TRFIA、TPPA及TRUST试验在梅毒检测中的效果对比研究

苏东梅 车汉荣 彭燕

（茂名市中医院 广东茂名 525000）

1 前言

梅毒是一种临床常见慢性传染性疾病，以梅毒螺旋体为主要致病体。性接触与血液传播均可导致机体感染，危险性极大，既可对机体全身器官造成损害，还可通过胎盘传播导致流产、早产、胎传梅毒，严重时危及生命[1]。患者发病初期一般无全身症状，通常以硬下疳、硬化性淋巴结炎为主要临床表现，由于症状不明显，常被患者忽略，随着病情加重，多种症状逐渐显现出来。临床上梅毒检测方法众多，时间分辨免疫荧光法（TRFIA）、颗粒凝集试验（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等均可实现梅毒检测，为明确各种方法在梅毒诊断中应用价值，本次研究对TRFIA、TPPA及TRUST 3种方法的梅毒检测效果进行研究分析。

2 资料与方法

2.1 一般资料

选取2019年11月—2020年4月期间在我院接受梅毒检测的627例受检者作为研究对象。纳入标准：年龄≥18岁；未患其他传染性、恶性肿瘤、血液系统及代谢系统性疾病。排除标准：不愿参与研究；采血后需手术。受检者男性345例，女性282例；年龄18～66岁，平均（43.5±6.0）岁；伴生殖器周围斑块55例，伴腹股沟淋巴结肿大104例，其余468例受检者伴不同程度皮肤黏膜受损。

2.2 检测方法

所有受检者均于清晨取空腹5 mL静脉血，常温静置5 min后行离心处理获得血清，采用TRFIA、TPPA及TRUST 3种方法行梅毒检测。

2.2.1TRFIA检测

选用苏州新波生物技术有限公司研发AT2000时间分辨全自动检测系统，室温下检测平衡板条5～10 min，取血清样本50μL移至微孔板底部，另加入生物素标记抗原，于室温下孵育45 min。孵育完成后进行洗涤，取EU标记链亲和素至微孔板底部，于室温下孵育15 min，孵育后再进行洗涤，加入增强液后进行荧光计数值测量[2]。

2.2.2TPPA检测

选用日本富士生物制品株式会社生产TPPA试剂盒。检测前30 min于冰箱中取出血清标本和试剂，放置于无菌环境使其温度恢复至室温。每份样品作4孔，选用移液器取100滴血清稀释液，放入微量反应板第1孔，各取25滴放入第2～4孔。选用移液器，取血清样本25滴至第1孔，再以2n方式从第1孔稀释至第4孔，取25滴未致敏粒子滴入第3孔，取25滴致敏粒子至第4孔。晃动微量反应板30 s使其充分混合，控制晃动强度，避免微量反应板的内容物溅出。随后加盖至湿盒内，室温下水平静置2 h后，观察结果[3]。

2.2.3TRUST检测

选用上海荣盛生物技术有限公司生产TRUST试剂盒，检测前于室温下预温30 min。预温完成后，取50滴血清至试验卡片圈中，均匀涂布，使血清样本均匀布于整个卡圈，切记不要让血清样本溢出圈外。摇匀抗原，使用专用滴管针头取抗原添加至标本圈中，添加时需与标本圈垂直，每个标本圈添加1滴（约17约至）抗原。将卡片置于水平旋转仪，盖好保湿盖，旋转8 min，转速为100 r/min。旋转结束后，取出卡片，放置在亮度处，肉眼观察结果[4]。

2.3 判定标准

TRFIA判定标准：测量标本S/CO值≥1为阳性，反之为阴性。TPPA判定标准：观察第3孔是否出现凝集现象，确定试验有效后，观察第4孔是否产生凝集反应，产生为阳性，未产生为阴性。TRUST判定标准：观察圈内发现有中量或大量红色絮状物，液体清亮，为阳性；圈内发现少量红色絮状物，液体浑浊，为弱阳性；圈内发现碳颗粒聚集一点或均匀分散，为阴性。

2.4 观察指标

观察3种方法检测阳性率和阴性率；本次研究以脑脊液检查作为梅毒检测的金标准，观察3种方法敏感度、特异度及准确度等诊断效能；观察3种方法检测一致率。

2.5 统计学方法

通过Dataload 5.4.10软件录入数据，选用Graph PadPrism8.0软件比对数据，计量资料进行t检验。将P<0.05视为统计学差异显著。

3 结果

3.1 3种方法检测结果，详见表1。

表1 3种方法检测结果（n，%）

3.2 3种方法诊断效能，详见表2。

表2 3种方法诊断效能（n，%）

3.3 3种方法检测一致率为70.65%，详见表3。

表3 3种方法检测一致性

4 讨论

据统计全球每年约有1 200万例梅毒新增病例，2019年我国梅毒新增病例达54万例，梅毒患者人数不断增多，已成为当今社会备受关注的问题。积极采取有效方法准确检测梅毒，为患者制定早期治疗方案起到重要作用。对于改善患者预后、保障患者生命健康，具有重要意义[5]。TRFIA、TPPA和TRUST均为临床梅毒检测的常用方法，TRFIA试验以镧系金属元素螯合物为标记物，通过测量样本发射荧光强度，实现梅毒特异性抗体检测，是一种新型体外超微量检测分析技术。本次研究中，TRFIA检测具有较高敏感度（97.69%）和准确度（96.49%），但检测特异度（61.90%）相对较低，结果表明TRFIA诊断效能优异，自动化操作，客观因素对检测结果造成影响较小。但可能会在检测时出现假阳性，因此采用TRFIA检测梅毒为阳性时，需再进行梅毒检测以获得更为准确的检测结果。TPPA试验是通过提取Nichols株梅毒螺旋体特异性抗原，以检测梅毒特异性抗体的检测方法，本次研究TPPA检测敏感度（97.69%）、特异度（66.67%）及准确度（96.65%）均达到较高水平，但相比其他2种检测方法，检测步骤相对复杂，且检测费用高。TRUST试验是以心磷脂、卵磷脂、胆固醇等为抗原，检验血清中反应素的检测方法。临床常将其与TPPA联合使用，以提高梅毒检测准确性。本次研究TRUST检测敏感度（76.40%）、特异度（57.14%）及准确度（75.76%）均低于其他2种方法。采用TRUST检测，梅毒更容易发生假阴性，延误患者治疗时机，但其检测费用低廉。另外结果显示，3种方法检测一致率仅为70.65%，可见其检测精准性存在一定差距。因此，在梅毒检测时，可根据受检者具体情况，选择合适方法对其进行梅毒检测。适当联合检测，以获得更为准确的检测结果，为患者在发病初期获得有效治疗提供保障。

综上所述，3种方法在梅毒检测中各有优势，需结合受检者具体情况选择合适方法，临床也可进行联合检测，提高诊断准确性。