平卧菊三七叶中黄酮提取工艺的研究

肖慧

摘 要：本实验以平卧菊三七的叶为实验材料，通过对提取温度、提取时间、料液比进行单因素实验，探讨了不同提取工艺对黄酮得率的影响。通过单因素实验得出：最佳提取温度为80℃、最佳提取时间3h、最佳提取料液比为1：30。

关键词：平卧菊三七 叶 黄酮 工艺优化 得率

前言

平卧菊三七是菊三七属。是一种攀援草本，有臭气，淡褐色或紫色，有条棱。它可以用于治支气管肺炎，肺结核，其成份黄酮类有多种生物学活性在抗氧化作用方面、抗肿瘤活性，黄酮类物质对冠心病、心绞痛、高血脂，心血管疾病有很好的疗效。

由于平卧菊三七有诸多的药用性质，且其药用性质主要来自于其中的黄酮成分，为此本试验以平卧菊三七的叶为原料，采用分光光度法测提取物黄酮类化合物的含量，为平卧菊三七经济价值的综合利用以及产品的开发提供参考依据。

1、试验材料与方法

1.1试验材料

1.1.1主要试验试剂

乙醇——分析纯 硝酸铝——分析纯 氢氧化钠——分析纯 石油醚——分析纯

1.1.2 试验原料

平卧菊三七 采自江西农业大学中草药资源开发教学基地

1.1.3主要试验仪器

UV-2100型可见光分光分度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司

Adventurer AR2140电子天平 OHAUS CORP USA

40目标准筛 上虞市大地分样筛厂

HH-4，HH-2数显恒温水浴锅 国华电器有限公司

L-20B型高速冷冻离心机 上海安亨科学仪器厂等

1.2试验方法

1.2.1平卧菊三七叶的预处理

将干燥的平卧菊三七的叶用粉碎机粉碎，过40目筛后得到的叶粉用石油醚脱色脱脂3h，然后放入通风橱中让其风干至恒重，得到样品。

1.2.2 平卧菊三七叶中黄酮提取工艺流程

平卧菊三七叶→预处理（清洗-晒干-粉碎）→乙醇溶液提取→过滤→定容→测吸光度→计算黄酮得率

1.2.3平卧菊三七叶提取黄酮的单因素试验设计

1.2.3.1料液比对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%，且温度80℃，时间3h条件下采用不同料液（1：20，1：30，1：40，1：50，1：60）分别提取，研究料液比对平卧菊三七叶黄酮得率的影响。

1.2.3.2提取温度对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在1.2.3.1得出最佳料液比，且时间3h下采用不同温度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、95℃）分别提取，研究不同温度对平卧菊三七叶黄酮得率的影响。

1.2.3.3提取时间对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在1.2.3.1，1.2.3.2得出最佳料液比，温度，在不同提取时间情况（1h、2h、3h、4h、5h）分别提取一次，研究不同時间对平卧菊三七叶黄酮得率的影响。

1.2.4平卧菊三七叶黄酮得率的测定的方法

平卧菊三七叶黄酮测定时以芦丁作为参照物，精密称取105℃干燥恒重的芦丁标准品10mg，加80%乙醇溶解，定容到25ml容量瓶中，摇匀，精密吸取标液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml分别置10ml试管中，加5%NaNO2 1ml，放置6min后加10%AL（NO3）3 1ml放置6min，再加4%NaOH10ml，加水到刻度，摇匀，放置15min，用分光光度计进行测定，绘制标准曲线。

称取1g平卧菊三七叶粉未，用酒精提取过滤取滤液1ml到25ml容量瓶中，加水5ml摇匀，加入浓度5%NaNO2 1ml混匀放置6min，加5%AL（OH）3溶液1ml混匀，放置6min，加入4%NaOH 10ml，再加定容到25ml，摇匀后放置15min，再用分光光度计在波长510nm处测定吸光度，根据回归方程计算样品中总黄酮总量[10]。

黄酮利率（%）=C*25*10-6*100/（W*P）

C：黄酮浓度：W：平卧菊三七叶粉末重量；P：料液比

2、结果与分析

2.1 标准曲线的绘制及回归方程的建立

配制浓度分别为0、8、16、24、32、40、48μg/ml的芦丁标准溶液，于510nm下测得芦丁相应的吸光值，吸光度分别为： 0、 0.067、 0.154、0.222、0.274、0.337、0.448。通过线性回归得到回归方程为： y=0.0089x+0.0001 （其中x：浓度，y：吸光度），决定系数R2=0.9922.

由芦丁标曲回归方程的相关系数R=0.9961>R0.01（5）=0.874 ，可知芦丁浓度与芦丁吸光度值之间建立的回归方程极显著，可以通过所测得的提取液的吸光度值算出黄酮含量。

2.2平卧菊三七叶黄酮的单因素试验结果

2.2.1料液比对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%，时间3h，80℃条件下进行料液比单因素实验结果为：料液比1：20，黄酮得率4.57%，料液比1：30，黄酮得率5.64%，料液比1：40，黄酮得率5.54%，料液比1：50，黄酮得率5.18%，料液比1：60，黄酮得率4.42%。

由此可见，随着液料比的升高，提取率也随之升高，其中在到达30：1时提取率最高，随着液料比的升高，黄酮得率降低，所以1：30是黄酮提取的最适合料液比。

2.2.2温度对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%和2.2.1所得黄酮最适合提取的料液比分别是1：30，时间是3h条件下进行温度单因素实验结果为：温度50℃，黄酮得率3.96%，温度60℃，黄酮得率4.46%，温度70℃，黄酮得率4.72%，温度80℃，黄酮得率5.57%，温度5.16℃，黄酮得率4.42%。

由此可见，随着温度的升高，提取率也随之升高，其中在到达80℃时提取率最高，80℃以后随着温度的升高，黄酮得率降低，所以80℃是黄酮提取的最适合温度。

2.2.3时间对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%和2.2.1、2.2.2所得黄酮最适合提取的料液比、温度分别是1：30，80℃条件下进行时间单因素实验结果为：提取时间1h，黄酮得率5.59%，提取时间2h，黄酮得率6.33%，提取时间3h，黄酮得率7.09%，提取时间4h，黄酮得率6.88%，提取时间5h，，黄酮得率6.52%。

由此可见，随着时间的增加，提取率也随之增加，其中在到3h时提取率最高，以后随着提取时间的增加，黄酮得率降低，所以3h是黄酮提取的最适合时间。

3、结论

提取平卧菊三七叶黄酮的最佳提取温度为80℃、最佳提取时间为3h、最佳提取料液比为1：30。