限制性抗原亲和力酶免法检测HIV-1新发感染的重复性与稳定性评价

纪琳莹 郭川 林洁敏

（汕头市疾病预防控制中心 广东汕头 515041）

1 前言

临床中借助实验室检测技术可以从横断面样本当中直接实现艾滋病病毒（HIV）的感染样本，并实现对新发感染率的实验室估算，操作成本较低且快速、便捷，可以及时获得检测结果数据，相对于队列研究与数学模型方式具备更加突出的应用价值[1]。在各种实验室检测方法当中，近些年亲和力检测方法具备比较突出的关注度，其原理主要是基于抗原亲和力的情况对已分期感染、新近感染情况进行判断。因为亲和力的高低属于抗原本身的特性，所以这一种方式的影响因素并不多[2-3]。为了进一步提高HIV-1新发感染的判断能力，本文基于部分样本探讨检测HIV-1新发感染的限制性抗原亲和力方法的重复性与稳定性评价。

2 资料与方法

2.1 一般资料

在2017年4月—2019年6月开展研究，以我市213例HIV-1相关样本进行研究。

本次研究试剂盒使用美国SEDIA公司的LAg-Avidity限制性抗原亲和力酶联免疫试验试剂盒，亲和力试剂盒通过冷藏与冷冻2种包装构成。考核盘：（1）KH-LAg-25A，应用于考核试剂盒的重复性、稳定性以及批间差，由金豪制药股份有限公司生产；（2）BOCA101。应用考核试剂盒新近感染样本的能力。样本总共213份。其中吸光度≤1.0的样本40份，吸光度＞1.0样本173份。

重复性：主要是检测精密度。实验室结果相关性、不同实验员结果相关性。

稳定性：借助热稳定实验的方式将酶结合物与酶联板放置在37℃环境下7 d，并和4℃储存的酶结合物与酶联板进行对比，双孔检测KH-LAg-25A当中样本，OD值以均数（ODn值）进行对比。

准确度：基于初筛后确认的实验方式，检测BOCA101。

2.2 观察指标

统计限制性抗原亲和力方法重复性、稳定性、准确度。

3 结果

所有样本的标化吸光度值与变异系数＜15%，实验员与实验室试验结果的相关系数在0.99以上，孔间精密度最小值为3.85%，不同批次试剂批间差结果中只有3份样本CV值超过15%。37℃下放置7 d与4℃下储存的酶结合物与酶联板方面的ODn值差异不明显，国际标准盘评价结果和预期值相当。试剂盒的质控品和校准品的重复性结果比对见表1、2。实验室结果与不同实验员结果见图1。

表1 质控品和校准品的OD值检验结果对比

表2 质控品和校准品的ODn值检验结果对比

图1 实验室结果与不同实验员结果对比

4 讨论

限制性抗原亲和力酶联免疫试验属于BED之后可能被广泛应用于HIV-1新发感染检测的实验室方式，这一种方式本身的特征非常明显，整体应用效果较好。基于推广后的应用情况，需要对实验室技术人员开展针对性、系统化的培训教育[4]。另外，虽然限制性抗原亲和力酶联免疫试验具备较好的重复性，但是检测原理本身决定了这一种方式对于反应条件具备比较高的敏感性，同时孵育的时间、温度的控制要求也比较高。和BED方式相比，对于实验过程中的步骤要求相对较高，尤其是对于温度与时间的精准性要求较高，随意在具体操作期间需要严格根据说明书中的内容进行操作[5]。所以在实验开始之前，需要先做好约5次的预实验判断方式，必须熟练掌握整个实验操作的过程。在检测开始之前除了需要实行常规酶联免疫试验所需要的设备配备，还需要配备定时器与孵育箱。在预实验期间做好仪器设备的调整，保障预实验结果中CV值在15%内可以开展大量样本的检测。另外，在试剂盒投入大批量生产之后，需要严格落实质量控制措施，构建血清学样阳样本构成的新发感染血清盘，针对试剂的灵敏度以及特异性进行针对性的控制，从而确保群体监测中方法的可行性。

国外研究显示，LAg受疾病状态的影响小，对艾滋病患者误判率低，不同人群窗口期差异性不大，对既往感染的误判率较BED低[6]。本次研究结果充分证明限制性抗原亲和力酶联免疫试验对于HIV-1新发感染患者具备较高的检测效果，并且这一种方式具备理想的重复性，在技术培训之后实验人员可以准确掌握试验检测方式，在不同实验室当中均可以得到可信的实验结果，稳定性好、准确度高，可以作为HIV新发感染的检测方式。

综上所述，HIV-1新发感染限制性抗原亲和力方法具备显著的稳定性、重复性以及准确性，适合推广普及。