高效液相色谱串联质谱检测神经酰胺水平对心血管事件发生预测价值

刘 岩， 曲 颖， 李斯琪， 刘 兵， 李红帅， 刘艳霞

北部战区总医院 老年医学中心 干二科，辽宁 沈阳 110016

动脉粥样硬化是心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)最常见的病因之一[1]。有研究表明，鞘脂分子可以通过多种不同的机制介导动脉粥样硬化的发生与发展。神经酰胺为一类重要的鞘脂，能够参与维持细胞的正常功能，调节细胞的生长和凋亡，并且与多种心血管危险因素密切相关。已有研究证实，动脉粥样硬化患者的血浆中神经酰胺的水平更高，并且在粥样硬化斑块区域可以分离出含有神经酰胺在内的多种鞘脂，斑块低密度脂蛋白中神经酰胺的含量比血浆低密度脂蛋白中高10～50倍[2-3]。有研究发现，神经酰胺可以预测冠心病患者18年后的全因死亡，这一结果在调整年龄性别、体质量指数、高血压、吸烟、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血糖和CVD家族史等危险因素后仍然显著[4]。但对于神经酰胺与1年内心血管事件的发生情况的预测尚有争议。本研究旨在探讨神经酰胺水平与心血管事件发生情况的相关性，为应用神经酰胺预测心血管事件发生提供依据。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取自2019年8月至2020年7月于北部战区总医院体检或入院诊治的师级以上干部586例为研究对象。纳入标准：年龄≤80岁；均签署知情同意书。排除标准：妊娠期妇女；恶性肿瘤患者；依从性较差者。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法 所有研究对象均空腹采集静脉血，应用高效液相色谱串联质谱(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)法检测血液中4种不同类型的神经酰胺的含量(Cer16∶0、Cer18∶0、Cer24∶0、Cer24∶1)。准确度采用加样回收试验评价，通过向血浆样品中加入低值和高值浓度(同精密度和准确度浓度)标准溶液，每个浓度重复检测6次，按照“样品处理流程”处理样品；计算回收率，评价准确度。依据检测出的具体的数值进行打分，打分标准[5]见表1。根据神经酰胺水平的不同分数等级，将其分为A组(神经酰胺低水平组，总分0～2分，n=403)，B组(神经酰胺中水平组，总分3～6分，n=157)、C组(神经酰胺高水平组，总分7～12分，n=26)。随访观察1年，记录3组患者1年内心血管事件(因缺血性心血管病包括心绞痛发作、心肌梗死等)的发生情况。

表1 UPLC-MS/MS法检测神经酰胺项目及打分标准

2 结果

2.1 3组患者一般资料比较 3组患者男性比例、年龄、体质量指数、血糖、吸烟比例、高血压比例、同型半胱氨酸、糖化血红蛋白比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。A组患者的甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平低于B组、C组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组患者一般资料比较

2.2 3组患者心血管事件发生率比较 A组、B组、C组分别发生心血管事件9例(2.2%)、9例(5.7%)、4例(15.4%)。B组患者心血管事件发生率明显高于A组，差异有统计学意义(P<0.05)；C组患者心血管事件发生率明显高于A、B组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.3 高水平神经酰胺患者发生心血管事件的二元Logistic回归分析 应用二元Logistic回归分析，对3组患者低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、胆固醇和甘油三酯水平进行校正，结果表明高水平神经酰胺是心血管事件的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 高水平神经酰胺患者发生心血管事件的二元Logistic回归分析

3 讨论

目前，我国CVD处于高患病率、高致残率、高病死率阶段，已成为重大公共卫生问题[6-8]。构建有效的心血管事件预测体系，寻找能预测心血管事件的核心生物学标记物意义重大。而神经酰胺在心血管事件风险预测中有重要的临床指导价值，具备成为CVD相关生物学标记物的潜能。

本研究中神经酰胺的检测采用了国际领先UPLC/MS-MS技术。UPLC/MS-MS技术是一种通过制备、分离、检测气相离子来鉴定化合物的专门技术，广泛应用于各领域中[9]。在众多的分析测试方法中，质谱学方法被认为是一种同时具备高特异性和高灵敏度的且被广泛应用的普适性方法，在临床研究的应用方面，已成为国际公认的定量分析首选技术。截至目前，UPLC/MS-MS已经可以用于检测多种神经酰胺[10]。有研究发现，血浆神经酰胺水平越高的急性心肌梗死患者斑块易损特征越明显[11]。一些前瞻性研究证实，血浆中Cer(d18∶1/16∶0)、Cer(d18∶1/20∶0)、Cer(d18∶1/24∶1)及其与 Cer(d18∶1/24∶0)的比率对斑块的不稳定性、CVD病死率和健康人群发生意外主要心血管事件均具有预测能力[12-14]。患者心血管事件的发生受多种因素的影响，如年龄、性别、胆固醇、低密度脂蛋白、血糖、吸烟、饮酒、用药情况等[15]。本研究结果显示，高水平神经酰胺是心血管事件的独立危险因素(P<0.05)。这表明，神经酰胺水平与心血管事件发生密切相关。本研究结果还显示，B组患者心血管事件发生率明显高于A组，差异有统计学意义(P<0.05)；C组患者心血管事件发生率明显高于A、B组，差异均有统计学意义(P<0.05)。这表明，高水平神经酰胺患者心血管事件发生率更高，高水平神经酰胺能够一定程度上预测心血管事件的发生。本研究纳入人群为师级以上干部，对于研究广泛人群的神经酰胺水平仍有一定局限性，尚需进一步大样本、多中心检测。

综上所述，高水平的神经酰胺的患者心血管事件发生率更高，为心血管事件的独立危险因素。