血清H-FABP联合Treg细胞变化诊断风湿性心脏病的价值

徐锋 吕庆华 肖强古 蒋贻乾 程德勇

风湿性心脏病（RHD）属于心内科常见的一种疾病，通常也被称为风心病，是因风湿热活动累及心脏瓣膜引发的心脏瓣膜病变，起病之初患者无典型的症状表现，疾病进展后可形成乏力、咳嗽、下肢水肿等诸多症状［1-2］。RHD也是一种自身免疫性疾病，相对于正常人其免疫能力出现明显降低，其中调节性T细胞是调控免疫反应的T细胞亚群，可维持机体免疫耐受与稳态，还能参与炎症反应的过程中。既往研究证实Treg细胞的CD4+CD25细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值能够为RHD病情、预后评估提供帮助［3-4］。同时血清心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）也是评估心肌损伤情况的重要标志物，在冠心病、心肌梗死等疾病的诊疗中受到众多临床医师的关注［5-6］。本文探讨血清H-FABP及CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞诊断RHD的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年4月至2020年4月本院RHD患者51例为RHD组，另外选取本院同期体检健康者51例为健康组。纳入标准：（1）RHD组患者经24 h心动图及超声监测确诊［7-8］，健康组体检各项指标无异常且与RHD组无血缘关系；（2）年龄18~65岁。排除标准：（1）肝肾功能异常；（2）近3个月内曾有免疫抑制药物使用史；（3）合并内分泌异常疾病；（4）精神异常无法配合研究者。其中RHD组男27例，女24例；年龄41~61岁，平均年龄（51.56±4.46）岁。体质量指数（BMI）19~23 kg/m2，平均（20.26±1.20）kg/m2。NYHA分级［6］：Ⅱ级30例，Ⅲ级21例。健康组男26例，女25例；年龄40~62岁，平均年龄（51.49±4.37）岁。BMI 19~23 kg/m2，平均（20.35±1.26）kg/m2；两组基础资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本项目经本院伦理委员会批准，受试者均并签署知情同意书。

1.2 方法 （1）血清H-FABP检测：患者及志愿者入院后抽取清晨空腹静脉血5 mL，肝素抗凝后取上层血清，以酶联免疫吸附实验检测H-FABP，试剂盒由荷兰Biotechnology公司生产。（2）外周血Treg细胞检测：受试者入院后均抽取5 mL静脉血，以淋巴细胞分离液对单个核细胞分离、计数后调整细胞浓度至1×106mL，随后取100 μL细胞悬液，加入20μL CD4-FITC、CD25-PE抗体（美国BioLegend公司），温室避光孵育20 min后离心去上清液，固定破膜液后温室孵育20 min，再加入20 μL Foxp3-APC抗体（美国BioLegend公司），避光反应30 min后染色，以缓冲液洗涤离心，以流式细胞仪检测CD4+CD25细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值。

1.3 观察指标 （1）比较两组血清H-FABP水平；（2）比较两组外周血Treg细胞的CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值差异；（3）利用ROC分析血清H-FABP及Treg细胞诊断RHD的价值；（4）以临床诊断结果为金标准，分析血清H-FABP联合Treg细胞诊断RHD的价值，联合诊断中任一项指标为阳性即判定为RHD，即血清H-FABP≥33.715 ng/L、CD4+CD25细胞/淋巴细胞比值≤3.245%、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值≤2.370%。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件。计量资料以（±s）表示，组间比较用t检验；计数资料以（%）表示，组间比较用χ2检验；应用ROC曲线分析血清H-FABP及Treg细胞诊断RHD的效应；一致性分析用Kappa检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清H-FABP水平比较 RHD组血清H-FABP水平为（82.46±15.44）ng/L，健康组血清H-FABP水平为（0.29±0.12）ng/L，RHD组高于健康组，差异有统计学意义（t=38.005，P<0.001）。

2.2 两组Treg细胞比较 RHD组CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值低于健康组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组Treg细胞比较［%，（±s）］

