高效液相色谱法同时测定复杂食品 基质中8种合成色素的含量

陈利辉

（中纺检测（福建）有限公司，福建泉州 362000）

传统检测方法存在种种缺陷，难以满足实际检测准确性需要，因此有必要加强对高效液相色谱法合成色素检测分析，更好地保障食品安全。

1 材料与方法

1.1 试验仪器

高效液相色谱仪，型号为岛津LC-2030C；真空脱气机，型号为岛津LC-2030C系列，与高效液相色谱仪配套；自动进样器；二极管阵列检测器（PDA）；ProElut PWA-2固相萃取柱，规格为150 mg/6 mL。

1.2 试验试剂

乙酸铵溶液，浓度为0.02 mol/L；提取溶剂；质量浓度为0.500 g/L的日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝标准溶液，质量浓度为1.00 g/L的赤藓红、诱惑红标准溶液，质量浓度为93.5%的酸性红标准品。

1.3 试验方法

称取1 g样品，并将其置于50 mL离心管中，然后再加入20 mL的提取溶剂，漩涡振荡处理2 min。接着，超声提取10 min。再于6 000 r/min条件下进行离心处理，提取上层清液。在此基础上，再取下层残留物，加入10 mL提取溶剂，再进行漩涡振荡处理2 min，超声提取15 min，于6 000 r/min的条件下，离心处理溶液2 min，再次收集上层提取物[1-2]。针对下层提取物，再按照上述步骤，重复提取3次，将上述提取3次的上层清液合并在一起，置于40 ℃水浴条件下，然后进行减压蒸发浓缩，在浓缩至3 mL后，加入2 mL水，混匀，用甲酸将溶液pH调至5左右。采用ProElut PWA-2固相萃取柱，实施净化处理。依次加入5 mL甲酸溶液（体积分数为2%）、水与甲醇（体积分数为2%），实施小柱冲洗，同样弃掉流出液，用洗耳球吹干小柱[3]。加入5 mL氨水-甲醇（15+85）溶液，对小柱实施洗脱处理，并完成洗脱液的收集。然后将其置于50 ℃的环境下，实施氮吹操作，在吹至0.5 mL后，采用浓度为0.02 mol/L乙酸铵溶液进行定容，在定容至1 mL后，0.45 µm膜过滤，检测。

2 结果与分析

2.1 色素提取方法选择

由于蛋白质不溶于乙醇，因此可采用乙醇将不溶于水的蛋白质除去，成功分离色素，为提高分离效果，再加入少量氨水，使色素在乙醇中充分溶解，进一步降低色素的提取难度[4]。因此，本次试验选用乙醇-乙腈-甲醇-氨水混合溶液作为提取溶剂。

2.2 色谱条件选择

在本次试验中，采用了3种不同流动相对样品实施分析，即乙腈-水、乙腈-乙酸铵和甲醇-乙酸铵。由试验结果知，乙腈-水为流动相，难以有效分离合成色素；而采用甲醇-乙酸铵，只能够分离部分合成色素；当采用乙腈-乙酸铵流动相时，上述8种合成色素均能够得到有效的分离，且获得的峰形也比较优秀[5]。为进一步验证这一结果，确定流动相浓度，试验采用了0.01～0.05 mol/L的5种不同浓度乙酸铵溶液进行对比。结果发现，当采用质量浓度为0.02 mol/L的乙酸铵溶液时，上述8种合成色素有最佳的分离效果，后续若继续增加该浓度数值，相应峰形和分离效果改善均不明显，甚至还出现下降的趋势。基于此，本次试验选用质量浓度为0.02 mol/L的乙酸铵溶液作为流动相色谱条件。

2.3 精密度和回收试验

在试验开展的过程中，采用空白猪大肠样品，并在此基础上，加入了8种合成色素标准溶液，不同标准溶液的检出限浓度分别为标准检出限度的1倍、2倍及10倍，并在试验方法的指导下，完成样品的处理，并平行测定6次，计算回收率及相对标准偏差（RSD）。由表1可知，各色素的加标回收率在84.5%～99.1%，RSD在1.4%～2.5%，与最终检测要求相符合。除此之外，试验改变了检测样品后，比如采用了茶叶等，最终回收率与精密度结果依然符合检测 要求。

表1 精密度与回收实验结果（n=6）

3 结语

综上所述，加强对食品中常见的食品合成色素的检测，要采用高效液相色谱法测定复杂食品基质的合成色素。试验结果表明，该检测方法能够有效弥补传统检测方法的缺陷，提高了检测效果，能够大面积推广应用。