HPLC-电化学检测法测定美沙拉秦的成分

程鑫 程华

（1.辽宁省锦州市疾病预防控制中心 辽宁锦州 121000；2.锦州医科大学附属第一医院）

1 前言

美沙拉秦诞生于20世纪80年代，主要功效是治疗肠炎及其并发症，当时科学水平并不先进，却已具有显著效果。本文主要论述了如何对这一药物进行有效检测。其中液相系统以及气相系统是进行检测的主要组成部分，本文采用的方式是电化学检测法，结论更加准确，能够达到检测的目的。

目前，高压液相色谱仪通常用玻璃碳为材料来制作工作电极和电化学检测器，例如PU4022（PYE UNICAM，Phillips）电化学检测器及ModelLC17A（Bioanalytical systemInc）。这种电化学检测器结构复杂，不易保持系统的完全密封，而且玻璃碳电极非常昂贵，电极制作技术复杂。当电极表面被污染时，需要将其机械磨光，既费时又费力。长期工作时，其稳定性和重现性将变差。近年来逐渐出现被其他结构简单、价格便宜以及性能优异的电化学检测器替代的趋势。碳丝流通电极在电化学分析仪器中，显示出极大优越性：其制作技术简单，电极材料便宜；电极表面积很小，碳丝流通池上的电压降很小，在电化学系统中，可用低浓度的电解质；灵敏度高。但用于电位溶出分析中的碳丝流通电极不能用于HPLC中，因为用于封电极管针孔的环氧树脂胶在有机溶剂中不稳定。

为制造新型的电化学检测器而提供的一种新型碳丝流通电极，高压液相色谱仪电化学检测器由至少一个工作电极和一个参比电极及一个对电极用连接管顺次连接构成。工作电极和参比电极为管式电极，电极丝在电极管中呈纵向设置，插口被封住，在电极管上涂有一层导电胶，通过此导电胶或在导电胶下缠绕一根金属导线，使电极丝与控制器相连接；在此电化学检测器中，工作电极为管式碳丝流通电极，电极管中的电极丝是直径为3～25μm的碳丝，参比电极为管式银丝电极，电极管中的电极丝是直径为0.01～2 mm镀Ag3PO4的银丝，电极管和连接管为有机塑料管；电极管上的导电胶为碳粉导电胶或银粉导电胶，所述的碳粉导电胶是将目数大于150目的碳粉与SDS胶（北京金山粘合剂厂）以2∶1（重量比）的比例混合，加乙酸乙酯作溶剂调配而成。

2 仪器与试药

在检测前，首先要对相应的仪器以及试药进行充分的认识，仪器主要采用型号为Aglient1200型的液相色谱仪，可以保证检测的效果。这一部分中包含2个重要的组成部分：电化学检测器、高效液相色谱仪。只有将这些仪器进行有机结合，共同使用，才能发挥出最大的功效，提高检测的准确度。对于试药的选取，主要选择某制药公司提供的不同批号的药物，并且每一批号药物中含有美沙拉秦的含量都不尽相同，有助于在这之间进行相应的对比，以得出最终的结论。

3 方法与结果

3.1 色谱条件

首先，对色谱柱的数据进行调整，保证其满足实验的要求。选用AngilentC-18色谱柱，尺寸：0.25 m×4.6 mm；固定相：色谱级球形十八烷基硅烷键合硅胶（3μm）；柱温：40℃。流动相：甲醇；溶液A（15：85）。（溶液A：含磷酸二氢钾1.41 g/l、二水合磷酸氢二钠0.47 g/l，用42 g/L氢氧化钠溶液调节pH至8.0。）流速：1.0 ml/min。检测器：紫外分光光度计，检测波长205 nm。控制每分钟流动的速度，通常情况下为1.5ml/min。将工作中的电极调配好，选用玻碳圆盘电极，效果更加。同时，作为比照的电极，选用含有银以及氯化银的电极，将电压调整到0.7 V以上，将溶液缓慢地导入色谱柱中，含量为20μl，根据对不同时间段的情况进行对比可知，流动相呈现不同的效果。

3.2 系统适用性试验

取1、2、3和4对照品适量，加流动相A溶解并稀释制成1浓度分别为0.5 mg、1μg、0.1μg和0.1μg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液，进样测定。色谱图见图1。

图1 典型色谱图

3.3 线性范围

根据规定选取相应的对照品，保证能够满足实验中所需要的含量，在此基础上，将其进行稀释处理。具体方法是将色谱柱中的流动相A添加至对照品中，将其稀释成一定容量的溶液，同时，为了精准地测量最终结果，要进行多次实验，根据不同实验次数，按照单数的形式分别进行提取l ml、3 ml等溶液含量，以此类推，最多为9 ml。将其安放在规定的位置上，然后再均匀地摇晃，直至试管中的溶液出现变化。对不同规格的试药进行相应检测，最终得出结论。

同理，在实验2中，称取相应含量的试药，并进行实验，将流动相A添加在其中，均匀地摇晃，并进行稀释，最终得到2μg/ml的试剂溶液。将不同含量的溶液按照一定的标准均匀地放置在事先准备好的量瓶中，对其线性范围进行测量，最终得出相应结论，测得的结果与实验1中的结果一致。继续进行实验3以及实验4，对线性范围进行相应检测，详细的检测限比较见表1。在实验1中，检测到线性范围在0.21μl/ml～1.8μl/ml之间；在实验2以及后续的实验中，均检测出相应的线性范围在0.2μl/ml～1.8μl/ml。根据线性范围的测定，可以得知该药物具有较高的灵敏度，在检测的过程中，具有较高的精准性，满足实验要求。

表1 检测限比较（ng，S/N=5）

3.4 精密度和稳定性试验

取“2.5”项下的对照品的混合溶液重复测定6次，1、2、3和4的峰面积RSD分别为0.5%、0.5%、1.6%和1.5%。取“2.5”项下的对照品的混合溶液和供试品溶液，分别放置0、2、4、6和8h后，进样测定。结果1峰面积和1峰面积百分比、各有关物质峰面积百分比均无明显变化（RSD小于2%），表明溶液在8h内稳定。

3.5 样品测定

精密称取1对照品适量，加流动相A溶解并稀释制成0.5 mg/ml的溶液作为供试品溶液。另精密称取1、2、3、4对照品适量，加流动相A溶解并稀释，制成分别包含1、2、3、4对照品的1、1、0.1和0.1g/ml的对照品混合溶液。取“2.2”项下的系统适用性试验溶液进样，调节检测灵敏度，使3峰高约为满量程的20%。再取对照品混合溶液与供试品溶液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。结果3批1样品中均未检出2、3、4（美国药典与欧洲药典对2、3和4的限度分别为0.2、0.02和0.02%）。

4 结论

综上所述，本文在对美沙拉秦进行检测的过程中，主要选取了2种相应的试药，规格及批号均不相同，目的是保证实验结果的精准性，最终得出的相关结论符合国家对于药品的相关规定，并且满足国际药典的要求。在今后的生产环节中，可以根据检测出的数据，进行相关药物实验，以此作为重要的数据支持，有利于提升美沙拉秦药物性能。