HPLC法测定潮州“三宝”中山梨酸、苯甲酸和糖精钠的含量

刘志聪，张文浩

(韩山师范学院 生命科学与食品工程学院，广东 潮州 521000)

1 引言

潮州“三宝”分别是老香黄，老药桔、黄皮鼓，是潮州凉果特产中的极品，在潮汕地区的凉果界中，具有举足轻重的地位，深受潮人的青睐并享誉海内外，故被誉为潮州“三宝”。食品添加剂是一把“双刃剑”，它能保持食品的新鲜，增加食品可食性，但同时若食用过多就会影响人体新陈代谢甚至危害健康[1]。所以添加剂的使用需要有一个量的控制，只要按照国家关于《食品添加剂使用卫生标准》的相关规定，是不会对人体健康造成损害的，人们大可放心食用。潮州“三宝”在其工艺制作过程中常用的防腐剂有苯甲酸、山梨酸、和糖精钠等，所以在其成品中防腐剂量的控制在质控中尤为重要。

目前所见报道主要采用液相色谱法、气相色谱法、离子色谱法等用于测定食品中的防腐剂、甜味剂和着色剂[2～7]。高效液相色谱因其应用广泛、分离效率高及定量准确等优点被广泛应用到食品中添加剂的检测[8～12]。本文以潮州市售的潮州“三宝”(老香黄、老药桔、黄皮)为研究对象，旨在建立和开发出适用于蜜饯食品中甜味剂色谱法和防腐剂的样品前处理方法，并同时测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠的高相液相色谱(HPLC法)。

2 材料与设备

2.1 实验材料

潮州“三宝”(老香黄、老药桔、黄皮)，购于当地超市。

2.2 实验试剂

苯甲酸，山梨酸和糖精钠标准品、氢氧化钠(分析纯)、硼砂(分析纯)、亚铁氰化钾(分析纯)、乙酸锌(分析纯)、浓盐酸(12 mol/L)、甲醇(色谱纯)、乙酸铵(分析纯)等。

2.3 实验设备

高效液相色谱仪(Agilent 1200)、TGW16台式高速离心机(长沙市英泰仪器有限公司)、电子天平FA2004(上海精密科学仪器有限公司)、组织捣碎机JJ-2(江苏金坛市亿通电子有限公司)、TKA-GenPure超纯水系统(广东丹利科技有限公司)、25 mL具塞比色管、80目筛、 0. 45 μm微孔滤膜等。

3 实验方法

3.1 操作条件

色谱柱：Agilent HC-18，150 mm×4.6 mm；柱温:25 ℃;流速：1 mL/min；进样量：10 μL；流动相：甲醇∶乙酸铵溶液(0.02 mol/L) =5∶95；检测波长：230 nm。

3.2 样品的预处理

称取适量样于85 ℃下烘干至恒重，然后用组织捣碎机粉碎过80目筛，取2. 0 g粉碎均匀样品于25 mL具塞比色管中，加蒸馏水12.5 mL溶解浸泡，加入0.5 mol/L的氢氧化钠溶液0.5 mL放置过夜。再加入5.0 mL饱和硼砂溶液，摇匀后，加入0.25 mol/L亚铁氰化钾溶液2.5 mL、1.0 mol/L乙酸锌溶液2.5 mL，用1 mol/L盐酸调节pH值至中性，加水定容至25.0 mL，振荡使其充分混合，转移至离心管中高速离心，取上清液，用0. 45 μm微孔滤膜过滤，收集滤液于样品瓶中，做好标签备用。

3.3 液相色谱测定样品

将样品瓶放置于自动进样器，联机设置相应的色谱实验参数，待仪器稳定后即可自动进样测定。分析完成后进行实验数据分析。

4 实验项目

4.1 线性关系

以苯甲酸，山梨酸和糖精钠对照品三种对照品的混合标准溶液为母液，分别配制成 0.02、0.04、0.08、0.10(mg/mL)不同的浓度梯度，用液相色谱进行上样分析，以峰面积为纵坐标，相对含量为横坐标绘制校正曲线，结果显示3 种组分线性关系良好。结果如表1、图1～7所示。

表1 线性关系

图1 苯甲酸、山梨酸和糖精钠色谱图

图2 苯甲酸色谱图

图3 山梨酸色谱图

图4 糖精钠色谱图

图5 苯甲酸校正曲线

图6 山梨酸校正曲线

图7 糖精钠校正曲线

4.2 稳定性试验

以0.04 mg/mL的标准品混合液按3.1的操作条件分别于 0、2、4、8、12时进行检测，测定峰面积，然后分别计算苯甲酸、山梨酸和糖精钠的峰面积RSD (相对标准偏差)(表2)。

表2 苯甲酸、山梨酸、糖精钠5个时间段的峰面积

注：相对标准偏差(RSD)=标准偏差(SD)/计算结果的算术平均值(X)×100%，该值通常用来表示分析测试结果的精密度。

经计算，所测得的苯甲酸、山梨酸、糖精钠的RSD值分别为0.072%、0.12%、0.097%，从结果可以看出，该检测方法在12 h内是稳定的。

4.3 精密度试验

取黄皮样品(经测定，含有苯甲酸、山梨酸)，以3.1的操作条件重复进样测定5 次，计算出各次苯甲酸、山梨酸的含量，然后计算相对标准偏差(RSD)(表3)。

表3 5次平行试验结果

经5次平行试验，所测得的黄皮样品中的苯甲酸、山梨酸的RSD值分别为0.29%、9.05%，计算结果表明该方法精密度良好。

注：对相对标准偏差的要求，一般主要取决于被测对象的含量，含量越高要求相对标准偏差越低。由于本次测定中黄皮中山梨酸含量较低，故相对标准偏差较大，但仍小于10%，属于可被允许范围。

4.4 回收率实验

以黄皮为本实验样品，在其中加入浓度由低到高3个梯度的标准样品，检测后，计算各种添加剂的回收率，结果如表4。

表4 各种添加剂的回收率

5 结果讨论

本实验结果表明，用HPLC法可以同时测定蜜饯中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量，是一种简单快速的测定方法。3种待测组分能有效分离且能准确定量，适用范围广，准确度好，可作为一种快捷方法用于蜜饯类食品的日常检测。

实验结果表明，老香黄测定含有山梨酸和糖精钠两种仪器添加剂成分，含量分别为0.016 mg/g和0.64 mg/g；老药桔测定含有山梨酸和糖精钠两种成分，含量分别为0.02 mg/g和2.3 mg/g：黄皮中含有苯甲酸和山梨酸两种成分，含量分别为1.037 mg/g和0.013 mg/g。参照国家关于《食品添加剂使用卫生标准》的标准，知苯甲酸、山梨酸、糖精钠的最大使用量分别为0.5 g/kg、0.5 g/kg和1 g/kg。对比得出本次实验所随机购买市售的原材料中，老药桔中的糖精钠和黄皮中的苯甲酸含量超过了标准的最大使用量限定，这可能是由于在制作潮州“三宝”过程中，所使用的工艺流程没有标准化，食品防腐剂的添加具有随意性，所以对于其生产工艺流程的标准化尤为迫切。