避疫祛秽藏药香囊制备工艺及体外杀菌实验研究

王海苹，李怀平，单玉刚*，李 鑫，张文高

(1.金诃藏药(山东)健康产业有限公司，山东 济南 250101；2.山东中医药大学，山东 济南 250355)

香囊外治疗法，也叫香佩疗法，属于中医学“衣冠疗法”，它利用药材芳香发挥避疫祛秽、调养正气、治未病作用。《山海经》记载薰草“佩之可以已疠”[1]，清代吴尚先《理瀹骈文》记载:“辟瘟囊方、抗痨丸佩囊等，辟瘟囊以羌活、大黄、柴胡、苍术、细辛、吴茱萸各一钱，共研细末，绛囊盛之，佩于胸前，用于四时感冒，可避瘟疫。”针对2020年新型冠状病毒肺炎疫情，张文高教授分析新冠肺炎患者病因病机，参考藏医《四部医典》《理瀹骈文》《清宫外治医方精华》[2～3]，结合个人临床经验，精选苍术、艾叶、藿香、红景天、檀香、防风等20味药材研制出避疫祛秽藏药香囊。本文开展避疫祛秽藏药香囊制备工艺及体外空气杀菌研究，旨在为香囊配方工艺及其临床应用提供依据。

1 避疫祛秽藏药香囊制备工艺研究

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪 器

日本岛津LC-20AT液相色谱仪,SPD-20A紫外检测器,KQ5200B型超声仪。烘箱、电子天平、电热套、粉碎机。

1.1.2 试 药

样品：避疫祛秽藏药香囊配方药材；丁香酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110725-201716)；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.1.3 检测方法

1.1.3.1 丁香酚含量测定

高效液相色谱条件[4]以甲醇-水(55∶45)为流动相，以280 nm为检测波长，色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，柱温35 ℃，进样量10 μL。

1.1.3.2 溶液制备

对照品溶液制备：精密称取丁香酚对照品适量，置于棕色容量瓶中，使用70 %乙醇溶解并稀释至刻度，制成浓度约为0.5 mg/mL的溶液。

供试品溶液制备：精密称取本品0.5 g，置于50 mL棕色容量瓶中，加入40 mL 70 %乙醇溶液，密封，超声处理20 min。超声完毕后，放冷，用70 %乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品测定溶液。

1.1.3.3 挥发油含量测定[5]

检验依据：《中国药典》2015版四部通则2204。

实验方法：精密称取香囊内容物50.0 g，加入10倍量水，加热至微沸后固定电压在150 V持续加热5 h，静置后读取挥发油的量，并进行计算。

1.2 不同粉碎目数的筛选

按照香囊配方称取药材共计500 g，此为一份，共配制三份，分别粉碎，第一份粉碎过20目筛，第二份粉碎过30目筛，第三份粉碎过40目筛，各自混合均匀，精确称取15 g装入香囊布袋中，将上述制备好的香囊放置于100 m3的空间内，分别在0 d、3 d、7 d测定药粉中挥发油含量(%)以及丁香酚含量(%)。根据含量测定结果，筛选最佳过筛目数。见表1。

表1 不同粉碎目筛考察

由表1数据可知，20目粉碎粒径较大，药材中的挥发性成分散出慢，不能在理想时间内达到较好的效果。而40目粉碎粒径较小，药材中挥发性有效成散发出快，效果与30目粉碎后效果差距不大，但会缩短使用时间，造成药材不必要的浪费，因此，选择粉碎30目过筛。

1.3 粉碎温度对药材的影响

香囊主要以药材挥发油成分发挥药效作用，而粉碎过程中会产生高温，产生热量，进而造成挥发性成分和不耐热成分的损失，为保证药材中挥发性成分最大限度地保留，我们对粉碎温度进行考察，按照配方比例称取500 g药材，共取四份：第一份控制粉碎温度为50 ℃，粉碎后过30目筛，混合均匀，测定挥发油及丁香酚含量；第二份控制粉碎温度为60 ℃，粉碎后过30目筛，混合均匀，测定挥发油及丁香酚含量；第三份控制粉碎温度为70 ℃，粉碎后过30目筛，混合均匀，测定挥发油及丁香酚含量；第四份控制粉碎温度为80 ℃，粉碎后过30目筛，混合均匀，测定挥发油及丁香酚含量。见表2。

表2 不同粉碎温度考察

表2数据表明，随着粉碎温度的升高，药材中总挥发油量及丁香酚含量在逐渐降低，50 ℃与60 ℃粉碎时，挥发油总量以及丁香酚含量无显著性差异。因此，为了保证香囊效果，综合考虑确定药材在粉碎过程中温度不能高于60 ℃。

