蓬子菜总黄酮片剂的制备及质量初步评价

孙志伟，张文君

(哈尔滨商业大学 药学院，哈尔滨 150076)

蓬子菜(GaliumverumL.)为茜草科拉拉藤属植物，其主要有效成分为总黄酮类化合物[1-2]，具有抗炎、抗肿瘤、抗血栓、抑菌和抗氧化等药理作用[3-9].片剂是常见的固体剂型，具有剂量准确，质量稳定，生物利用度良好，便于携带等优点[10-15].本实验以蓬子菜总黄酮为研究对象，以片剂外观、崩解度、硬度、片重差异为评价指标，通过L9(34)正交实验法优化蓬子菜总黄酮片剂的制备工艺.

1 仪器与材料

UV-240紫外分光光度计(756 PC上海)；78X-2型片剂四用测定仪(承德金和仪器有限公司)；DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱(济南来宝医疗机械有限公司)；KQ5200超声清洗仪(上海比郎仪器制备有限公司)；PTHW调温控温电热套(上海一科仪器有限公司)；HH-WO水油浴锅(上海夏丰事业有限公司)；TDP单冲压片机(青州市精诚医药装备制造有限公司).

蓬子菜采于尚志市帽儿山，由哈尔滨商业大学张德连鉴定为茜草科拉拉藤属植物蓬子菜(GaliumverunL.)；微晶纤维素(山东心莱娜化工有限公司)；乳糖(北京万佳首化生物科技有限公司)；淀粉(山东誉恒纤维有限公司)；交联羧甲基纤维素钠(济南元通化工有限公司)；硬脂酸镁(广州正浩新材料科技有限公司).

2 方法与结果

2.1 蓬子菜总黄酮有效部位的制备

将蓬子菜全草剪小段，90%乙醇回流提取2次，每次1 h，醇提液浓缩得蓬子菜浸膏，浸膏用20%乙醇稀释后，通过AB-8大孔树脂柱，依次用20%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脱，将60%乙醇洗脱液减压浓缩，得蓬子菜体积分数60%乙醇有效部位，保存在干燥器中备用.

2.2 辅料的选择

2.2.1 填充剂的选择

按照2020版中国药典规定，分别测定微晶纤维素、乳糖、淀粉的休止角、松密度、振实密度、压缩度对填充剂进行筛选，确定用不同配比的微晶纤维素和乳糖作为填充剂，进一步考察二者的最优比例，以片剂的外观、硬度、崩解时间和片重差异为评价指标，结果显示微晶纤维素、乳糖为1∶1比例时硬度与崩解度适宜，片重差异相对较小，结果见表1.

表1 填充剂的选择试验结果(n=6)Table 1 Test filler selection (n=6)

2.2.2 黏合剂的选择

对水和乙醇的性质比较确定黏合剂.水在物料中非常容易被吸收，单独使用可能引起物料凝结成块，不易压片，制得的片剂易有麻点.乙醇多用于黏性较强的药物，加热干燥时易引起变质的药物，或在水中溶解度大而制粒困难的药物，以及干燥后硬度过大压片时易产生花斑以及崩解时间过长的药物.因此本实验选择乙醇作为黏合剂，选择体积分数分别为50.0%，70.0%和90.0%.

2.2.3 崩解剂的选择

对干燥淀粉与交联羧甲基纤维素钠特点比较进行筛选.干燥淀粉是一种亲水性物质，用作崩解剂可使片剂的孔隙率提高从而改变片剂的渗水性.通常适用于不溶性或微溶性药物，但用量过多会使颗粒的流动性降低并且影响片剂的硬度.交联羧甲基纤维素钠为无臭无味白色细颗粒状粉末，吸水性强，能形成混悬液，同时具有较强的可压性和崩解性，故崩解剂选择交联羧甲基纤维素钠.

