支气管哮喘患儿外周血调节性T淋巴细胞水平IL-10 sIgE水平及其临床意义

王汝琼，李小明，林道炯，吴守业，周琼花

(海南省妇女儿童医学中心，海南 海口 570000)

支气管哮喘作为一种常见的呼吸系统疾病，在临床上通常表现为反复发作性喘息以及胸闷、咳嗽或呼吸困难，不过该病病因复杂，通常认为该病发作与免疫耐受的破坏有关[1,2]，由于免疫耐受在抗原刺激下，对抗原特异性应答的T细胞与B细胞不能被激活，即不能执行正常的免疫应答，而当该过程遭受到破坏后，则会对超敏性疾病和自身免疫性疾病产生排斥反应。另外根据相关研究[3]报道显示，在哮喘的发病过程中调节性T淋巴细胞(Treg)发挥比较重要作用，可通过其水平来评估哮喘的严重程度。Treg包括两种类型，一类为天然调节性T淋巴细胞，主要以细胞与细胞接触信号性方式发挥调节性作用；另一类为适应性调节性T淋巴细胞(iTreg)，包括I型调节性T细胞(Tr1)和Th3等细胞，主要通过分泌白细胞介素(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)来下调免疫反应[4]。目前，关于可分泌IL-10的iTreg和Tr1与哮喘的关系还少有报道。本研究探讨户尘螨过敏的支气管哮喘患儿外周血调节性T淋巴细胞水平、IL-10和特异性IgE(sIgE)水平，取得的结果如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2018年2月至2020年2月我院收治的163例户尘螨过敏的支气管哮喘患儿作为研究组。纳入标准：①符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南》[5]中诊断标准，即喘息反复发作且发作时肺部闻及喘鸣音者；②户尘螨过敏原皮肤点刺试验为阳性，且户尘螨特异性免疫球蛋白(sIg)E≥0.7kU/L者；③临床资料完整且积极配合检查者；④同意签署知情同意书者。排除标准：①肺部患有其他疾病(如呼吸衰竭、肺栓塞等)者；②心肝肾等功能出现异常者；③患有精神方面疾病者。根据患儿病情情况将其依次分为轻度、中度和重度患者，分别为52例、63例和48例。另外选取接受体检的健康同龄儿童50例作为对照组。本研究通过本院伦理委员会审批。

1.2方法：两组儿童均于清晨采集外周静脉血5mL，取其中2mL用来检测IL-10和sIgE水平，留置的3mL用来检测调节性T淋巴细胞水平。其中具体检测方法如下：①检测IL-10和sIgE水平方法：先将取好的外周静脉血于室温放置1h，然后以2000r/min的转速离心10min，取上清液留置于-70℃冰箱备用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10水平，严格按照试剂盒说明书进行操作。sIgE水平则可根据人总免疫球蛋白E定量检测试剂盒操作指南进行测定，其中每个样本均要求同一检测者进行重复测量3次，之后取其平均值，同时采取正确的统计学分析方法进行分析以控制结果偏倚。②检测测调节性T淋巴细胞水平方法：将留置的3mL外周静脉血使用肝素钠抗凝后，然后采用淋巴细胞分离液将外周血淋巴细胞进行分离，再将淋巴细胞浓度用含10%小牛血清的完全RPMI1640培养基调整为2×109L-1，再于24孔细胞培养板内每孔接种1mL，同时给予20g/L的户尘螨浸出液刺激后，再将其放于37℃含有5%CO2的饱和湿度细胞培养箱中培养48h。培养结束后根据试剂盒说明书对标本进行处理，再采用型号为FACSCantoII的流式细胞分析仪检测iTreg和Trl细胞百分比，每个样本均重复上机检测3次。

1.3观察指标：①比较两组儿童肺功能情况:其中肺功能可采用日本捷斯特HI-801便携式肺功能仪进行测定，主要检测指标包括：第1秒用力呼气容积(FEV1)、第1秒用力呼气量占用力肺活量比值(FEV1/FVC)和呼气峰值流速(PEF)，由同一检测者对患者采取3次重复测量之后，取其平均值。②比较两组儿童调节性T淋巴细胞水平:其中调节性T淋巴细胞水平主要检测iTreg(CD4+CD25+Foxp3+IL-10+)和Trl(CD4+CD25+Foxp3-IL-10+)细胞百分比。③比较两组儿童免疫因子水平:主要包括以下指标：IL-10、sIgE和TGF-β。