1.4 避疫祛秽藏药香囊稳定性研究

1.4.1 放置条件

选择2个格局相同的100 m3房间，分别放置已经包装好的香囊，其中一个房间保持密闭，另外一个房间开窗通风，按照设定放置时间点分别测定丁香酚含量及总挥发油含量指标，根据测定结果计算各指标成分的变化率。变化率(%)=(0天测试数值—取样天测定数值)×100 %。

1.4.2 放置时间

分别放置0、3、7、14、21、28 d。

1.4.3 检测项目

丁香酚含量、总挥发油量。

1.4.4 检测结果(见表3～表4)

表3 密闭空间稳定性测定结果

表4 开放式空间稳定性测定结果

表3、表4数据表明，①香囊药包中挥发油成分和丁香酚成分随时间的延长而逐渐释放；放置2周时丁香酚挥发30 %左右，总挥发油挥发70 %左右；放置4周时间丁香酚挥发40 %～50 %，总挥发油量挥发90 %左右。②开放式的空间里香囊挥发油以及丁香酚挥发速度明显高于封闭式空间，这说明空气流通能够加速香囊中挥发油挥发速度。综合上述分析，建议香囊药袋使用2周～4周后进行更换。

2 避疫祛秽藏药香囊体外杀菌实验研究

现代研究显示：香囊配方所含挥发油等活性成分可以抑制细菌病毒，改善鼻腔呼吸道黏膜功能，增强机体免疫力，改善睡眠，增强食欲，进而起到增强身体抵抗力、预防疾病作用[6～9]。为验证香囊杀菌效果，本文开展避疫祛秽藏药香囊对空气细菌的体外杀菌实验研究。

2.1 材 料

2.1.1 样 品

避疫祛秽藏药香囊药包，生产日期2020年3月11日，金诃藏药(山东)健康产业有限公司。

2.1.2 培养基

营养琼脂，压力蒸汽灭菌后备用。

2.1.3 仪 器

电热恒温培养箱，六级空气微生物采样器。

2.1.4 实验场所

30 m3密闭空间。

2.2 方 法

2.2.1 检验依据

WS/T648-2019《空气消毒机通用卫生要求》附录B。

2.2.2 实验方法

将避疫祛秽藏药香囊若干置于30 m3测试房间中，将采样器放于房间中心，离墙壁>0.5 m,离地面1.0 m。采样(流量28.3l/min)5 min，为实验前样本，打开香囊，放置至规定时间后进行采样，为实验后样本。取样后，按照WS/T648-2019《空气消毒机通用卫生要求》附录B项下微生物培养方法进行培养，实验结束后对细菌进行计数，统计分析。

2.3 结 果

所检避疫祛秽藏药香囊，2个香囊对体积约30 m3市内空气分别作用8 h、24 h、48 h，自然菌消亡率分别为98.48 %、99.58 %、>99.99 %；4个香囊对体积约30 m3室内空气分别作用2 h、4 h、8 h，自然菌消亡率分别为76.52 %、98.09 %、99.74 %。见表5。

表5 避疫祛秽藏药香囊空气消毒现场实验结果

由表5数据结果可知，避疫祛秽藏药香囊对空气自然菌有抑制和杀灭作用，在48 h内，随着时间延长，香囊配方中挥发性成分逐渐减少，实验空间内自然菌逐渐减少，自然菌消亡率接近100 %，表明避疫祛秽藏药香囊空气杀菌效果显著。

3 讨 论

香囊防御疾病，历史悠久，疗效满意。但是传统香囊多为手工制作，产量小，质量参差不齐。前期研究发现，药材粉碎目数以及粉碎温度对配方中的挥发油成分有较大影响，粒度太大，挥发性成分不宜很快散出，粒度太小则挥发油散发较快，影响使用周期。为确保香囊活性成分作用效果，本文以总挥发油及丁香酚含量为指标，开展工艺优化研究，确定最佳工艺参数。在稳定性实验中发现香囊挥发性成分因空间通风，数据有一定差异，密闭空间挥发性相对较慢，当香囊放置4周以后，香囊活性成分挥发90 %左右，综合考虑，避疫祛秽藏药香囊药包建议2周～4周更换1次。

体外杀菌实验研究结果表明，避疫祛秽藏药香囊对空气中自然细菌具有很好的杀菌作用，将配方制作成香囊后便于携带，可以悬挂于卧室、客厅、办公室、车内，改善周围空气。避疫祛秽藏药香囊，气味自然清新、芳香怡人，具有醒脾化湿作用，长期使用可舒缓情绪，改善食欲和睡眠，增强免疫能力，扶正祛邪，提高机体抵抗能力。