）。82批益母草样品有41批不合格[不合格率为50.00%（41/82）]，不合格样品涉及8个省。

3 结果分析

3.1 品种混乱问题 本次收集的82批益母草，按2015年版《中华人民共和国药典》一部进行检验，有8批样品性状不符合规定，此8批经鉴别为夏至草。益母草茎表面灰绿色或黄绿色；体轻，质韧，断面中部有髓。叶片灰绿色，多皱缩、破碎，易脱。轮伞花序腋生，小花淡紫色，花萼筒状，花冠二唇形[1]。夏至草为唇形科植物夏至草Lagopsissupine(Steph.)Ik.-Gal.的全草[2]。夏至草和益母草是同科不同属的两种植物，目前云南、甘肃、四川仍称夏至草为白花益母草，河北、山东也以此混充益母草入药[12-13]。本次采收的部分批次性状为不规则段，茎方形，断面中空，表面黄绿色被有细毛，苞片呈刚毛状，花萼外面备有细毛[14]，以上特征和夏至草的描述相符合，鉴定为夏至草。益母草与夏至草性状特征见图1。

图1 益母草与夏至草性状特征图

从性状上看，益母草与夏至草性状不同，很容易区分，但在抽样过程中仍有混淆品存在，推测可能与其药材基原有关。经文献考证，二者在古代共同作为茺蔚入药。茺蔚始载于《神农本草经》。因夏至草和益母草在花色、花期上明显不同,三四月夏至草开花，而益母草茎部分还未长出。本草中正式记载益母草花色是在李时珍的《本草纲目》：“四五月间，穗内开小花，红紫色，亦有微白色，其草生时有臭气，夏至后即枯，其根白色……白者能入气分，红者能入血分，别而用之可也。”[15]这里茺蔚中白花者是夏至草，紫花者为益母草。夏至草在历代本草中列于茺蔚项下，是作为茺蔚的一种来应用的，直到清代以后才将茺蔚明确分为两种[16-17]。可见夏至草为益母草的混淆品种，历史悠久，然而除性状可以区分外，二者化学成分、药理作用各异。夏至草主要化学成分为半日花烷型二萜类、黄酮及黄酮苷类、苯丙素苷类化合物[18]，而生物碱一直被认为是益母草的有效成分，常作为质控指标[19]；在生物活性方面，一方面夏至草作为中药使用具有活血祛瘀的功效，与益母草的活血祛瘀功效成分半日花烷型二萜类是吻合的，半日花烷型二萜类化合物已证明具有抗凝、抗血小板聚集、消炎止痛等生物活性[20]；另一方面，益母草的有效成分生物碱有其独特的药理活性，是夏至草无法取代的。文献已报道益母草总生物碱可以显著缓解缩宫素引起的大鼠子宫强烈收缩作用，且表现一定的量效关系[21]。夏至草虽与益母草为同科植物，但不具有益母草的上述功效。另外《本草纲目》“白者能入气分，红者能入血分，别而用之可也”，也说明二者功效有别。因此益母草和夏至草虽有相似之处，但并不相同，不可混淆使用或代益母草药用，而应仔细鉴别，正确应用。

3.2 采收期不符问题 通过对82批次的样品开展水溶性浸出物测定检验，共有14批次样品低于限度（限度为不得少于15.0%），不合格率为17.07%（14/82）。通过分析不合格的样品性状，发现其大多已经过了花盛期，颜色近枯黄色或基本上仅剩茎秆。

通过对82批次的样品开展盐酸水苏碱的含量测定，盐酸水苏碱测定结果范围为0%～3.95%，其中24批次样品低于检出限度（＜0.5%），不合格率为29.27%（24/82），其中11批次样品未检出盐酸水苏碱，典型图谱见图2。

图2 盐酸水苏碱HPLC色谱图

通过对82批次的样品开展盐酸益母草碱的含量测定，盐酸益母草碱测定结果范围为0～0.291%，其中41批次样品低于检出限度（＜0.050%），合格率为50.00%（41/82），除去11批次样品未检出盐酸益母草碱外，盐酸益母草碱平均含量为0.08%，可见目前的限度要求略微偏低。结合不合格的样品性状，发现混淆品夏至草未检出或极少量检出盐酸益母草碱。典型图谱见图3。

图3 盐酸益母草碱HPLC色谱图

运用SPSS25.1软件，对水溶性浸出物、盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量进行相关性分析，盐酸水苏碱与浸出物相关系数为0.812，双侧显著性值P<0.001，表明二者之间呈极显著性正相关，盐酸水苏碱与盐酸益母草碱相关系数为0.540，双侧显著性值P<0.001，二者存在显著性正相关，即从总体水平来看盐酸水苏碱含量随浸出物的上升而上升，盐酸水苏碱含量与盐酸益母草碱含量相关性较大。

4 讨 论

本课题依据2015年版《中华人民共和国药典》一部的方法与限度对本次普查收集的样品进行评价，发现国内益母草药材主要存在两个问题，一是混淆品的存在，二是错过最佳采收时间。本次样品采集过程中9.76%（8/82）为混淆品，说明益母草在种植、采收加工环节缺乏真伪鉴别能力，建议加强对益母草等药材相关知识的宣传与培训，让相关人员了解与掌握益母草的性状，以便与夏至草区别使用。

在益母草资源普查过程中，59.76%（49/82）的益母草样品采收期在7—10月之间，此时已是花盛开之后，茎秆呈枯黄色，使得采集到的样品色泽偏黄或叶片缺失，采收季节已错过《中华人民共和国药典》所要求的茎叶茂盛、花未开或花初开采割的规定，进而导致有效成分含量下降，82批益母草样品有效成分含量见表3。

表3 82批益母草样品2种有效成分含量信息表

通过两种有效成分的含量和水溶性浸出物的相关性分析，特别是盐酸水苏碱与浸出物，说明有效成分盐酸水苏碱的富集与浸出物的结果相关性较大。对于茎叶茂盛的益母草，其浸出物较多，推断益母草药材因其特殊性，受植株特征影响较大。由于我国幅员辽阔，建议采收要求不必描述为“夏季”之类的限定词，可根据植株本身特性进行描述，如“茎叶茂盛、花未开或初开时采割”。