去白细胞滤器对血液产品质量的影响

王雅卿 姚美辰

为患者输注去除白细胞的红细胞制品,是目前能够有效降低或者防止一些输血不良反应及输血相关性疾病传染的一项技术,这项技术能够成功应用于临床得益于一次性使用白细胞过滤器的诞生［1］。由于在多种去除血液中白细胞的方法中,去白细胞滤器过滤法是最有效、最便捷的［2］,因此适用于血站的一次性白细胞滤器现已得到了广泛的应用。一次性白细胞滤器通常分为隔夜过滤型和即采即滤型两种,前者适用于采血8 h 以后进行过滤,冷藏保存的时间比较长,只能适用于制备普通冰冻血浆；后者则应用在采血2～8 h内的过滤分离,要求当天过滤,适用于新鲜冰冻血浆的制备［3］。目前相关报道中大家均比较关注白细胞过滤情况［4］,但过滤也可能对其它血液成分产生不同程度的影响,其中红细胞的回收率和血浆中的FHb 浓度也会对输注红细胞悬液的效果产生不同程度的影响。而全血经过滤后,血浆被分离制成新鲜浆等血浆制品,其中新鲜浆制品中的FIB 和FⅧ的活性对临床患者输注后疗效产生决定性影响,而这些凝血因子也会受到外源性生物过滤材料的影响,对血浆中凝血因子的生物活性和血浆蛋白的含量产生一定程度的影响。因此为了解 T-200 型一次性使用白细胞过滤器血袋所采用的去白细胞滤器对相关血液产品质量的影响,作者对其去除白细胞效果、FHb 浓度、FIB 和FⅧ的活性等相关质量指标进行了检测和分析,现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2019 年9 月～2020 年1 月街头采集的自愿无偿献血者血液全血40 袋,规格均为 200 ml,在实验过程中均使用导管或者转移袋,通过无菌接口机分装实验用血液样本,采样全程符合无菌操作,采样后不影响血液产品的质量。

1.2 仪器与试剂 XT-1800i 血细胞计数仪(SYSMEX公司),CS-2000i 全自动凝血分析仪(SYSMEX 公司),Cobas-C111 全自动生化分析仪(Roche 公司),CH 光学显微镜(奥林帕斯),Nageotte 白细胞大容量计数池(HAUSSER SCIENTIFIC HORSHAM,PAUSA),LBG-22低温滤白柜(天津正源公司)。血浆FHb 试剂盒(北京瑞尔达公司),FⅧ活性测定试剂盒(SYSMEX 公司),纤维蛋白原测定试剂盒(SYSMEX 公司),活化部分凝血活酶时间测定试剂盒(SYSMEX 公司),凝血因子正常值质控品(SYSMEX 公司)。

1.3 方法 根据《血站技术操作规程》2019 版要求,选择采集过程流畅的献血者血液(采集时间≤5 min)。采集后放置(4±2)℃环境保存,6～8 h 内完成全血过滤,分别检测全血和过滤后去白全血的FHb 浓度、FIB 和FⅧ活性,及过滤后红细胞回收率、白细胞计数、去白细胞滤器过滤时间。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 白细胞过滤器滤除检测结果 对过滤后的去白全血进行检测,红细胞回收率均可达到>85.00%,白细胞计数均<2.5×106个/单位,且全部滤器过滤时间 <10 min。见表1。

表1 白细胞过滤器滤除检测结果

2.2 过滤前后的FHb、FIB、FⅧ水平比较 过滤后,血浆中的FHb 为(0.076±0.016)g/L,高于过滤前的(0.039±0.019)g/L；血浆中的FIB 为(1.860±0.230)g/L,低于过滤前的(2.010±0.290)g/L；血浆中的FⅧ为(91.100±7.900)%,低于过滤前的(95.300±9.200)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 过滤前后的FHb、FIB、FⅧ水平比较()

表2 过滤前后的FHb、FIB、FⅧ水平比较()