2 结 果

2.1比较各组儿童一般临床资料：各组性别、年龄、病程和户尘螨sIgE等一般资料比较发现无差异(P>0.05)，见表1。

表1 各组一般临床资料比较

2.2比较各组儿童肺功能情况：各组FEV1、FEV1/FVC和PEF值比较均具有统计学意义(P<0.05)，其中患病组与对照组相比，发现病情程度越严重，FEV1、FEV1/FVC和PEF值则越小，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 各组儿童肺功能情况比较

2.3比较各组儿童调节性T淋巴细胞水平:各组iTreg和Tr1细胞所占比例比较均具有统计学意义(P<0.05)，其中患病组与对照组相比，发现病情程度越严重，iTreg和Tr1细胞所占比例越小，且差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 各组儿童调节性T淋巴细胞水平比较

2.4比较两组儿童免疫因子水平：各组IL-10、TGF-β和sIgE水平比较均具有统计学意义(P<0.05)，其中患病组与对照组比较，发现病情程度越严重，IL-10、TGF-β水平越低(P<0.05)，而sIgE水平则越高(P<0.05)，见表4。

表4 两组儿童免疫因子水平比较

3 讨 论

支气管哮喘是以慢性气道炎症与气道高反应性为主要特征的一种异质性疾病，涉及多种细胞及和细胞组分[6]。调节性T淋巴细胞作为一类具有免疫抑制作用的细胞群，其中传统鉴别调节性T细胞的主要方法为对标记的CD4+和CD25+进行检测，不过由于感染免疫应答后被活化的T细胞也会表达CD25+，因而难易区分调节性T细胞。目前，根据相关研究报道[7]显示，Foxp3是调节性T细特异性的标志物，因此检测调节性T细胞水平可通过检测CD4+CD25+Foxp3+IL-10+水平来实现。

由于肺功能指标可直接反应患儿呼吸系统状态，因此对此类患儿进行此方面的研究也极为重要，而PEF、FEV1及FVC则为肺功能的重要检测指标。本研究结果显示，各组FEV1、FEV1/FVC和PEF值比较均具有统计学意义(P<0.05)，其患病组与对照组相比，发现病情程度越严重，FEV1、FEV1/FVC和PEF值则越小，说明上述指标不仅对于疾病的诊断有较高的反应价值，同时对于疾病的严重程度的评估也具有积极的临床意义。各组iTreg和Tr1细胞所占比例比较均具有统计学意义(P<0.05)，其中患病组与对照组相比，发现病情程度越严重，iTreg和Tr1细胞所占比例越小，且差异具有统计学意义(P<0.05)，在相关临床研究[8]结果中，也证明调节性T淋巴细胞不仅对自身抗原的免疫反应具有抑制作用，另外还可调控其它免疫细胞的活动，在多种免疫性疾病中均呈紊乱状态。在本研究中，则表明病情严重程度与调节性T淋巴细胞也具有一定的相关性，即水平越低，其病情越严重，在临床上可作为判定支气管哮喘严重程度的一项重要指标。

对各组儿童免疫因子水平进行比较，发现患病组与对照组比较，其病情程度越严重，IL-10、TGF-β水平越低(P<0.05)，而sIgE水平则越高(P<0.05)，因为iTreg主要通过分泌IL-10和转TGF-β1来发挥免疫负调控作用，而通过检测其哮喘患儿体内iTreg水平发现，iTreg与病情呈正相关，故IL-10和TGF-β1水平则与病情严重程度呈负相关。另外由于由户尘螨所引起的哮喘为IgE介导的T细胞依赖的变应性炎症，是机体对变应原的一种超敏反应，其表现为变应原和抗体结合后产生的组织反应，参与变态反应的抗体主要是IgE，而在患病组患儿中sIgE水平升高反映了过敏原暴露时机体产生的过敏反应，因此可将sIgE作为支气管哮喘是否处于急性发作期提供理论依据[9]，而将上述指标进行联合检测则有助于患者在临床治疗过程中，为疾病转归提供参考依据。

综上所述，对支气管哮喘患儿肺功能指标以及分泌IL-10的调节性T淋巴细胞和免疫因子IL-10、TGF-β和sIgE水平的检测，在临床上不仅有助于评估该疾病的严重程度，同时还有利于为疾病治疗过程中的转归提供参考依据。