2.2.4 润滑剂的选择

对滑石粉与硬脂酸镁性质比较确定润滑剂.滑石粉会刺激肠胃，颗粒细，比重大，并且附着力较差，一般与其他润滑剂同时使用.硬脂酸镁为优质润滑剂，能有效降低粗糙性与摩擦力，使表面有不平处的辅料颗粒变光滑，降低辅料颗粒的粗糙性，还能降低冲模与冲头之间的摩擦力.根据滑石粉和硬脂酸镁的性质比较，本处方的润滑剂选择硬脂酸镁，加入硬脂酸镁的量为处方量的0.3%.

2.3 正交设计优化处方

采用正交实验的方法，选取3个因素(崩解剂占片重比、黏合剂乙醇体积分数、崩解剂加入方法)，每个因素取3个水平，见表2，对影响片剂成型工艺的因素进行系统性考察.选用L9(34)正交实验进行试验.每组以0.5 g蓬子菜总浸膏干粉(80目)为基础，依照各组处方工艺加入相应辅料，混合，湿法制颗粒，于60 ℃烘箱干燥1 h，取出后将颗粒过14目筛，整粒，加0.3%润滑剂硬脂酸镁，混合均匀后进行压片.以片剂的外观、崩解度、硬度、重量差异为评价指标，采用综合评分法，对依据设计处方制备的片剂的成型质量进行综合性评价.片剂外观观察其完整性、色泽、光洁性、色麻斑畸形程度现象，外观分数为4分表现为完整光洁、颜色均匀、无色麻斑畸形；外观完整光洁、颜色均匀，3分表现为偶见有色麻斑畸形；外观分数为2分表现为完整光洁、颜色均匀，见有色麻斑畸形；1分表现为外观完整光洁、颜色不均匀；0分表现为外观不光洁不完整.片剂硬度(N)的分数采用原数值.崩解时限(min)分数为原数值倒数的100倍.质量差异的分数为片重变异系数(%)百分数倒数的10倍.设计因素水平，按L9(34)正交表进行实验，所选因素、水平见表2.

表2 正交试验因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal experiment

进行综合评分时则以各指标最大值为参照数值，将数据进行归一化统计，再给出不同权重系数.外观和重量差异权重系数设为0.2，片剂硬度和崩解度的权重系数设为0.3.其中综合评分计算公式为Y=0.2×100/4×X1+ 0.3×100/14 ×X2+0.3×100/6.3×X3+ 0.2×100/1.89×X4.评分结果愈高则代表成型性愈好.根据评分结果高低综合筛选出最优处方，并进行验证.

蓬子菜总黄酮片剂最优处方为A2B2C3，即崩解剂占片重比为7%，采用内外加法，黏合剂为70%乙醇，综合评分为89.29，见表3、4.

表3 正交试验设计与结果Table 3 Experimental result of orthogonal analysis

表4 方差分析结果Table 4 Results of variance analysis

2.4 最优处方验证试验结果

按照最优处方A2B2C3进行验证试验，结果工艺稳定，结果见表5.

表5 验证试验结果Table 5 Results of verification test

2.5 片剂总黄酮的测定

2.5.1 对照品溶液的制备

称取芦丁对照品0.1 g，精密称量，置50 mL锥形瓶中，加适量60%乙醇超声溶解，静置后，置100 mL容量瓶，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀即得.

2.5.2 供试品溶液的制备

取蓬子菜有效部位片剂20片，精密称定，研细，取2 g，置50 mL锥形瓶，称重，超声提取30 min，用60%的乙醇补足，摇匀，备用.

2.5.3 标准曲线的绘制

精密量取芦丁对照品溶液1、2、3、4、5 mL分别置25 mL容量瓶中，各加5%亚硝酸钠溶液1 mL，使混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加60%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min.根据紫外-可见分光光度法在510 nm波长处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，质量浓度C(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=2.242 5C+0.210 5，R2=0.999 1，该方法在0.04～0.20 mg/mL范围内线性关系良好.