注：与过滤前比较,aP<0.05

3 讨论

全血或红细胞悬液通过去白细胞滤器过滤后,国内外标准中都对过滤后血液成分中剩余白细胞计数进行了限制,标准为≤2.5×106个/单位［5］,红细胞回收率应≥85.00%,FHb≤0.530 g/L,每单位全血过滤时间≤10 min［6］。选取适当的血袋及部位取样,需要保证最终样品能够代表过滤后产品袋中的真实情况,又要方便操作,取样过程中应兼顾血液的安全性和样本的有效性。白细胞是血液中的一个重要组成部分,是人体免疫防御系统的重要构成,输血反应的原因中由白细胞引起的占比最高,临床实践表明白细胞输注到异体内可能产生有害的副作用,如非溶血性发热性输血反应(NHFTR)、人类白细胞抗原(HLA)同种异体免疫反应、血小板输注无效等,同时还有可能引起嗜白细胞病毒传染病的感染［7］。相关研究表明［8］,血液保存过程中因为白细胞寿命比较短,随着保存时间的不断延长,白细胞开始释放和生产细胞因子,而溶血反应的发生多是由于血液制品中存在的高浓度细胞因子引发的。去白细胞滤器是现有去除血液产品中白细胞的最简单、有效的方法,采用的过滤材料一般具有吸附和滤筛作用,可将血液中的部分微聚体、白细胞等滞留在过滤材料中,但不应影响其它血液成分的通过,以达到除去大部分白细胞的目的。在本实验中白细胞残留量计数是很重要的判断指标,在过滤结束后排气过程中可将样本打入旁路中,既不影响过滤后的下一步操作,且使用滤器下方导管中血液作为样本,方便、安全并能够节约血液。血细胞计数仪虽自动化程度高,适用于白细胞含量的快速批量检测,但对过滤后的低白细胞残留量标本检测结果不准确［9］,本实验中所采集的全血,在经过TA-RFB T-200 型去白细胞过滤器过滤后,使用Nageotte 白细胞计数盘进行残余白细胞计数,结果均<2.5×106个/单位,合格率为100%,可见此款去白细胞滤器对血液中白细胞的去除效果满意,可以满足临床降低或消除白细胞引起输血不良反应的需要。实验中所有全血过滤后的红细胞回收率检测均>85.00%,过滤致红细胞的损失率符合相关标准。实验中所有抽取的全血充分混匀,没有凝块,避免过滤不畅等干扰因素［10］,过程顺畅,过滤时间均 <10 min,100%达到标准要求。红细胞通过滤器的过程中,通过滤材孔道时会受到流体静态压力、切变率、孔形状、流速等因素影响,可能会有一定的损伤［11］。不合格滤器可能导致过滤后的血浆FHb 超标,可能与红细胞通过滤层时所受的切变力有关［12］。一般若使用的滤器合格,且按要求自然重力过滤,不会发生溶血情况；但如若滤器管路的边缘扭结,或采血主袋管路上的易折塞入口处等也可导致红细胞部分损伤,故应对滤白后血液及时进行质量控制。本实验结果中过滤后血浆FHb 含量均<0.530 g/L,且远远小于该标准,说明该滤器对红细胞的损伤在合格范围内,且与过滤前的全血血浆FHb 含量相比较,具有统计学意义。新鲜冰冻血浆中包含各种凝血因子、清蛋白及免疫球蛋白等,临床上主要应用在凝血因子的补充,几乎包括全血中的全部凝血因子和蛋白,包括不稳定的凝血因子(如FⅤ、FⅧ等),因此凝血因子的活性高低决定着新鲜冰冻血浆的质量［13］。去白细胞过滤器产生作用的机制主要是因为阻滞作用、表面张力和电荷密度等。全血中的凝血因子因其分子大小远远小于滤器中滤材的孔径,滤材阻滞作用不会对其产生影响,但滤材的表面张力与电荷密度在过滤中可能对凝血因子有一定的吸附作 用［14］。不同滤器中采用的过滤材料可能具有不同结构和表面特性,吸附作用或其它作用机制导致的凝血途径活化,均可能造成不同程度的凝血因子消耗。本实验中,对过滤后的去白全血进行检测,红细胞回收率均可达到>85.00%,白细胞计数均<2.5×106个/单位,且全部滤器过滤时间<10 min。过滤后,血浆中的FHb 高于过滤前,FIB、FⅧ低于过滤前,差异均有统计学意义(P<0.05)。

使用不同的血液保养液及滤器中采用的不同滤材都可能对通过滤器的血液成分产生质量影响,因此在选择一次性使用白细胞过滤器血袋的时候,应综合考虑采用的血液保养液成分类型、过滤器去白细胞效果、过滤速度、滤材介质电荷及粘附作用等。选择过滤器的时候,滤材应具有较好的生物学相容性,使用前应评价滤器去除白细胞的效果及对红细胞和凝血因子等有效血液成分的影响,确保去除白细胞后的血液产品能够安全、并有效地满足临床需求。