血清可溶性甘露糖受体在肝癌患者中的表达及其临床意义

黄程荣，李太平，汪 静，张 浩，谢 然，王 琴

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球第六大常见癌症，其发病率和病死率不断上升，早期5年总生存率为50%～70%，晚期低于5%。目前甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)作为肝癌诊断的经典血清学标志，在部分肝癌患者中呈阴性，易造成临床漏诊而使部分患者失去最佳的治疗机会。因此，单一进行AFP检测无法对肝癌的诊断及预后提供准确信息。

甘露糖受体(mannose receptor，MR)主要结合在M2型巨噬细胞膜上，在维持内稳态、识别病原、抗原递呈等过程中发挥重要作用。可溶性甘露糖受体(soluble mannose receptor，sMR)由内源性细胞金属蛋白酶对膜结合形式的MR水解切割释放，在外周血清中表达。M2型巨噬细胞，是肿瘤微环境中最丰富的免疫抑制细胞，可通过分泌抑制性细胞因子下调免疫应答。有研究表明，血清sMR水平在多种恶性肿瘤中会升高，并与其不良预后及肿瘤的侵袭转移密切相关。目前关于sMR在肝癌中的表达水平及临床意义鲜有报道，该研究推测血清sMR水平在肝癌患者中可能会升高，并与疾病的进展有关。

1 材料与方法

1.1 病例资料

选取2018年8月—2020年2月在安徽医科大学第二附属医院住院确诊的肝癌患者129例，慢性乙型肝炎患者61例，健康体检者25例作为研究对象。其中所有肝癌患者均符合《原发性肝癌诊疗规范(2019版)》标准，排除转移性肝癌、接受过任何肝癌治疗及合并其他恶性肿瘤疾病患者，慢性乙型肝炎患者诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》标准，健康体检者经检测排除肝脏、肾脏、心血管等疾病。

1.2 仪器与试剂

采用贝克曼AU-5800全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特公司)检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)，血清天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)，血清总胆红素(total bilirubin，TBIL)，血清白蛋白(albumin，ALB)。采用罗氏全自动电化学发光分析仪(瑞士罗氏公司)检测血清AFP，定义血清AFP检测低于20 ng/L为AFP阴性。血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)检测采用雅培全自动化学发光分析仪(上海雅培贸易有限公司)。血清sMR检测采用MR检测试剂盒(ELISA)(美国GTX公司)定量测定，吸光度使用microplate reader(美国BioTek公司)测量。

1.3 方法

收集研究对象治疗前空腹全血，并于室温下4 000 r/min离心5 min制备血清，并于-80 ℃冰箱保存备用。用生化分析仪及配套的试剂盒采用NADH法定量检测血清中ALT及AST、重氮试剂法定量检测TBIL、溴甲酚绿法检测ALB水平；使用罗氏全自动电化学发光分析仪及其配套试剂盒采用化学发光法定量检测血清中AFP水平；雅培全自动化学发光分析仪及其配套试剂盒采用化学发光法定量检测血清中HBsAg水平；sMR水平使用MR检测试剂盒采用ELISA法定量测定，样品及标准品在450 nm处用酶标仪测量其吸光度(OD)值，并制作标准曲线。

2 结果

2.1 病例资料

该研究共纳入研究对象205例，其中初诊肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者129例，慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者61例，健康对照(healthy control，HC)者25例。所有患者临床特征及数据见表1。HCC患者AFP及sMR水平高于其他两组，而ALB水平低于其他两组，ALT及AST水平低于CHB组高于HC组。

表1 不同分组之间检测指标分析结果

2.2 HCC患者不同分组sMR水平比较

血清sMR检测结果显示，HCC患者血清sMR水平高于CHB患者及HC，差异有统计学意义(

P

<0.001)(图1A)。根据巴塞罗那临床肝癌(barcelona clinic liver cancer，BCLC)分期分类标准将HCC患者的疾病严重程度分为巴塞罗那A、B、C、D期(早、中、晚、终末期)，其中A期27例，B期39例，C期42例，D期21例。结果提示随着疾病进展，肝癌患者体内sMR水平升高，差异有统计学意义(

