青少年骨肉瘤组织中缺氧诱导因子-1α、E-钙黏蛋白的表达及其与Enneking分期的关系

王 玉，周 强，刘雷鸣

(河南省儿童医院、郑州儿童医院，河南 郑州 450053)

骨肉瘤属于间叶组织肉瘤，青少年高发，且恶性程度高，致死致残率高，对青少年人群的生命健康安全影响较大[1]。骨肉瘤的治疗通常采取手术切除的方式，并根据疾病恶性程度决定是否给予化疗为主的辅助治疗[2]。骨肉瘤容易出现化疗耐药，影响化疗的治疗效果，从而导致治疗失败，影响了预后[3]。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是肿瘤发生、发展过程中的关键蛋白，在结直肠癌、肝癌、胃癌等多种实体瘤组织中存在高表达[4-5]。恶性肿瘤细胞的增殖会造成机体内的缺氧环境，缺氧环境下HIF-1α表达增加，增加肿瘤细胞糖酵解，又可以通过影响血管内皮生长因子等促血管生成因子的表达增高，促进肿瘤血管新生，为肿瘤细胞的恶性增殖提供营养物质，促进肿瘤的周围浸润、远处转移等恶性生物学行为的进展[6]。E-钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)属于跨膜蛋白，主要参与肿瘤细胞间的粘连等生物学过程，在恶性肿瘤发生上皮间质转化过程中表达下调，改变肿瘤细胞连接和结构，诱发细胞极性改变，促进肿瘤细胞的浸润、转移等恶性生物学行为[7]。研究证实，E-cad在胃癌、乳腺癌、肝癌、食管癌等多种实体瘤中存在异常低表达，通过促进上皮间质转化加速恶性肿瘤的疾病进展[8-9]。

本研究通过比较观察青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad的表达情况及两者与青少年骨肉瘤Enneking分期的关系，进一步探讨骨肉瘤组织的疾病进展机制，并尝试寻找骨肉瘤的诊断和预后评估的新指标，为骨肉瘤的临床诊治提供一定数据参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料纳入2012年1月至2018年12月河南省儿童医院收治的29例经临床病理学确诊的青少年骨肉瘤和25例正常骨组织患者。29例骨肿瘤患者：男15例，女14例；年龄6～14岁，中位年龄8.6岁；Enneking分期[10]：Ⅰ期8例，Ⅱa期10例，Ⅱb期7例，Ⅲ期4例。纳入患者中已经排除既往骨肉瘤治疗史、合并其他恶性肿瘤、合并精神神经性疾病、合并其他严重内科疾病患者。25例正常骨组织标本均来自同期我院接受骨肿瘤切除术患者的癌旁正常骨组织，其中男14例、女11例，年龄7～14岁，中位年龄9.0岁。所有入组患者均已经获得患者及家属的知情同意并已签署知情同意书，并获得医院伦理委员会的审核批准。2组患者性别、年龄等基线资料比较差异无统计学意义(P<0.05)，具有可比性。

1.2 HIF-1α、E-cad的免疫组化染色所有骨组织标本均经质量分数4%多聚甲醛固定、常规石蜡包埋切片后，进行免疫组化S-P染色，以已知阳性切片为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗为阴性对照，然后显微镜下对HIF-1α、E-cad进行定位，并检测两者的灰度值，进一步计算相对表达量，其中HIF-1α位于骨肿瘤细胞的细胞质，而E-cad位于骨肿瘤细胞的细胞核。

1.3 观察内容比较观察青少年骨肿瘤组织与青少年正常骨组织中HIF-1α、E-cad的相对表达量，并比较观察两者与青少年骨肉瘤Enneking分期的关系。

2 结果

2.1 青少年骨肉瘤组织和青少年正常骨组织中HIF-1α、E-cad相对表达量比较青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad相对表达量分别为109.34±19.38、65.32±8.22，与青少年正常骨组织的38.02±9.87、96.31±14.33比较差异均有统计学意义(t=16.621，P<0.001；t=9.915，P<0.001)。见表1。

表1 青少年骨肉瘤组织和青少年正常骨组织中HIF-1α、E-cad相对表达量比较

2.2 不同Enneking分期青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad相对表达量比较Enneking分期Ⅰ～Ⅱa期青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad相对表达量分别为78.37±15.62、86.29±10.41，与Ⅱb～Ⅲ期青少年骨肉瘤的160.02±30.15、31.01±5.92比较差异均有统计学意义(t=9.635，P<0.001；t=16.028，P<0.001)。见表2。

表2 不同Enneking分期青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad相对表达量比较

3 讨论

骨肉瘤属于青少年高发肿瘤，大多临床表现为患侧肢体疼痛、行动不便等，由于其高度恶性、易致死致残的性质，对青少年人群的健康造成严重影响，导致其已成为临床研究的热点问题[10]。骨肉瘤治疗以手术为主，化疗等作为辅助手段有助于改善预后，但化疗耐药发生率较高，这严重影响了骨肉瘤预后的进一步提升[11-12]。为了进一步探讨骨肉瘤的发病机制，探索临床诊断辅助新手段，改善骨肉瘤的预后，本研究选择HIF-1α、E-cad等研究较为深入的恶性肿瘤诊断与鉴别诊断的免疫组化指标，并以青少年正常骨组织为对照，研究青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad的表达及与骨肉瘤Enneking分期的关系。关国锋等[13]研究发现，HIF-1α、CXCR4高表达可能促进骨肉瘤的恶性进展和远处转移，两者联合检测可用于骨肉瘤的恶性生物学行为评估、诊断与鉴别诊断、靶向治疗指导和预后判断。唐志斌等[14]证实，骨肉瘤组织中Ezrin蛋白、E-钙黏蛋白存在异常表达，且可能与患者的转移、预后关系密切。

本研究显示：青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad相对表达量分别为109.34±19.38、65.32±8.22，与青少年正常骨组织的38.02±9.87、96.31±14.33比较差异均有统计学意义(t=16.621，P<0.001；t=9.915，P<0.001)。Enneking分期Ⅰ～Ⅱa期青少年骨肉瘤组织中HIF-1α、E-cad相对表达量分别为78.37±15.62、86.29±10.41，与Ⅱb～Ⅲ期青少年骨肉瘤的160.02±30.15、31.01±5.92比较差异均有统计学意义(t=9.635，P<0.001；t=16.028，P<0.001)。这说明青少年骨肉瘤组织中存在HIF-1α的异常高表达和E-cad的异常低表达，且表达水平与青少年骨肉瘤的Enneking分期有关。

综上所述，青少年骨肉瘤组织中的HIF-1α、E-cad存在异常表达，两者异常表达与骨肉瘤的疾病进展关系密切，联合检测可能有助于骨肉瘤的诊断与鉴别诊断、疗效评估和用药指导等。