miR-93在胃癌患者血清中的表达及与生存期的相关性探讨

张海波，黄宏春，王秀敏，王少芳

（安阳市人民医院1.消化内科；2.呼吸内科，河南 安阳 455000）

2018年全球癌症统计报告显示，全球胃癌发病率为5.70%、死亡率为8.20%，而我国是胃癌的高发区，胃癌发病率为10.60%、死亡率为13.60%，是威胁我国居民健康的恶性肿瘤之一[1]。因胃癌早期缺乏特异性表现，大部分患者确诊时已处于中晚期，五年生存率不足20%[2]。因此，寻找胃癌发生发展的标志物，对于早期胃癌的防治及预后的改善均具有重大意义。微小核糖核酸（miRNA）是一类内源性非编码单链RNA，研究证实，miRNA的失调与恶性肿瘤的发生、发展密切相关[3]。另有研究证实，miR-93的生理作用机制与“癌基因”相似，在胃癌组织中miR-93的表达上调与恶性进展和较差的预后有关[4]。本研究探讨miR-93在胃癌患者血清中的表达及与生存期的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年6 月-2017年7 月收治的胃癌患者100例为胃癌组，纳入标准：均为首诊，且经胃镜检查及病理组织学确诊；未接受过放化疗、免疫治疗。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；合并心肝肾肺功能异常、炎症内分泌代谢疾病者；有精神或神经系统疾病者；病例资料及随访资料不全者。其中男72例，女28例；年龄42～79 岁，平均60.45±5.18 岁。另选取同期健康体检者126例为健康组，其中男91例，女35例；年龄40～78 岁，平均60.39±5.16 岁。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。

1.2 血清miR-93表达含量测定方法 抽取外周静脉血5ml，以2000r/min 离心10min 取血清，采用Trizol 试剂提取细胞总RNA、合成cDNA，进行RTPCR 检测。miR-93 引物序列：上游引物5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，下游引物5’-AC GUGACACGUUCGGAGAAATT-3’，U6 引物序列：上游引物5’-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3’,下游引物5’-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’。反应条件：95℃10min，95℃10min，60℃1min，共扩增45 个循环。将U6 作为内参照，miR-93的相对表达量采用2-△△Ct方法计算，其中△△Ct=△Ct（样本）-△Ct（内参）。实验重复3 次。

1.3 随访 随访方式为电话或者门诊，每隔3 个月进行一次，随访截至时间为2020年7 月31 日，统计3年生存率。

1.4 统计学分析 本次研究所得数据使用SPSS 25.0 统计学软件分析，计量资料以（）表示，组间比较采用独立样本t 检验；计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-93表达含量对胃癌的早期诊断价值；采用Kaplan-Meier 法进行生存分析；生存期影响因素的多因素分析采用Cox 比例风险模型，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌患者血清miR-93表达含量 胃癌组血清中miR-93 相对表达含量为（4.31±0.38），高于健康组（1.00±0.11），差异有统计学意义（t=93.034,P<0.05）。

2.2 不同胃癌临床病理特征患者血清miR-93表达含量比较 TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、局部浸润深度T3～T4、有淋巴结转移者血清miR-93表达含量均分别高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、局部浸润深度T1～T2、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义（P<0.05）；不同性别、年龄、肿瘤最大径、分化程度者血清miR-93表达含量比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 不同胃癌临床病理特征患者血清miR-93表达含量比较（）

表1 不同胃癌临床病理特征患者血清miR-93表达含量比较（）

2.3 血清miR-93 诊断胃癌的效能 ROC 曲线结果显示，miR-93 诊断早期胃癌的ROC 曲线下面积为0.981（95% CI：0.958～0.997），最佳界值为2.310时，灵敏度为96.74%，特异度为87.50%，见图1。

图1 血清miR-93对早期胃癌诊断的ROC 曲线图

2.4 血清miR-93与胃癌患者生存期的相关性 以血清miR-93=2.310 为界，将100例患者分为高表达组（n=47）与低表达组（n=53），血清miR-93 高表达组3年总生存率为63.83%,低于低表达组的83.02%，差异有统计学意义（χ2=4.767，P=0.029<0.05），见图2。

图2 胃癌患者不同血清miR-93表达组生存曲线图

2.5 胃癌患者生存期影响因素分析 以生存时间和是否因胃癌死亡为因变量，以血清miR-93表达含量、TNM 分期、局部浸润深度、淋巴结转移作为自变量进行多因素Cox 比例风险模型分析，结果显示，血清miR-93 高表达（HR=3.125）、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期（HR=2.864）、局部浸润深度T3～T4（HR=2.064）、有淋巴结转移（HR=3.718）的胃癌患者生存期较短，见表2。

表2 胃癌患者生存期影响因素多因素Cox 比例风险模型分析

3 讨论

胃癌为临床上常见的一种消化系统恶性肿瘤，其发病率近年来呈升高及年轻化趋势，且发病与遗传、环境、饮食、身体质量指数（BMI）、营养因素以及慢性感染等相关[5,6]。因胃癌早期缺乏特异性症状表现，待确诊时往往发展至中晚期，预后较差[7,8]。当前，无有效的早期无创筛查和诊断胃癌的方法是胃癌死亡率较高的一项重要原因，虽然我国逐渐重视胃癌的筛查及早期诊断，其中胃镜检查为早期诊断胃癌的主要手段，但其为有创操作，难以普及，且临床上常用的癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA）199、CA125 等肿瘤标志物在胃癌的筛查中灵敏度、特异度较低[9,10]。因此探寻新的非侵入性胃癌诊断及预测预后的分子标志物具有重要意义。

miRNA 能与目的信使RNA（mRNA）的3’非翻译区（3’UTR）结合,导致mRNA的降解或抑制其翻译，影响其蛋白表达，以此发挥癌基因或抑癌基因的作用[11-14]。本研究结果显示，胃癌组血清中miR-93 相对表达含量高于健康组,且TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、局部浸润深度T3～T4、有淋巴结转移者血清miR-93表达含量均分别高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、局部浸润深度T1～T2、无淋巴结转移者,表明，miR-93在胃癌组织中存在高水平表达,且其表达随胃癌病理学分期的演进而上升，miR-93在胃癌中可能发挥癌基因的作用，即意味着血清miR-93水平越高则患者的病情可能越严重。马志军等[15]进行的体外实验研究结果表明，转染miR-93 后48、72、96 h，胃癌细胞株AGS的增殖、迁移和侵袭能力显著增强，即促肿瘤行为能力明显增强，发挥癌基因的作用。本研究结果另显示，miR-93 诊断胃癌的ROC 曲线下面积为0.981（95% CI：0.958～0.997），最佳界值为2.310 时，灵敏度为96.74%，特异度为87.50%，表明，miR-93对胃癌的早期诊断效能，诊断灵敏度、特异度均较高，具有较高的诊断价值。本研究结果还显示，血清miR-93 高表达组3年总生存率为63.83%，低于低表达组的83.02%，且多因素Cox 比例风险模型分析结果显示，血清miR-93 高表达（HR=3.125）、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期（HR=2.864）、局部浸润深度T3～T4（HR=2.064）、有淋巴结转移（HR=3.718）的胃癌患者生存期较短，表明，血清miR-93 高表达与胃癌患者生存期密切相关，是胃癌患者生存期的危险因素。

综上所述，miR-93在胃癌患者血清中呈高表达，且与临床病理特征及生存期存在相关性，可作为诊断胃癌及判断预后的生物学标志物。