2.5.4 方法学考察

精密度试验量：取对照品溶液适量，置25 mL容量瓶中，定容，摇匀，测定吸光度，连续测定5次，计算RSD为0.17%.稳定性考察：准确移取标准品试液10 mL置于试管中，于510 nm下测量吸光度，每隔30 min测量一次，计算吸光度RSD为0.29%.重复性试验：精密称取同一批蓬子菜有效部位片剂粉末，溶解，精密量取上清液1 mL，置25 mL容量瓶中，蒸馏水定容，分别量取0.5 mL置50 mL容量瓶中，定容，测定吸光度，计算RSD为0.24%.加样回收试验：精密称取五份已知含量的样品置10 mL容量瓶中，60%乙醇定容，分别量取0.2 mL置50 mL容量瓶中，向每个容量瓶中加10 mL质量浓度为99.4 μg/mL的对照品溶液，定容，摇匀，按上述方法测定，计算加样回收率为97.28%～103.76%，RSD=0.29%.

2.5.5 样品测定

取三批片剂根据标准曲线测定含总黄酮的量，结果见表6，结果表明片剂均匀稳定，含总黄酮量无显著性差异.

表6 样品测定结果(n=6)Table 6 Results of content determination (n=6)

2.6 片剂的质量评价

2.6.1 外观检查

随机选取20片平铺于白纸板上，置于光源下60 cm处，在距离片剂30 cm左右处以肉眼观察，检查片剂表面是否色泽均匀，完整光洁，是否无杂斑，无异物.蓬子菜总黄酮片为棕色圆形片剂，形状完整，表面光滑洁净，色泽较均匀.

2.6.2 质量差异测定

随机选取20片称取总重，计算样品的平均片重，并准确称量各片的质量，计算每片蓬子菜有效部位片剂的片重与平均片重差异的百分率，结果见表7.

2.6.3 硬度检查的测定

随机选取6片用硬度仪测定片剂的硬度，结果见表7.

2.6.4 脆碎度的测定

随机选取20片四用测定仪中脆碎度档振摇 5 min取出后，除去粉末，对除去粉末的的片剂进行精密称重.检查裂片、碎片情况，并计算减轻质量，进行记录，结果见表7.

2.6.5 蓬子菜有效部位片剂崩解时限检查

随机选取6片，按2020年版《中国药典》篮法测定蓬子菜总黄酮片剂的崩解时限，结果见表7.

表7 崩解时限测定结果Table 7 Results of disintegration

2.7 加速实验

将蓬子菜片剂供试品3批，每批选取6片，采用塑封销膜包装，用电热恒湿恒温培养箱控制在温度(40±2)℃，湿度(75±5)%的条件下放置6个月后，分别对蓬子菜有效部位片剂的质量差异、崩解时限以及含总黄酮量进行检查.结果如表8所示，6个月后崩解时限略有延长，片重差异和含总黄酮量均无明显变化，结果表明蓬子菜总黄酮片剂较为稳定.

表8 加速实验结果(n=6)Table 8 Results of short-time test (n=6)

3 讨 论

本实验通过L9(34)正交实验法，考察片剂的各项指标，最优处方为A2B2C3.即蓬子菜有效部位0.5 g，微晶纤维素5 g，乳糖5 g，采用内外加法加入交联羧甲基纤维素钠0.8 g，硬脂酸镁0.1 g，黏合剂为70%乙醇.优选的蓬子菜总黄酮片剂制备工艺得到的片剂完整光洁，颜色均匀，硬度、质量差异、崩解时限和含总黄酮量各项指标均符合规定.此工艺操作简单易行，片剂质量可控，适合车间放大试验和工业连续生产.

90%乙醇的提取能力较强，蓬子菜经两次回流提取后，所得浸膏含大量叶绿素，浸膏较为黏稠，不利于制备片剂，本研究将蓬子菜乙醇浸膏经AB-8型大孔树脂进一步纯化，去除了大量杂质，所得有效部位为棕色粉末，流动性和可压性均较好.蓬子菜有效部位经紫外分光光度法测定，含总黄酮量高达57%，达到了五类新药的标准.

本研究通过加速试验，初步考察了蓬子菜总黄酮片剂的稳定性. 加速6个月后， 片剂的崩解时限略有延长， 这可能是由于蓬子菜总黄酮有效部位在高温、高湿条件下造成药物与辅料部分凝结所致.片重差异和含总黄酮量均无明显变化，表明蓬子菜总黄酮片剂在高温、高湿的恶劣环境下较为稳定.