P

<0.05)(图1B)。

图1 不同分组患者血清sMR水平比较

2.3 sMR及AFP与肝癌病理资料相关性

HCC患者血清中sMR水平在肝癌组肿瘤直径>5 cm及多发结节组中均升高(

P

<0.05)(图2A、B)。而肝癌患者血清中AFP水平与肿瘤大小及数目差异无显著性(表2)。

表2 肝癌患者血清AFP与肿瘤临床病理相关性

图2 肝癌患者血清sMR水平与肿瘤病理资料相关性

2.4 血清sMR及AFP对肝癌患者的诊断效能

以不同研究对象作为对照组绘制ROC曲线评估sMR及AFP对HCC患者的诊断效能，结果见下图3，以HC组或非肝癌患者为对照组sMR曲线下面积均高于AFP，且当AFP与sMR联合检测时，ROC曲线下面积均高于AFP及sMR。AFP与sMR+AFP相比

Z

值因病理资料不全，肿瘤大小分组中实际纳入肝癌患者104例分别为4.858、5.085(

P

<0.001)，说明AFP+sMR是HCC患者诊断的良好预测指标。以非肝癌组为对照组，AFP阴性HCC患者(49例)作为病例组，结果显示sMR对于AFP阴性的HCC患者也有一定的补充诊断价值。

图3 血清sMR与AFP检测肝癌ROC曲线

2.5 血清sMR及AFP联合检测对早期肝癌的诊断价值

以非肝癌患者为对照组，巴塞罗那A期HCC患者为病例组，绘制ROC曲线见图4，结果显示sMR曲线下面积高于AFP，差异无统计学意义，当AFP与sMR联合检测时，AFP与sMR+AFP相比

Z

值为2.028(

P

<0.05)，sMR+AFP对早期HCC的诊断价值高于AFP。

图4 血清sMR与AFP检测巴塞罗那A期HCC患者ROC曲线

3 讨论

HCC是全球最常见的癌症之一，尽管近年来其治疗水平不断上升，但预后仍不理想，大多数肝癌患者诊断时处于晚期阶段，治疗的机会是有限的，主要是由于缺少有前途和可靠的生物标志物用于肿瘤的早期诊断。目前对于肝癌的筛查主要采取B超+AFP检测，AFP作为HCC筛查的经典血清学标记物，敏感性及特异性均不高，因此，单一的血清AFP水平作为HCC的筛查指标具有一定的局限性。

巨噬细胞在功能上分为两种不同的亚型：M1和M2型。其中M2型巨噬细胞可通过促进血管生成、免疫抑制和肿瘤细胞的激活促进肿瘤的形成，并具有促进肿瘤细胞转移、增殖和侵袭的作用，其细胞表面高表达CD206分子即MR。sMR由内源性细胞金属蛋白酶对膜结合形式的MR水解切割释放。有研究表明，血清sMR水平在结直肠癌患者中高表达，并与淋巴结转移呈正相关，胃癌患者术前血清sMR水平显著升高，并与胃癌淋巴和远处转移及不良预后相关，并且血清sMR水平在27%的多发性骨髓瘤患者中会升高，治疗后降低。而在肝脏中，血清sMR水平与CHB患者肝炎活性及肝活检纤维化程度有关，并且可通过抗病毒药物的治疗而下降，另外在肝硬化患者中，血清sMR水平与疾病严重程度相关，其对于预测肝硬化相关并发症的发生及预后有一定作用。该研究同样表明，在CHB患者中，血清sMR水平显著高于健康对照，这与先前的研究结果相似，而在HCC患者体内，血清sMR水平显著高于HC及CHB患者，随着疾病进展，sMR水平逐渐升高，并且HCC患者血清中sMR水平与肿瘤的大小及数目相关，这些结果表明，血清sMR水平能很好地区分慢性肝病及HCC患者，并且对于疾病的严重程度及预后具有一定的预测价值。

该研究通过绘制ROC曲线来评估血清sMR及AFP对HCC的诊断效能，sMR曲线下面积及敏感性、特异性均高于AFP，表明sMR对于HCC的诊断效能优于AFP，当两项指标联合检测时，其曲线下面积高于单一指标，并且当以非肝癌患者作为对照，AFP阴性HCC患者作为病例组时，sMR对HCC患者的诊断的敏感性及特异性均较高，表明sMR对于AFP阴性的肝癌患者也有一定的补充诊断价值。研究表明 40%～50%的患者在早期HCC诊断中，处于可接受治疗的阶段，根据巴塞罗那临床肝癌分期分类指南，对于早期HCC患者(BCLC-A)可采用根治性手术治疗，建议中间阶段患者(BCLC-B)采用肝动脉化疗栓塞术实现局部控制和缓解，对于晚期(BCLC-C)患者预后多不良，预期中位生存期为6个月，而该结果显示在巴塞罗那A期HCC患者中，当AFP+sMR联合检测时，其诊断的准确性显著高于AFP，sMR+AFP联合检测对HCC的诊断效能优于AFP单一检测。