表1 两组Treg细胞比较［%，（±s）］

组别 CD4+CD25+细胞/淋巴细胞 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞RHD组（n=51） 2.58±0.66 1.35±0.59健康组（n=51） 4.95±0.59 3.04±0.24 t值 19.119 18.948 P值 <0.001 <0.001

2.3 血清H-FABP及Treg细胞诊断RHD的价值分析 血 清H-FABP、CD4+CD25+细 胞/淋 巴 细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞均可用于RHD的诊断，曲线下面积分别为0.740、0.914、0.905。见表2。血清H-FABP及CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞诊断RHD的ROC曲线见图1~3。

表2 血清H-FABP及Treg细胞诊断RHD的价值分析

图1 血清H-FABP诊断RHD的ROC曲线

图2 CD4+ CD25+细胞/淋巴细胞诊断RHD的ROC曲线

图3 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞诊断RHD的ROC曲线

2.4 血清H-FABP联合Treg细胞诊断RHD的一致性分析 血清H-FABP联合Treg细胞诊断RHD的敏感度为0.941，特异度为0.902，准确率为0.922，阳性预测值为0.906，阴性预测值为0.939，Kappa=0.843。见表3。

表3 血清H-FABP联合Treg细胞诊断RHD的一致性分析

3 讨论

RHD发病后会导致二尖瓣、三尖瓣、主动脉瓣中的一个或多个瓣膜出现狭窄或关闭不全，可导致患者心脏血流动力学异常，部分患者瓣膜狭窄或关闭不全会同时存在，但多以一种为主［9-10］。该疾病也可在任何年龄段发病，发病后具有较高死亡、致残率，即使部分患者接受手术治疗后6年病死率达10%，同时疾病发病初期症状轻微，导致确诊时已存在心脏损害，因此及早诊断对患者的治疗及预后改善具有重要意义［11-12］。

本次研究结果显示，RHD组血清H-FABP水平高于健康组。H-FABP主要存在于心肌内，能够参与到线粒体的能量代谢中，在心肌损伤时H-FABP会快速进入血液，而RHD发生后会导致患者出现心脏血流动力学紊乱及心肌损伤，故RHD患者体内血清H-FABP明显增高。段长恩等［13］在RHD患者的心功能评估中发现RHD患者血清H-FABP水平相对于健康人会呈现出明显增高，与本研究结果一致。在外周血Treg细胞的观察中，RHD组CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值低于健康组，提示相对于健康人，RHD患者Treg细胞水平呈现明显降低。与曾静［14］等研究基本相符。Treg细胞能够抑制自身免疫性疾病的发生，CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞减少则会导致细胞免疫功能出现异常，此时液体免疫功能得到增强，B细胞活化，机体也会因大量抗体的产生而出现损伤，形成自身免疫性疾病，CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值受到白介素-10、转化生长因子-β1的影响，但受到疾病的影响后者含量也会出现明显降低，也导致Treg细胞分泌受到影响，故CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值明显降低［15］。汪莲开等［16］指出白介素-10具有炎症抑制作用，转化生长因子-β1能够诱导Treg细胞的分泌，受到RHD的影响白介素-10、转化生长因子-β1会明显降低，其水平的降低可影响Treg细胞分泌。

通过ROC分析，H-FABP、CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞均可用于RHD的诊断，且敏感度较高，在一致性分析中证实三项指标联合诊断RHD能够获得更高的敏感度，即0.941>0.765、0.863、0.902，因此RHD早期诊断也可对上述三项指标进行检测，对疾病的治疗及患者预后的改善具有重要意义。

综上，RHD患者血清H-FABP水平明显上升，Treg细胞的CD4+CD25+细胞/淋巴细胞、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值明显降低，当H-FABP≥33.715ng/L、CD4+CD25+细 胞/淋 巴 细 胞 比 值≤3.245%、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比值≤2.370%时能够用于RHD的诊断，且联合诊断敏感度更高，或可作为RHD早期诊断的辅助检查指标。